1、第 12卷 第 2期 中 华 男 科 学 杂 志 Vol. 12 No. 22006年 2月 National Journal of Andrology Feb. 2006 论 著 中 国 维 吾 尔 族 男 性 CYP17基 因 多 态 性 与前 列 腺 癌 发 生 的 关 系古 力 米 热 1 , 王 军 起 2 , 张 洁 祥 1 , 邓 刚 1(1.乌 鲁 木 齐 市 友 谊 医 院 泌 尿 外 科 , 新 疆 乌 鲁 木 齐 830049; 2.徐 州 医 学 院 附 属 医 院 泌 尿 外 科 , 江 苏 徐 州 221002)摘 要 : 目 的 : 探 讨 维 吾 尔 族 男 性
2、 CYP17基 因 多 态 性 与 前 列 腺 癌 发 生 危 险 性 的 关 系 。 方 法 : 收 集 31例 前 列 腺 癌患 者 和 104例 对 照 组 的 血 液 标 本 并 提 取 DNA,设 计 引 物 ,通 过 PCR扩 增 包 括 基 因 多 态 位 点 的 片 段 ,用 限 制 性 内 切 酶M spA1 I进 行 酶 切 ,产 物 在 2%琼 脂 糖 凝 胶 上 电 泳 ,确 定 CYP17基 因 的 3种 基 因 型 ,即 A1 /A1、 A1 /A2、 A2 /A2,并 经 测序 证 实 ,同 时 测 定 血 清 标 本 中 前 列 腺 特 异 性 抗 原 ( PS
3、A )含 量 。 结 果 : 基 因 型 A1 /A2、 A2 /A2频 数 与 A1 /A1比 较 ,A1 /A2和 A2 /A2在 前 列 腺 癌 中 的 频 数 与 对 照 组 相 比 ,其 OR值 分 别 为 1. 49和 2. 87, P值 分 别 为 0. 321和 0. 052,肿 瘤 组3种 基 因 型 间 的 PSA 值 差 异 无 显 著 性 。 而 对 照 组 中 A1 /A2组 的 PSA 值 高 于 A1 /A1组 ,但 差 异 无 显 著 性 ( P =0. 062) ,而 A2 /A2组 显 著 高 于 A1 /A1组 ( P = 0. 018)。 结 论 : A
4、2 /A2基 因 型 在 前 列 腺 癌 中 的 频 数 有 显 著 高 于 对 照组 的 趋 势 ,提 示 A2 /A2基 因 型 可 能 与 维 吾 尔 族 男 性 前 列 腺 癌 发 生 危 险 性 之 间 有 密 切 关 系 ,而 对 照 组 中 A2 /A2基 因型 组 的 PSA值 的 显 著 增 高 也 支 持 了 这 一 观 点 。关 键 词 : 前 列 腺 癌 ; CYP17基 因 ,多 态 性 ; 维 吾 尔 族中 图 分 类 号 : R737. 25 文 献 标 识 码 : A 文 章 编 号 : 100923591 (2006) 0220120203Associatio
5、n between the Polymorphism of CYP17 Gene and Risk of Prostate Cancer in Chinese VigursM enGUL IM i2re1 , WANG Jun2qi2 , ZHANG J ie2xiang1 , DENG Gang11. D epa rtm en t of U rology, F riendship Hospital of W ulum uqi C ity, W ulum uqi, X injiang 830049, China; 2. D epart2m ent of U rology, the A ffil
6、ia ted Hospital of X uzhou M edical College, X uzhou, J iangsu 221002, ChinaCorrespondence to: GUL I M i2re, E2m ail: gonglili999126. comAbstract: O bjective: To investigate the association between the polymorphism of CYP17 gene and risk of p rostate cancer in ChineseV igurs men. M ethods: A case2co
