1、1茶多酚的提取、精制工艺及产品中茶多酚的定量分析【实验目的】 1、了解茶多酚的性质及用途； 2、了解植物天然产物常规提取和精制的方法； 3、掌握茶多酚提取与精制的原理和方法； 4、掌握茶多酚的分析检测方法。【实验材料和仪器】 1、仪器 电动搅拌器 离心机 酸度计 真空干燥箱 抽滤瓶 真空蒸发浓缩装置 水环式真空泵 电子天平 水浴锅 紫外分光光度计 电热恒温干燥箱 分液漏斗 微量吸管器 2、试剂 氯化钠 碳酸氢钠 柠檬酸 硫酸铝 盐酸 亚硫酸氢钠 乙酸乙酯 维生素 C 磷酸氢二钠 磷酸二氢钾 硫酸亚铁 酒石酸钾钠 硫酸 没食子酸丙酯 、工艺过程及操作方法【实验原理】 茶多酚是茶叶中 30 多种多
2、酚类物质的总称，是一类富含于茶叶中、主要由表儿茶素、表没食子儿茶素及没食子酸酯类等组成的多羟基化合物，含量约占茶叶干物质总量的 2030。茶多酚分子中带有多个活性羟基(-OH)，可终止人体中自由基链式反应，清除超氧离子，类似 SOD 之功效。茶多酚对超氧阴离子与过氧化氢自由基的清除率达 98以上，呈显著的量效关系，其效果优于维生素 E 和维生素 C。茶多酚还有抑菌、杀菌作用，能有效降低大肠对胆固醇的吸收，防治动脉粥样硬化，是艾滋病毒(人类免疫缺陷病毒，HIV)逆转录酶的强抑制物，有增强机体免疫能力，并具抗肿瘤、抗辐射、抗氧化、防衰老机理。茶多酚安全、无毒，是食品、饮料、药品及化妆品的天然添加成
3、分。目前茶多酚已在医药、饮料、食品、保健等行业中广泛应用。由于茶多酚易溶于热水，因此本实验首先用热水在一定温度下将茶多酚从茶叶中提取出来；然后对茶叶浸提液盐析处理除去部分杂质；再利用某些金属离子与茶多酚形成的络合物在一定 pH 值下溶解度最低的特性，将茶多酚从浸提液中2沉淀出来并高效地与咖啡碱等杂质分离；经过稀酸转溶将茶多酚游离出来后，用对茶多酚具有很好选择性的有机溶剂再次对其进行萃取分离；最后将茶多酚萃取液通过真空浓缩、真空干燥得到茶多酚精品。【实验步骤】 1、浸提：称取一定重量过 20 目的茶叶末，加入其重量 20 倍的 7095的热水，搅拌下恒温浸提 60min，过滤得茶叶浸提液。取样分
4、析浸提液中茶多酚的含量，计算浸提液中茶多酚的总量、茶多酚的浸提率。 2、盐析：加氯化钠于茶叶浸提液中，使其质量分数为 6，静置盐析 1.5h 后过滤。 3、沉淀：在上述滤液中加入茶叶重量 25的 NaHSO3 ，然后加入茶叶重量 20的硫酸铝饱和水溶液，加热至 7080 ，用 15%NaHCO3 溶液在快速搅拌下调节 pH 至 56，此时有大量沉淀析出，沉淀自然沉降一段时间后过滤，最后用等体积 70 热水洗涤沉淀三次。 4、酸溶：将沉淀在快速搅拌下放入到茶叶重量 3 倍的 pH2.54.5 的盐酸水溶液中溶解沉淀，控制酸转溶液的 pH2.54.5，酸溶时间 50min，少量胶状沉淀经离心分离除
5、去。取样分析计算酸转溶液中茶多酚的含量和总量，计算茶多酚经过盐析、沉淀及酸溶后的回收率。5、萃取：加入茶叶重量 3的 NaHSO3 至酸转溶液中，然后用其体积 0.5 倍的乙酸乙酯萃取 3 次，每次萃取时间为 10min，合并萃取液。取样分析计算萃余相中茶多酚的总量，计算茶多酚的萃取率。 6、洗涤：加入茶叶重量 2的维生素 C 至萃取液体积 0.4 倍的水中，用柠檬酸调节水溶液的 pH2.53.0，等分成二份对乙酸乙酯萃取液洗涤两次。 7、蒸发浓缩：将洗涤后的乙酸乙酯相在 5070 下真空蒸发回收乙酸乙酯，待浓缩成膏状物时，加入膏状物 2 倍体积的无水乙醇洗涤挂在壁上的物料，继续浓缩成稠的膏状
6、物。 8、干燥：将膏状物放入真空干燥箱中，在 6090下进行真空干燥，在前12h 内，将物料搅动几次，当物料干燥成粉状或干的块状时，结束干燥。干燥时间一般 48h。 9、包装保存：将干燥好的茶多酚产品转移至自封塑料袋中，称重、取样后立即密封，置入棕色玻璃干燥器中于低 (室) 温下避光保存。产品取样用于分析产品中茶多酚含量，计算出茶多酚的最终得率。、提取精制过程中及产品中茶多酚含量的分析检测方法（一） 、提取精制过程中茶多酚含量的分析检测 【实验原理】 在一定 pH 值条件下，酒石酸铁能与多酚类物质反应形成蓝紫色络合物，该络合物在 540nm 波长下具有最大吸光度。在适当的浓度范围内，茶多酚的含
7、量与络合物的吸光度成正比，符合朗伯比尔定律，因此可用分光光度法对茶多3酚定量分析。【实验材料及步骤】 1、酒石酸亚铁溶液：称取 1g（准确至 0.0001g）硫酸亚铁和 5g（准确至0.0001g）酒石酸钾钠，用水溶解并定容至 1L（此液放置过夜后使用，可稳定 1 星期） 。 2、pH7.5 的磷酸盐缓冲液：a 液（1/15mol/L 的磷酸氢二钠溶液）：称取磷酸氢二钠 23.877g，加水溶解并稀释至 1L；b 液（1/15mol/L 的磷酸二氢钾溶液）：称取经 110烘干 2h 的磷酸二氢钾9.078g，加水溶解并稀释至 1L。 取 a 液 85mL 和 b 液 15mL 混匀，即得 pH
8、7.5 磷酸盐缓冲溶液。 3、供试液的制备与测定：准确吸取待测溶液 1mL，将其稀释 125 倍，再从稀释液中准确吸取 1mL，注入 25mL 的容量瓶中，加水 4mL 和酒石酸亚铁溶液 5mL，充分混合，再加 pH7.5 的磷酸盐缓冲溶液至刻度，用 1cm 比色杯，在波长 540nm 处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度。 【实验结果】 待测溶液中茶多酚的含量用下式计算： 茶多酚（g/mL）=1.957AX/500 式中 1.957 用 1cm 比色杯，当吸光度等于 0.50 时，每毫升茶汤中含茶多酚相当于 1.957mg；A 试样的吸光度X 待测溶液的稀释倍数 酒石酸亚铁分光光度法测定茶多酚含量（见生物分离工程实验P128129）
