1、堡壁亟互堡堑盟堡植鐾查里!Q鲞塑塑200l g-!旦中国Alport综合征表型和基因型特征丁洁王芳郭顺华俞礼霞杨霁云50l 著摘要 目的：分析并探讨我国Mport综合缸(As)患者临床表型和基因型特艇。 方法：以铡确诊为As的患者(男32例女18例；if：龄l30岁平均10岁)及部分家系成员的主要临床表现、肾功能榆查结果、家系调查情况、肾活检、以及肾和皮肤活榆组织的基膜Q()链的表达作为临床表型分析素材。应用PCRSSCP和PcR、直接I)N测序的方法筛杳、分析基因突变。 结果：本组病例显小As患者几乎均表现有血尿(96)，多数(84)血尿为肾小球性；伴有蛋白尿或肾病水平蛋白尿的患者分别为82
2、和22。榆测到感音神经性耳聋和跟部病变的患者较国外报道相对低(31和16懈50和15一30)。多数s(82)属于青少年型。94的皮肤活捡西()链染色支持X连锁型AS诊断：COL4A5基冈分析琅不以基冈小突变为主；1例AS患儿基因为大缺失，而n缺失涉灶COIA35和COIAA6两个基因但不伴弥漫性平滑肌瘤。 结论：认识我国s临床表型和基因型特征有助于今后提高井纠正我们对AS认识、诊断乃争治疗水平。关键词 Mpart综台征 临床表型 基因型 刊胶原Features of pI蛐哦yPe aDd辞耐ype in Olinese Alp01t掣nd舢patientsDLVGJirWANG Fang，醴
3、0 Slua吐ma，W?lixia，“cANGmDepartment o厂Pediatrics，FirstHospital，R孵Ungersty，Be4iing，100034Al炼rRAcT(】Il扣：吐ve：Alpon syndrome(AS)is a hereditarydisorder in which mutations are implicated in COTtgA5 geneenwvding a5 ctmin of type n collagen This study aimed to analyze the ehnieal features of Chinese As pati
4、ents and to iden西delelions and mutafiorts of COMA5 gene in Chinese AS patients about wtfich little data is available in the lilelNllre Methodology：FK unrelated Mport syadmme【AS)patients(32 males and 18 fFmales)Wele mlaly日ed At the 5ktlne lime，screening for mutations inaU the exons(1 to 51)of the COI
5、AA5 genecanied out by IRIRSSCP or PCRdirect唧1enanalysis on genomic DNA fmm33 tmrdated patients wlth Xlinked-kS(22 ii,aland 1 1 fenlalesJ Results：aumlysis of the clinical data showed 96of山e mtients prfe,enwdt11 hemamria while阱with gfomemlar hemamfianfi珈刊by urinary RB(：morphologi,-examination Eights-h
6、o perCenl of patients bad pr,Xeinuriaof whom 22with a nephiotie level pmteinuria Hearing impaimaent was detected in 34of patients 1mdertaken pouttorte audiomeny The hearing impairment wan not found parallel with the renal insufficiency()cmdar ahnormalitiesfound in 18of patients examined and were not
7、 dependent oi the m,curring of hearing loss Mrout 82of patients beloraged to juvetfile kindred Ttrere was 32of the patients withoutbxtsitive family ttistory Detection of 05(n)chain inepidermal basementmembrane(EBM)州ppon州the diagnosis of ASin 94ofthe patientswho had skin biopsyPCRsscP analysis showed
8、 a mobility shift in 5 of the 16 patients and 4 female fmnil，meud】ersDNA sequence a_ImJysis revealed 3 nfissertse mutafions(in Px州s 1720 and 26)，2 silent mlflations(in exon 39 and 46)and 1 cA suhstitution(in intron 3)PCR一uthem hybfithzation analysis proved a AS boy with a large deletion of the【)alre