7、ntrol study including 31 patients with p rostate cancer and 104 aged2matched controls was conduc2ted. The polymorphism was investigated by PCR using DNA from peripheral blood lymphocytes. The transition ( T C) in the risk allele(A2) p roduced a new recognition site for the restriction enzymeM SPA I
8、. Three genotypes of CYP17 gene (A1 /A1, A1 /A2, A2 /A2)were determ ined and confirmed by sequencing. Resu lts: Compared with male A1 / A1 genotype, the odds ratios were 1. 49 and 2. 87for the A1 /A2 and A2 /A2 genotypes( P = 0. 321, 0. 052, respectively). Comparision among 3 subgroup s ( division b
9、y genetypes) ofp rostate cancer patients, the PSA levels were not significantly different. But in the controls, PSA levels in A1 /A2 group were higherbut not significant than those in A1 /A1 group ( P = 0. 062). Then, PSA levels in A2 /A2 group were significantly higher than those A1 /A1 group ( P =
10、 0. 018). Conclusion: More frequency of A2 /A2 genotype in p rostate cancer than in the control may be associatedwith the morbidity of p rostate cancer in V igurs male population. Meanwhile, the significant high PSA levels in A2 /A2 group also sup2021 收 稿 日 期 : 2005203228; 修 回 日 期 : 2005207211基 金 项
11、目 : 新 疆 维 吾 尔 自 治 区 少 数 民 族 科 技 骨 干 人 才 科 研 专 项 基 金 (2001230)作 者 简 介 : 古 力 米 热 (19612) ,女 ,新 疆 乌 鲁 木 齐 市 人 ,主 任 医 师 ,医 学 学 士 ,从 事 泌 尿 外 科 专 业 及 前 列 腺 癌 研 究 。通 讯 作 者 : 古 力 米 热 , E2mail: gonglili999126. com 1994-2011 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http:/port t
12、he view. N a tl J A ndrol, 2006, 12 (2) : 1202122Key words: p rostate cancer; CYP17 gene, polymorphism; V igursCYP17基 因 是 一 种 与 性 激 素 合 成 密 切 相 关 的 基因 ,在 其 5启 动 子 区 的 翻 译 起 始 点 上 游 的 第 34个 碱基 处 存 在 着 一 个 T C (等 位 基 因 A1 等 位 基 因A2)的 多 态 性 位 点 ,当 等 位 基 因 A2存 在 时 ,被 认 为可 以 增 加 基 因 的 转 录 效 率 ,从 而 提 高 酶
13、的 活 力 ,促 进性 激 素 包 括 睾 酮 的 合 成 ,增 加 前 列 腺 癌 发 生 的 危 险性 。 我 们 收 集 31例 前 列 腺 癌 患 者 和 104例 对 照 组 血液 标 本 并 提 取 DNA进 行 了 对 照 研 究 ,现 报 告 如 下 。1 资 料 与 方 法1. 1 临 床 资 料 2001年 6 9月 收 集 本 院 诊 治 过 的新 疆 维 吾 尔 族 前 列 腺 癌 患 者 31例 ,年 龄 58 80岁 ,平 均 67. 4岁 ,均 经 病 理 证 实 。 对 照 组 104例 ,为 我 院同 期 维 吾 尔 族 健 康 体 检 者 ,年 龄 48 8
