1、葡萄糖氧化酶酶活测定1 酶活单位与定义 pH6.0、30的条件下，每分钟能把 1.0mol 的 -D- 葡萄糖氧化成 D-葡萄糖酸和H2O2 的酶量为一个单位。2 测定原理 葡萄糖和氧反应，在葡萄糖氧化酶的作用下，生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢和无色的还原型邻联茴香胺在过氧化物酶的作用下，生成水和红色的氧化型邻联茴香胺。3 试剂和溶液3.1 磷酸盐缓冲液（pH6.0）称 取 16.61g 磷 酸 二 氢 钠 （ NaH 2PO42H2O ） 和 35.82g 磷 酸 氢 二 钠（Na 2HPO412H2O） ，溶于无 CO 2 的水中，稀释到 1000ml 。3.2 邻联茴香胺甲醇缓冲液1g
2、 邻联茴香胺加在 100ml 甲醇中搅拌溶解备用。临用时现配，取 0.1ml 加入到上述缓冲液 12ml 中混匀。3.3 180g/l 葡萄糖水溶液18g 葡萄糖加适量水溶解，并定容至 100ml。3.4 0.03%辣根过氧化物酶液 称取辣根过氧化物酶（HRP,美国 Ameresco 公司）10mg ，溶于 30ml 蒸馏水。 4 仪器设备721-分光光度计、恒温水浴、秒表5 分析步骤5.1 待测酶样品的处理 将待测酶样做适当稀释后进行试验，使得测定A 值在 0.250.4。5.2 测定 2 支干净试管，按顺序分别加入以下试剂 空白 样品1 邻联茴香胺甲醇缓冲液 2.5ml 1 邻联茴香胺甲醇缓液 2.5ml2 葡萄糖液 0.3ml 2 葡萄糖液 0.3ml3 辣根过氧化物酶液 0.1ml 3 辣根过氧化物酶液 0.1ml4 混匀，30恒温水浴 4 混匀，30恒温水浴5 水 0.1ml，混匀 5 酶样品 0.1ml，混匀6 460nm 调零6 在 460nm 下立即读数 A0，3min后再次读数 A1， A=A1-A06 结果表示与计算X= A（11.3t0.1） nt测定时间，min0.1样品体积，ml11.3消光系数n稀释倍数所得结果表示至整数。
