1、元宝枫叶有效成分动态变化的研究 王兰珍 1) 3 3 马希汉 1) 王姝清 1) 王性炎 2)(1)西北林学院基础课部 ,712100 陕西 杨陵 ;2)西北林学院园林系 ;第一作者 :女 ,26 岁 ,硕士 )摘 要 研究了元宝枫叶中总黄酮和绿原酸含量随月份和树龄的动态变化规律。结果表明 :元宝枫叶中 6 月份绿原酸含量最高 (4. 83 %) ,8 月份总黄酮含量最高 (5. 79 %) ;就不同树龄而言 ,1 年生植株绿原酸含量最高 ,可达 6. 99 % ,而 5 年生植株总黄酮含量最高 ,可达 7. 26 %。关键词 元宝枫 ;叶 ;黄酮 ;绿原酸 ;动态变化分类号 Q501 S79
2、2. 35元宝枫 ( A cer t runcat um Bunge)为槭树科 (Aceraceae) 槭树属植物。元宝枫的根和根皮具有祛风除湿之功效 ,用于治疗关节疼痛、骨折、跌打损伤等症 ;元宝枫幼芽具有抗炎症活性 1 3 ;元宝枫果壳单宁具有镇静、催眠、镇痛、抗血凝和止泻等作用。研究发现元宝枫叶中含有多种具有生物活性的成分 ,如黄酮、绿原酸、强心甙、鞣质、多糖等 4 。为了合理有效地利用叶中的有效成分 ,探讨药理活性与有效成分之间的关系 ,我们对其中两种含量较高的有效成分 黄酮和绿原酸的动态积累变化进行了研究 ,以确定含量最高的月份和树龄 ,为元宝枫叶的开发利用提供科学依据。1 材料与方
3、法1. 1 材料元宝枫叶中黄酮含量的月份变化材料采自于陕西省林校 (35 年生 ) ,从 4 月份至 11 月 ,每月 26 日采回叶子 ,105 烘 20 25min ,60 70 恒温烘干、粉碎备用。叶中绿原酸含量月份变化材料取自于西北林学院元宝枫实验地 (5 年生 ) ,元宝枫叶中两种有效成分含量随树龄变化材料于 1996 年 8 月 26 日采自西北农业大学、西北林学院和陕西省林校 ,处理方法同上。1. 2 测定方法1. 2. 1 元宝枫叶中黄酮含量的测定 参照文献 5 7 ,以芦丁为标样 ,50 %乙醇为提取溶剂 ,采用亚硝酸钠 - 硝酸铝比色法测定叶中黄酮的含量。标准曲线 Y =
4、11. 42 X + 0. 002 ( Y 为消光值 , X 为芦丁浓度 mg/ ml , r = 0. 999 9)1. 2. 2 元宝枫叶中绿原酸含量的测定 测定绿原酸的方法很多 ,如毛细管电泳法、高压液相色谱法、薄层扫描法、可见和紫外分光光度法等。其中紫外分光光度法简易省时 ,结果可靠 ,它西北林学院学报 1997 ,12 (4) :68 71Journal of Northwest Forestry College 收稿日期 1997 08 133 林业部“元宝枫开发利用技术中试项目”内容之一3 3 现在北京林业大学资源学院工作是根据绿原酸在波长 324nm 处有一最大吸收值来进行含量
5、测定的。测定时可用乙醇或 0. 2mol/ L 盐酸作溶剂将植物中的绿原酸提取出来 ,然后在 324nm 波长下进行比色 ,求出绿原酸的含量。有时为了排除杂质的干扰 ,除对植物样品进行脱脂处理外 ,可在比色前对绿原酸进行层析分离。在对元宝枫叶中的绿原酸进行测定的方法比较中 ,发现乙醇提取物中其它杂质在324nm 处对绿原酸无干扰。另外 ,还发现 ,用乙醇进行提取比用 0. 2mol/ L 盐酸所得的提取物稳定 ,故采用乙醇为提取溶剂。具体方法如下 :精密称取元宝枫叶粉末 3. 0g ,置于索氏提取器中 ,先以氯仿回流 12h ,除去脂溶性成分 ,再以 95 %乙醇回流直至提尽绿原酸 (用毛细管
6、吸取提取器中提取液 ,滴于滤纸上 ,待溶剂挥散后 ,置荧光灯下观察 ,至不显示荧光为止 ,一般需 810h) ;将提取液减压浓缩回收乙醇后转入 50ml 容量瓶内 ,用 95 %乙醇定容 ;用微量注射器分别吸取 50 l、 100 l 于 5ml 容量瓶内 ,定容后在 324nm 波长处测定消光值 ,用标准曲线计算。最后测定结果都是 3 次平行取样、 3 次重复测定所得 9 个数据的平均值。标准曲线 :将绿原酸标准品配制成不同浓度的乙醇溶液后测定消光值 ,绘制标准曲线 : Y= 42. 176 97 X + 0. 010 3 ( Y 为消光值 , X 为浓度 mg/ ml , r = 0. 9
7、99 5)2 结果与分析2. 1 元宝枫叶中黄酮与绿原酸含量随月份的动态变化2. 1. 1 黄酮随月份的动态变化 元宝枫叶中黄酮类化合物随月份的动态变化结果见表 1。由表 1 可以看出 ,从 4 月份元宝枫开始发芽长叶到 6 月份枝叶茂盛 ,叶中总黄酮含量一直在增加 ,到 6 月份出现第一次高峰 ,7 月份含量有所下降 ,8 月份达到全年最高值 ,随后一直到 11 月份落叶 ,总黄酮含量随月份增加而降低。由此可见 8 月份叶中总黄酮含量最高 ,从 4 月到 10月份 ,元宝枫叶中的总黄酮含量基本呈上升趋势 ,这与银杏叶中总黄酮含量动态变化规律基本一致 ,但银杏叶中 9 月份黄酮含量最高 6 。