14、7岁 ,平 均63. 9岁 ,均 经 PSA测 定 ,超 声 检 查 或 CT、 MR I检 查 和直 肠 指 检 排 除 前 列 腺 癌 变 。1. 2 方 法1. 2. 1 DNA提 取 经 患 者 同 意 ,抽 取 外 周 静 脉 血 ,分 离 白 细 胞 , DNAzol法 提 取 DNA, - 20 保 存 。1. 2. 2 PCR反 应 所 有 的 DNA标 本 混 合 编 号 进 行实 验 。 根 据 基 因 序 列 设 计 的 引 物 序 列 为 F: 5 2CAT2TCGCACTCTGGAGTC23 , R: 5 2 AGGCTCTTGGGG2TACTTG23 , PCR产
15、物 片 段 的 大 小 为 414 bp,其 中 包括 了 基 因 的 多 态 位 点 ,当 该 位 点 的 碱 基 由 T C时 ,可 以 被 限 制 性 内 切 酶 M spA1 所 识 别 ,从 而 将 该 片段 切 开 成 为 124 bp和 290 bp两 个 片 段 。 PCR反 应体 系 为 25 l,包 括 DNA 模 板 约 100 ng,引 物 10pmol, 1. 5 mmol的 MgCl2 , 200 mol的 dNTPs, 1 U的Taq DNA聚 合 酶 。 PCR产 物 在 2%的 琼 脂 糖 凝 胶 上电 泳 确 证 。1. 2. 3 酶 切 反 应 及 基 因
16、 多 态 性 将 PCR产 物 进 行酶 切 。 10 l酶 切 体 系 :牛 血 清 白 蛋 白 10 ng, 10 NE缓 冲 液 1 l,内 切 酶 M spA1 5 U, PCR产 物 300 ng。酶 切 反 应 在 Eppendorf管 中 进 行 , 37 反 应 过 夜 。2%的 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 鉴 定 。1. 2. 4 测 序 随 机 选 取 3种 基 因 型 PCR产 物 各 2份 ,进 行 序 列 测 定 ,结 果 用 Om iga 2. 0软 件 与 Gen2Bank中 CYP17基 因 序 列 比 较 。1. 2. 5 PSA测 定 采 用 酶 联 免 疫
17、 法 ( EL ISA法 )测定 ,分 别 测 定 游 离 PSA ( fPSA )和 总 PSA ( tPSA)值 ,计算 fPSA / tPSA值 。1. 3 统 计 学 分 析 采 用 SPSS 12. 0和 Ep i 6. 0统 计软 件 ,用 2检 验 及 t检 验 ,并 计 算 出 OR值 和 95%的可 信 区 间 (95% C I)。2 结 果2. 1 维 吾 尔 族 CYP17基 因 多 态 性 与 前 列 腺 癌 发 生危 险 性 的 关 系 实 验 发 现 PCR产 物 酶 切 结 果 呈 现出 3种 状 态 ,即 未 切 开 、 部 分 切 开 及 全 部 切 开 ,说
18、 明该 基 因 存 在 着 3种 基 因 型 ,即 A1 /A1、 A1 /A2和 A2 /A2 (图 1)。 3种 基 因 型 在 前 列 腺 癌 及 对 照 组 中 的 例数 及 比 例 见 表 1。图 1 CYP17基 因 限 制 性 酶 切 片 段 的 电 泳 结 果M: DNA标 准 ; 1、 3: A1 /A1基 因 型 ; 4, 6: A1 /A2基 因 型 ; 2、 5: A2 /A2基 因 型Figure 1. M spA1 restriction fragments of CYP17 gene by agar2ose gel eletrophoresisM: DNA mar
19、ker; Lane 1, 3: genotype A1 /A1; Lane 4, 6: genotype A1 /A2; Lane 2, 5: genotype A2 /A2表 1 CYP17基 因 多 态 性 与 前 列 腺 癌 危 险 性 的 关 系 n ( % ) Table 1. Relationship between polymorphism s of CYP17 and riskof p rostate cancerGenotypes PCa(n = 31)Control( n = 104) OR 95% C I PA1 /A1 6 (19) 33 (32) 1. 00A1 /A
