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高通量测序技术平台流程及应用.ppt

上传人:精品资料 文档编号:10298893 上传时间:2019-10-28 格式:PPT 页数:10 大小:979KB
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1、Illumina Genome Analyzer系统应用方向,DNA Fragment文库测序 DNA Mate-pair文库测序 Small RNA测序 数字化表达谱测序 转录组测序 DNA甲基化测序 ChIP-seq Meta-Genomics DNA测序 血浆微量DNA测序,基因组DNA的随机打断 DNA片段的末端修复 将A碱基加入到DNA片段的3末端 在DNA片段的末端加上特定接头 PCR扩增连上接头的DNA片段 文库检测 DNA在Cluster Station的成簇扩增 Illumina Genome Analyzer上的测序 生物信息组装/分析,Illumina DNA Fragm

2、ent文库测序流程,Illumina Mate-pair文库测序流程,基因组DNA随机打断特定大小片段(2-10kb范围可选) 末端修复 生物素标记 环化 获得来自大片段两端共计400-600 bp的DNA片段 修饰、加接头 PCR扩增连上接头的DNA片段 文库检测 DNA在Cluster Station上的成簇扩增 Illumina Genome Analyzer上的测序 生物信息组装/分析,Illumina Small RNA测序流程,从总 RNA中分离 small RNA 5接头连接和纯化 3接头连接纯化 RT-PCR扩增 Small RNA文库的纯化 文库的检测 DNA在Cluster

3、 Station成簇扩增 Illumina Genome Analyzer上的测序 生物信息学分析,Illumina 数字化表达谱测序流程,mRNA的分离和cDNA第一链的合成 cDNA第二链的合成 限制性内切酶NlaIII的酶切 连接GEX NlaIII Adapter 1 限制性内切酶 MmeI 的酶切 连接GEX Adapter 2 Adapter连接cDNA产物和PCR富集 文库的检测 DNA在Cluster Station上的成簇扩增 Illumina Genome Analyzer上的测序 生物信息学分析,Total RNA的DNase I 酶消化 mRNA 分离和随机打断 cDN

4、A第一链和第二链的合成 DNA片段的末端修复 将“A”碱基加入到DNA片段的3末端 在DNA片段的末端加上特定接头 PCR扩增连上接头的DNA片段 文库的检测 DNA在Cluster Station上的成簇扩增 Illumina Genome Analyzer上的测序 生物信息学分析,Illumina 转录组测序流程,基因组DNA随机打断 DNA片段的末端修复 将 A 碱基加入到 DNA片段的3末端 DNA片段末端加上特别处理的甲基化接头 重亚硫酸盐处理 去盐处理 PCR扩增连上接头的DNA片段 文库检测 DNA 在Cluster Station上的成簇扩增 Illumina Genome A

5、nalyzer上的测序 生物信息学分析,Illumina DNA甲基化测序流程,染色质免疫共沉淀 目的DNA片段 DNA片段的末端修复 将 A 碱基加入到 DNA片段的3末端 DNA片段末端加上接头 PCR扩增加上接头的DNA片段 文库检测 DNA在Cluster Station成簇扩增 Illumina Genome Analyzer上的测序 生物信息学分析,Illumina ChIP-seq测序流程,Meta基因组的提取 DNA随机打断 DNA片段末端修复 将A碱基加入到DNA片段的3末端 在DNA片段的末端加上接头 纯化连接产物 PCR扩增连上接头的DNA片段 文库的检测 DNA在Cluster Station的成簇扩增 Illumina Genome Analyzer上的测序 生物信息组装/分析,Illumina Meta-Genomics DNA测序流程,收集10-15ml孕妇外周血 提取血浆中游离DNA Q-PCR定量总DNA含量 构建DNA文库 Agilent和Q-PCR检测文库浓度 Cluster制备和Genome Analyzer上的测序 Pipeline 和Eland分析 计算每条染色体的Z-score值,Illumina 血浆微量DNA测序流程,

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