9、d COIAA5 and COIAA6 genes Condmi“：Chinese ASpatients ate characterized ehnieally with hemamria，hea、y proteinuria，and lower ores of both heating less and ocular abnomlalifiesMl】tations in Chinese AS patienm wore predominantly small mlRatfons including 8 large deletion involving the 5rmn of bothCODL5
10、atd COIAA6 genesKey words Mpor【syndrome phenoecpe genotype collagen5T,e lY【基金项目1*【丑家自然科学基金资助项H3977(1780和39970775作者单位北g大学第一医院儿科(北京100“34)冠丘JE裒巾U廿医院肾内科(藕5顺毕)Mport综合征(alwrt syndrome，AS)也称作遗传性进行性肾炎，丰要临床表现为血尿、感音冲经性耳聋、以及进行性肾功能减退。1927年以临床症状综万方数据万方数据量壁煎皇垂趣墅整堕盘查箜l!耋蔓塑地!生12旦大多数(4l50例，占82)均表现有蛋白尿，其中I例2岁男孩蛋白尿达7
11、00m24h，I例5岁男孩蛋白尿达1 022 mg24h；1l50例患者(22)蛋白尿达肾病综合征水平，他们的年龄分布为228岁。本组503患者中仅4例(10)目前显不BUN或SCr异常4例患者3例男性l例女性，年龄分别为1l、15、19和25岁(表2)。Table 2 Clinical maaifesaliaas 0f patie吣训th Aipon syndrome，*篙础m一Re。tta。l警=出警器怒、H F 7SX 15H M 2SR M 5CX M 3ZS M 6ZH M 14、Is M 5Lx M l 5Z M 3取G M 7r 7Qc M 5+ NNeDhr以c Nl删d+G
12、一+ ND+ ND+G ND+ Nephr豳kveI+rLmllokvd+G 一+，G +NeldmmcL倒le+G Nchdn M 13 +G Nephn“chdn I + +耶 14 十 NephauticNNDNDBERSDN NN NND)NDlN M)N NN RelirIal+ NN NS S S + +JS S S ND +，JND ND ND Nn +JS S S +NDND +，JNDND ND ND +，AS S S + 十，JNn ND ND +，JND ND ND + +JND ND NDND ND NDND ND NDNDND NDNDNDNnM)NDND ND ND
13、ND ND +AD +JND +，JND +，JNU +，J一 一 +，A X一 一 + +，J XLAsND ND ND ND +，J XLASND ND ND +XNn ND ND NDNDND ND NDNDm NDND ND ND NI】ND ND ND NDND NrJ ND ND 一 “ND NI)m + +，j X山鸠墙m心宝蚯m川舢似盥似m出鸬mm船MXXXXXAXXXXXXXXXXXXXXJ一+十m+SSSSSSSSSSN。N胁胁M铡、NNm。胁。NNNHHNM+十NNNNNM+n”543m2蛐鸵935扪44强FFFFFFFMH“w洲啉儿吖“皿玎n州n叭驰NNNNNmHN+慧
14、慧|；JJAJJ+NNHNNNYNNNNA万方数据504ZC M 13 +C + n M 22 Ngohmth： LevelLn M 3 + m NYS M 13 + N印lmsic NkveILR M 1 +、G + 1 M J2 + 十 一、C M 】2 + +ND0M M 4 +、C + NI)D(： M 2l + phtotlc NltvelDL M 9 +G Nephrotic Nl肌dL、 M 4 + Nel山mile NlP化lm M 25 + + NNhI。Ii ABkv剖+NDC + NDt； Nep“ofi【- HLoveIND ND+ nlw咖缸Cat呲t+ NNDNRe
15、血nHsL苎鲜趔垡鱼!r塑型塑Iol10生堕2塑ND NDn HD ND NnD NI)ND + 一XL水ut搭XLASD证I ND M 牲4s一一一 + +J X一 ND ND13 D 、lASNDU ND NU XLS+ ND ND ND ND 十、J ”ND ND hD + +J X心NDn ND N J)VD NDD +ND ND Nn +NDD、D NDmL“蟠sGBM乳柑were ireegul盯，with“(帅d thin洲鹏nB alternating or exiensive Ihickening曲】segacatal一6 of the lmlfina densa was s