20、2 13 (42) 48 (46) 1. 49 0. 51 4. 32 0. 321A2 /A2 12 (39) 23 (22) 2. 87 0. 94 8. 75 0. 0522. 2 前 列 腺 癌 与 对 照 组 CYP17基 因 的 3种 基 因 型之 间 PSA的 差 异 结 果 见 表 2。2. 3 测 序 结 果 3种 基 因 型 PCR产 物 进 行 序 列 测定 并 与 GenBank中 CYP17基 因 比 对 ,碱 基 改 变 与 酶切 结 果 吻 合 。3 讨 论研 究 发 现 ,前 列 腺 癌 的 发 病 具 有 明 显 的 种 族 差异 ,不 同 种 族 、 地 域
21、 人 群 前 列 腺 癌 的 发 病 率 有 着 巨 大121第 2期 古 力 米 热 等 中 国 维 吾 尔 族 男 性 CYP17基 因 多 态 性 与 前 列 腺 癌 发 生 的 关 系 1994-2011 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http:/表 2 前 列 腺 癌 及 对 照 组 CYP17基 因 的 3种 基 因 型 之 间 的PSA的 差 异 ( g/L)Table 2. The differences of PSA among genotypes of CYP
22、17 genein p rostate cancer and control group s( g/L)GenotypesPCan x sControln x sA1 /A1 6 20. 91 19. 80 33 1. 56 0. 92A1 /A2 13 18. 65 17. 64a 48 2. 12 1. 49cA2 /A2 12 51. 03 46. 05b 23 2. 94 2. 05d与 A1 /A1组 比 较 , a: P = 0. 872; b: P = 0. 20; c: P = 0. 062;d: P = 0. 018Compared with the A1 /A1 group
23、, a: P = 0. 872; b: P = 0. 20; c:P = 0. 062; d: P = 0. 018的 差 异 ,发 病 率 相 差 可 达 数 十 倍 1 ,维 吾 尔 族 的 饮 食习 惯 以 羊 、 牛 肉 及 其 他 高 脂 肪 、 高 蛋 白 的 食 物 为 主 。有 研 究 发 现 高 脂 肪 、 高 蛋 白 饮 食 的 男 性 ,其 体 内 的 睾酮 水 平 高 于 低 脂 肪 、 高 纤 维 饮 食 者 2 ,而 睾 酮 在 前 列腺 的 生 长 发 育 中 及 前 列 腺 增 生 和 前 列 腺 癌 的 发 生 中起 着 决 定 性 作 用 ,因 此 ,从 这
24、 个 角 度 来 说 ,维 吾 尔 族男 性 是 前 列 腺 增 生 及 前 列 腺 癌 的 高 危 人 群 。既 往 研 究 发 现 17 羟 化 酶 和 17、 20裂 解 酶 是 细胞 色 素 P450c17 酶 的 两 种 同 工 酶 ,在 人 体 性 激 素 的合 成 中 起 非 常 重 要 的 作 用 。 20世 纪 80年 代 ,研 究人 员 将 编 码 细 胞 色 素 P450c17 酶 的 基 因 命 名 为CYP17基 因 ,定 位 于 10号 染 色 体 上 ,并 利 用 传 统 的克 隆 法 测 出 了 其 全 长 序 列 。 由 于 在 CYP17基 因 的5启 动
25、子 区 碱 基 序 列 中 存 在 着 一 个 非 常 重 要 的 多 态位 点 ,当 该 位 点 的 碱 基 从 T C,即 出 现 A2等 位 基 因时 ,被 认 为 可 以 增 加 基 因 的 转 录 效 率 ,从 而 提 高 酶 的活 性 ,增 加 性 激 素 的 合 成 ,与 前 列 腺 癌 的 发 生 有 密 切关 系 。 Lunn等 3 报 告 了 在 携 带 有 A2等 位 基 因 的 基因 型 的 白 人 中 ,发 生 前 列 腺 癌 的 危 险 性 显 著 增 加 。Gsur等 4 也 发 现 在 A2 /A2基 因 型 人 群 中 发 生 前 列腺 癌 的 危 险 性 明
