1、GelRed（ 10,000 水溶液） 说明 GelRed核酸染料特点 无毒性： GelRed 独特的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内，艾姆斯氏试验结果也表明，该染料的诱变性远远小于 EB。 灵敏度高：适用于各种大小片段的电泳染色，对核酸迁移的影响小于 SYBR Green I。 稳定性高： 适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶；室温下在酸或碱缓冲液中极其稳定，耐光性强。 信噪比高：样品荧光信号强，背景信号低。 操作简单：与 EB 一样，在预制胶和电泳过程中染料不降解；而电泳后染色过程也只需 30 分钟且无需脱色或冲洗，即可直接用紫外凝胶透射仪观察。 适用范围广：可选择电泳
2、前染色（胶染法）或电泳后染色（泡染法）；适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳；可用于 dsDNA、 ssDNA 或 RNA 染色。 与 EB 有相同的光谱特性，无需改变滤光片及观察装置：标准的 EB 滤光片或 SYBR 滤光片都适用，使用与观察 EB相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可，在 300nm 紫外光附近可得到最佳激发。但是 GelRed不能被 488 nm氩离子激光器或相似波长的可见光完全激发，因此不推荐使用此类激发装置的成像系统。 GelRed使用方 法 1胶染法（用法同 EB） （ 1）制胶时加入 GelRed 核酸染料（例如：每 50mL 琼脂糖溶液中加入 5L GelRed 10
3、,000 储 液，以此比例类推）。 （ 2）按照常规方法进行电泳。 注 意事项： 此方法染色染料用量相对较少。 500 L染料大约可以做 100块 50mL的胶。 由于 GelRed具有良好的热稳定性，可以在热的琼脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷却。摇晃，振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将 GelRed 储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中，然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。 GelRed 兼容所有常用的电泳缓冲溶液。 含有染料的预制凝胶溶液可以大量制备，并长期保存直到使用。 此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶，对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。 2泡染法 （ 1） 按照常
4、规方法进行电泳。 （ 2） 用 H2O将 GelRed 10,000 储液稀释约 3,300倍到 0.1M NaCl中，制成 3 染色液。（例如将 15L GelRed 10,000 储液和 5mL 1M NaCl加到 45mL H2O中）。 （ 3） 将凝胶小心地放入合适的容器中，如聚丙烯容器中。缓慢加入足量的 3 染色液浸没凝胶。室温振荡染色 30min 左右，最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含 3.5 10丙烯酰胺的凝胶，染色时间通常介于 30min到 1h，并随丙烯酰胺含量增加而延长。 注意事项： 用泡染法染色时，染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用 3次
5、左右。 3 GelRed染色液可以大量制备，在室温下避光保存直至用完。 如果总是看到条带弥散或分离不理想，建议使用泡染法 染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依旧存在，则说明问题与染料无关，请尝试：降低琼脂糖浓度；选用更长的凝胶；延长凝胶时间以保证边缘清晰；改进上样技巧或选择泡染法染色。 几种核酸染料比较 名称 灵敏度 稳定性 适用性 安全性 价格 GelRed 高 高 通用大小片段电泳染色 美国安全认定无毒 中 GelGreen 高 高 通用大小片段电泳染色 美国安全认定无毒 中 SYBR Green I 极高 差 100bp 以上片段电泳染色 花菁染料，低毒 高 SYBR Green II 极高 差 单链核酸分子电泳染色 花菁染料，低毒 高 Gold View I 低 高 500bp 以上片段电泳染色 高毒性，强致癌 低 EB 低 高 100bp 以上片段电泳染色 强致癌，强诱变 低 特别提醒： 如果您使用的是紫外成像仪，请选择 GelRed；如果您使用激光成像仪或希望在可见光下观测，请选择 GelGreen 在极少数情况下，质粒经某些酶切后的 DNA样品会出现拖尾和分辨率降低，此时建议同时尝试两种染色方法以决定哪种方法更加合适。