8、表 1 元宝枫叶中不同月份总黄酮的含量变化Table 1 Seasonal variations of the contents of flavonoids in the leaves of A . t runcat um月 份 4 月 5 月 6 月 7 月 8 月 9 月 10 月 11 月含量 (每 100g 干叶所含总黄酮的克数 ) 2. 55 4. 14 5. 46 3. 15 5. 79 5. 01 5. 00 3. 922. 1. 2 绿原酸随月份的动态变化 元宝枫叶中绿原酸含量随月份的动态变化结果见表 2。表 2 不同月份元宝枫叶中绿原酸含量变化Table 2 Seasonal
9、 variations of the contents of chlorogenic acid in the leaves of A . t runcat um月份 4 月 5 月 6 月 7 月 8 月 9 月 10 月 11 月含量 ( %) 2. 18 2. 18 4. 83 3. 54 3. 38 1. 96 1. 69 1. 72以上结果表明 ,从 4 月份到 6 月份 ,元宝枫叶中绿原酸含量随月份增加而呈上升趋势 ,到6 月份含量达最高值 (4. 83 %) ,之后随月份增加而含量降低 ,到 11 月份近落叶时又有所回升 ,但幅度很小。因此 ,6 月份是元宝枫叶绿原酸含量最高的月份
10、。在各种植物中 ,虽然绿原酸的存在相当普遍。但含量较高的植物并不多见 ,外国供提取绿原酸的主要原料为生咖啡豆 ,含量为 6. 3 %左右。在我国前人研究认为 ,金银花的花蕾中含有绿原酸。金银花为忍冬科植物忍冬 ( L onicera japonica Thumb) 的干燥花蕾 ,系临床用的一味中药。根据宋广运等的测定结果 ,忍冬不同器官绿原酸含量为 :根 1. 4 % ,茎 0. 92 % ,叶964 期 王兰珍等 元宝枫叶有效成分动态变化的研究 2. 57 % ,花蕾 5. 81 % 10 。丁济等研究认为忍冬属植物的花、蕾中绿原酸的含量 ,不仅随品种的不同而不同 (1 % 11 %) ,而
11、且同种之间也存在差异 ,色泽正常的金银花中绿原酸含量约为5 % 8 。近年研究发现 ,杜仲叶中富含绿原酸 ,并认为是其药用有效成分之一。本研究所发现的绿原酸在元宝枫叶中的大量存在 ,为富含绿原酸的植物家族又增加了新的资源。鉴于富含绿原酸的植物多具医用价值 ,故认为可以借鉴它们对元宝枫叶进行药用开发 ,也可考虑将它作为提取绿原酸和富含绿原酸药物的一种植物材料。将黄酮与绿原酸两种成分综合起来探讨其随月份变化的规律 ,由图 1 看出 ,4 月到 5 月随树体生命活动的加强 ,两种有效成分的含量都在增加 ,到 6 月份都基本达到全年的较高水平。图 1 元宝枫叶中两种有效成分的动态变化Fig. 1 Va
12、riations of the contents of flavonoids and chlorogenic acid元宝枫叶中水分随月份的动态变化。从 4 11 月份的 8 个月中 ,叶中水分的含量分别为47. 8 %、 6010 %、 6311 %、 6017 %、 6110 %、 5910 %、 5511 %、 4912 %。可以看出 ,6 8 月份树叶中的水分含量高 ,此期间叶片发育成熟 ,水分养分供应充足 ,树势旺盛 ,酶的活性强 ,有效成分的生物合成保持在较高水平。 9 月份以后 ,树木生长减慢 ,用于合成有效成分的底物减少 ,其含量下降。2. 2 元宝枫叶中黄酮与绿原酸随树龄的动
13、态变化2. 2. 1 黄酮随树龄的变化 元宝枫叶中黄酮类化合物的含量随树龄的变化情况见表 3。表 3 不同树龄元宝枫叶中的总黄酮含量变化Table 3 Comparison of the contents of flavonoids in the leaves of A . t runcat um with different ages树龄 (a) 1 2 5 6 15 28 35含量 ( %) 4. 23 4. 37 7. 26 6. 91 6. 54 6. 17 5. 79由分析结果可以看出 ,1 5 年生元宝枫叶中总黄酮的含量随树龄的增长而升高 ,5 年生树叶中达最高值 ,之后随树龄增长