26、 显 增 加 ,且 年 龄 66岁 以 上 者 ,危 险性 更 高 。我 们 从 遗 传 基 因 角 度 ,用 分 子 生 物 学 的 方 法 ,分析 了 CYP17基 因 与 前 列 腺 癌 的 关 系 。 发 现 CYP17基 因 具 有 3种 多 态 基 因 ,其 中 A1 /A1基 因 型 为 野 生型 ,而 A1 /A2和 A2 /A2基 因 型 为 多 态 变 化 基 因 型 ,从 理 论 上 讲 , A2等 位 基 因 的 出 现 可 以 增 加 基 因 的 转录 、 翻 译 功 能 ,使 得 性 激 素 的 合 成 增 加 ,特 别 是 雄 激素 水 平 的 升 高 尤 为 明
27、 显 ,这 又 是 增 加 前 列 腺 癌 发 生的 因 素 。 因 此 ,我 们 研 究 了 A2 /A2基 因 型 在 前 列 腺癌 中 的 频 率 ,并 与 对 照 组 比 较 ,发 现 基 因 型 A1 /A2在 前 列 腺 癌 中 的 出 现 与 对 照 组 无 显 著 差 异 ( P =0. 321) ,而 基 因 型 A2 /A2在 前 列 腺 癌 中 的 频 率 有 显著 高 于 对 照 组 的 趋 势 ( P = 0. 052) ,由 于 前 列 腺 癌 组的 病 例 数 较 少 ,随 着 病 例 数 的 增 加 ,这 种 差 异 性 可 能会 更 加 明 显 ,这 说 明
28、A2 /A2基 因 型 增 加 了 维 吾 尔 族男 性 前 列 腺 癌 发 生 的 危 险 性 。PSA是 目 前 进 行 前 列 腺 癌 筛 查 的 主 要 指 标 ,我们 将 104例 对 照 组 人 群 的 PSA 值 按 基 因 型 分 组 比较 ,发 现 A1 /A2基 因 型 组 与 A1 /A1基 因 型 组 之 间 无显 著 差 异 ,而 A2 /A2基 因 型 组 显 著 高 于 A1 /A1组 ,这 间 接 支 持 了 CYP17基 因 的 A2 /A2多 态 基 因 型 与前 列 腺 癌 的 发 生 有 明 显 的 相 关 性 。参 考 文 献 1 刘 建 河 ,李 鸿
29、 伟 ,王 军 起 ,等 . 北 方 汉 族 人 群 维 生 素 D受 体 基因 B sm I位 点 多 态 性 与 前 列 腺 癌 易 感 性 的 相 关 性 分 析 J .中 华 男 科 学 , 2003, 9 (6) : 4132416. 2 Adlercreutz H. W estern diet and western diseases: some hormonaland biochem ical mechanism s and associations J . Scand J ClinLab Invest, 1990, 201 ( Supp l) : 3223. 3 Lunn RM
30、, Bell DA, Mohler JL, et al. Prostate cancer risk andpolymorphism in 17 hydroxylase ( CYP17 ) and steriod redutase( SRD5A2) J . Carcinogenesis, 1999, 201 (9) : 172721731. 4 Gsur A, Bernhofer G, H interegger S, et al. A polymorphism inthe CYP17 gene is associated with p rostate cancer risk J . Int JC
31、ancer, 2000, 87 (3) : 4342437.(王 书 奎 编 发 )重 要 启 事 中 华 男 科 学 杂 志 2006年 第 1期 起 由 80页 增 加 至 96页为 了 适 应 我 国 男 科 学 飞 速 发 展 的 趋 势 ,及 时 发 表 国 内 外 男 科 学 及 其 相 关 专 业 的 最 新 研 究 成 果 和 临 床 经验 的 总 结 体 会 ,加 快 稿 件 发 表 周 期 ,经 上 级 主 管 部 门 批 准 , 中 华 男 科 学 杂 志 从 2006年 第 1期 起 由 80页 增加 至 96页 ,欢 迎 赐 稿 和 订 阅 。 中 华 男 科 学 杂 志 编 辑 部221 中 华 男 科 学 杂 志 2006年 2月 第 12卷 1994-2011 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http:/