16、plilerand l蚰_med。Pallents we”pnted by the initial of their nr-G：d胛nll且r hcm皿uria；NG：Bill，dorr蛐d盯hatnalama；_：n删；A：fl“available；s：蝴mcntal；J：juvenile type AS；A：adult呲”AS：xL心：X-link州镰；B：abnom一奉组病例中20例进行r肾穿刺活组织检查：光镜殷常规免疫荧光学检查无特异病变，1920例进行了电镜检查并显示典型的As基膜病变。20例中9例还进 步检测了肾组织基膜中a(n)链的表达，结果均异常：a34()链染色男性均为阴忡，
17、殳性为间断阳性；但l例常染色体隐性遗传型As的女孩西()仅在肾小囊表达，此外在GBM和TBM以及心和科()链表达均为阴胜。23肾外表现在本组接受纯音测听检测的38例患者巾，13例(34)有感音神经性耳聋，他们除1例女性外均为男性；年龄多为10一15岁，但肯1例男孩仅5岁；1013例检测到耳聋时尚未发现肾功能减退：接受眼裂隙灯和或眼底检查者共34例，其中仅发现6例(18)异常：2例(男、女患者各l例年龄分别为25岁和30岁)先天性白内障，4例(均为男性，年龄分别为5、5、】4和2l岁)有视网睦斑点(flecks)：未检测到前圆锥形晶状体。发现眼部南变时，26倒同时也检测到r耳聋，6例患者均不伴有
18、肾功能的异常，但56例均来自于青少年型As家系。50例患者无一例伴有弥漫性平滑肌瘤或血液学异常；但伴发l砸神经纤维瘤、Tumer样综合征及家族性肌营养不良者各l例。4750例(男性29例，女性18例)进行了皮肤穿刺组织标本的a()链染色，结果4647例支持X连锁型As或常染色体隐性遗传刑As的诊断l；皮肤穿刺活组织标本的d()链染色正常的As患者为一男性患者，21岁，但临床表现雨家族史均显不为典型的As。本组病例中，约13(16例)未能问坷、调查或榆测到家系中有发生ESRD的成员，其中1例为常染色体隐性遗传型AS，9例经皮肤穿刺活组织标本的a()链染色证实为AS，6例经肾活检电镜榆查确诊为AS
19、。2 4基因突变特征Lj前已经完成r 33删丸|正者舳NN帅、+。眦眦胁嗽NhNMm+坫385MMMM，-眶睢“mu万方数据竖耻谚!重堑鲎堡堕盘查萤10鲞笙!塑2塑!至垡旦和部分家系成员的全部COlA-A5摹闻的51个外显子的PCR扩增。1633例采用PCR、而后直接测序方法筛查突变，其中1例(患者HY)PCR方法小能扩增到COlA-A5基因巾外显子1，此外其他患者均能用PCR方法扩增到COL4A5基因的所有外显子，这耻505外显子的氲接测序丁作正住进行中。，j外的1633例采用PCRSSCP方法筛查突变，结果5例患者(患者Ybl、I)Y、WZ、I)1和wY)及其部分家系成员的外显子SSCP显
20、示多态性，DNA测序进一步确定J相应突变的性质和位置(表3图1A，B)。Table 3MII嘶5 detectea in COIAA5 gale用PCR方法进一步扩增患者HY的COL4A6基目外显子，发现COIAA6摹凼的外显子13也完伞缺失s()uthem杂交证实患者FlY具有约14kb的大缺失，导致COIAA5基因的外冠子1、COL4A6基因的外显子13以驶两基因间的肩动子完全缺火，估计此大缺失的断点(breakpoint)在COL4A5基因的内含子1至COlA-A6基因的内龠子3日】(图2AC)。3讨 论尽管70多年前已经从临床症状综合征认识并命名了AS，近10年叉对其致病基因的研究和认
21、识取得丁巨人成绩8。但是我困在相应领域起步较晚，因此有必要分析、研究我国As患者及其家系的临床表现和基因突变，“利丁根据我国患者和医疗丁作的实际状况，提高并纠正我们的认汉、诊断乃至治疗水平=通过分析奉组病例，我们认为血尿仍为As患者的土要临床表现，但AS缸尿的RBC形态学检查叮以有少部分患者(本文提示(15的患者)显示为非肾小球性f|I【尿，需引起临床医师的注意。奉组患者中多数血尿并伴有蛋白尿，但蛋白尿达肾病综合征水平者仪占16。本组病例还显示感音神经件耳聋和眼部病，竖的发生率，较罔外撤道相对低(31和16vs50和1530)，提示我们如果以“血尿+耳聋+肾衰家族史”定义AS、并作为判断AS的
22、标准，那么无疑会使一部分AS漏诊。另外本组病例多数患者发现耳聋时肾功能尚正常，提示亦为进行性发展的感音神经性耳聋。在临床上可能可以更敏感地检测到其发牛和发展；本组病例中仍有极少数患者同时伴有耳聋和眼部异常，因此我们建议对怀疑As者务必同时进行纯音测听和眼科检查?本组病例中有3例患者分别伴有另3个遗传性疾病：I型神经纤维瘤、Turner样综合征及家族性肌营养不良，进步的检查显示神经纤维瘤和AS分别由该患儿的父系和母系遗传；家族性肌营养小良和AS家系中这两种疾病在不同了代间没有发现共遗传的现象；而7htrner样综合征患者的核型捡杏正常。由于尚元证据支持这些遗传件疾病与As在基冈水平的关联，因此它
23、们与As很可能是种“ro-incidence”现教。参照ninter等5的标准本组病例中82均属丁青少年型，说明我们的患者发qESRD甲，预后差，更应甲期明确诊断。万方数据“_4i一_自啦!一 吼女册蛐恤口d，mh嘶mb“【Jhc。口。kk_-。HH_r JmL一岫”ItdYHIbIcJ_ul_l忡。黉黼鬻潮。“2：笋罐i“蓄罐。矍算一b蔓_nIf一。II羹葛Ij爨隧震万方数据万方数据万方数据妄，垂耋誊萋蠹兰量蓦善量吾兰重=墓l量：；lj= ：；I=_：=!=：=：=?量；-I-一ii_i=-二量!l_l量=i llI_!_-：量三_Ii!=i量=i墨叠瞄j!_-I=；=-III ii；露=!