14、而下降 ,但降低的幅度不大。故以提取黄酮为目的利用树叶时 ,应采集 5 年或大于 5 年生的树的叶 ,此时对树木生长也不会产生太大的影响。元宝枫叶中黄酮含量最高可达 7. 26 % ,而一直被用作提取医用黄酮的植物材料银杏叶中总黄酮的含量最高仅为 4. 0 % 7 ,元宝枫叶中总黄酮的含量是银杏叶的近 2 倍。因此 ,单从总黄酮这一点来说 ,元宝枫叶作为提取医用总黄酮的原料将具有很大的利用价值。2. 2. 2 绿原酸随树龄的变化 元宝枫叶中绿原酸随树龄的增加 ,叶中绿原酸的含量呈下降趋势 ,幼树明显高于老树 ,尤其是 1 年生的树叶中绿原酸的含量高达 6199 %(图 2) 。这一结果与忍冬和
15、杜仲相似。图 2 还表明 ,1 6 年生的元宝枫叶中绿原酸的含量随树龄而降低的幅度较07 西北林学院学报 12 卷图 2 不同树龄元宝枫叶中绿原酸含量变化Fig. 2 Curves of the contents of chlorogenic acidin the leaves of A . t runcat um with different ages大 ;之后随着树龄的增加 ,叶中绿原酸含量趋于稳定 ,减小幅度不大。3 小结大量研究表明 ,植物中有效成分的含量可因植物器官不同而不同 ,与植物的生长环境、生长季节、年龄等也有较大关系 ;不同种类有效成分的积累动态不同 ,同一种有效成分在不同植
16、物中的积累动态也不同 9 。就元宝枫而言 ,叶中黄酮类化合物的含量 8 月份最高 ,绿原酸的含量 6 月份最高。 5 年生植株叶中黄酮含量最高 ,1 年生植株叶中绿原酸含量最高。参 考 文 献1 全国中草药汇编编写组 . 全国中草药汇编 (下册 ) . 北京 :人民卫生出版社 ,1978. 2932 张志英主编 . 陕西中药名录 . 西安 :陕西科学技术出版社 ,1989. 223 2243 江苏中医学院主编 . 中药大辞典 (上册 ) . 上海 :上海科学技术出版社 ,1977. 3944 尉芹 ,王兰珍 ,马希汉等 . 元宝枫叶化学成分初步研究 . 见 :元宝枫开发利用研究 . 西安 :陕
17、西科学技术出版社 ,1996. 22245 庄向平 ,虞杏英 ,杨更生等 . 银杏叶中黄酮含量的测定和提取方法 . 中草药 ,1992 ,23 (3) :122 1246 关红菱 ,刘先林 ,龚坚等 . 不同季节银杏叶中总黄酮的测定 . 中草药 ,1995 ,26 (8) :4457 陈秀珍 . 银杏叶不同生长期总黄酮的含量测定 (简报 ) . 广西植物 ,1988 ,8 (4) :363 3648 丁济 ,李志和 . 14 种金银花中异绿原酸、绿原酸的测定比较 . 中草药 ,1981 ,12 (1) :10 149 王宪楷主编 . 天然药物化学 . 北京 :人民卫生出版社 . 1988. 3
18、210 宋广运 1 忍冬不同器官的绿原酸含量及体外抑菌效果 1 中草药 ,1985 ,12 (1) :10 14A Study on the Seasonal Variations of the BioactiveConstituents in the Leaves of A cer t runcat umWang Lanzhen1) Ma Xihan1) Wang Shuqing1) Wang Xingyan2)( 1) Dept . of Basic Courses , N W FC , Yangli ng , S haannxi ,7121002) Dept . of L andscap
19、e A rchitet ure , N W FC)Abstract The dynamic variations of the contents of flavonoids and cholorogenic acid in the leavesof A . t runcat um were studied. The results showed that the content of cholorogenic acid reaches aculminating point (4. 88 %) in J une , of flavonoids however , in August (5. 79
20、 %) . As for theplants with different ages , 1 year old plants contain the highest amount of choloregenic acid(6199 % ) , and flavonoids contained in 5 year old plants are the highest , it can reach 7126 %.Key words A cer t runcat um Bunge ; leaf ; flavonoids ; cholorogenic acid ; dynamic variation174 期 王兰珍等 元宝枫叶有效成分动态变化的研究