24、万方数据中国Alport综合征表型和基因型特征作者： 丁洁， 王芳， 郭顺华， 俞礼霞， 杨霁云作者单位： 丁洁,王芳,俞礼霞,杨霁云(北京大学第一医院儿科,)， 郭顺华(北京中日友好医院肾内科)刊名： 肾脏病与透析肾移植杂志英文刊名： CHINESE JOURNAL OF NEPHROLOGY DIALYSIS 杨霁云;刘景城 免疫荧光学方法检查皮肤组织型胶原5链诊断Alport综合征 1997(04)2.丁洁;姚勇;黄建萍 检测不同组织基底膜型胶原链确定Alport综合征遗传型期刊论文-中华儿科杂志1999(02)3.丁洁;郭顺华;俞礼霞 用PCR-SSCP方法检测中国Alport综合征C
25、OL4A5基因突变期刊论文-中华儿科杂志1999(08)4.Ding J;Yao Y;Liu J Alport svndrome with neurofibromatosis type I:a case report外文期刊 19975.Flinter F;Cameron J;Chantler C Genetics of classic Alport syndrome 19986.Miller SA;Dykes DD;Polesky HF A simple salting out procedure for extracting DNA from humannucleated cells外文期
26、刊 19887.Ausubel FR;Brent R;Kingston R Current protocols in molecular biology 19948.Kashtan CL;Michael AF Alport syndrome外文期刊 19969.Renieri A;GalIi L;Grillo A Major COL4A5 gene rearrangements in patients in patients with Juveniletype Alport syndrome 199510.Van Der Loop FTL;Monnens LAH;Schroder CH Ide
27、ntification of COL4A5 gene defects in Alport ssyndrome by immunohistochemistry of skin外文期刊 199911.Sugimoto M;Oohashi T;Ninomiya Y The genes COL4A5 and COL4A6,coding for basement membrane collagenchains 5( ) and 6( ) ,are ocated head-to-head in close proximity on human chromosome Xq22and COL4A6 is tr
28、anscribed from two alternative promoters外文期刊 1994(91)12.Zhou J;Mochizuki T;Smeets H Deletion of the paired 5( )and 6( )collagen genes ininherited smooth muscle tumors外文期刊 199313.Heidet L;Dahan K;Zhou J Deletions of 5( 5 ) and 6( ) collagen chains associated withsmooth muscle tunours 1995(04)14.Antig
29、nac C;Heidet L Mutations in Alport syndrome associated with diffuse esophagealleiomyomatosis 199615.Weinberg RA Tumor suppressor genes外文期刊 1991本文读者也读过(10条)1. 徐建敏.张琼.周颖明.张士胜.朱彩红 Alport综合征临床分析期刊论文-中国实用眼科杂志2005,23(5)2. 刘清明.冯勃 Alport综合征畸变产物耳声发射测试期刊论文-中国耳鼻咽喉颅底外科杂志2003,9(3)3. 王芳.丁洁 从相关基因突变再看Alport综合征和薄基膜肾
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32、接依赖性探针扩增技术在X连锁Alport综合征基因诊断中的应用期刊论文-中华医学杂志 2012(40)2.佟光明.乔青 Alport综合征表现为肾病综合征1例期刊论文-中国医刊 2004(3)3.贺晓蕾.戴勇.王沙燕.黄瑞芳.石之磷.张阮章 X连锁显性遗传性肾炎一家系相关基因排除定位分析期刊论文-中国医师杂志 2004(11)4.王芳.丁洁.俞礼霞.杨霁云 伴食管平滑肌瘤的Alport综合征基因突变特征期刊论文-肾脏病与透析肾移植杂志2003(3)5.姚勇.杨霁云 小儿泌尿系统疾病诊断治疗进展期刊论文-中国实用儿科杂志 2002(5)6.龚伟 Alport综合征型胶原分布特点与临床表型的联系学位论文硕士 2003引用本文格式：丁洁.王芳.郭顺华.俞礼霞.杨霁云 中国Alport综合征表型和基因型特征期刊论文-肾脏病与透析肾移植杂志 2001(6)
