1、Shimadzu ELSD LT II操作及维护用户版,超越未来 孔维超,说明书编者如是说！,第一部分 概述,雾化,样品分离,雾化室,漂移管,脱除溶剂,检测,LED,蒸发光散射检测器是一种通用型检测器，能够检测任何不挥发性分析物。其检测不依赖于目标化合物或流动相对光的吸收性。通过前面板控制仪器。检测到的信号通过1 VFS模拟信号输出。该仪器包一个含雾化器(专利产品)、一个漂移管以及一个检测室。漂移管置于可加热模块内，用于流动相蒸发。流动相流速应设定在200 L/min 2.5 mL/min之间。,第一部分 概述,ELSD 检测器具有如下特点：质量型通用检测器, 但灵敏度优于示差检测器 (RID
2、)。能够测量无紫外吸收或可产生荧光的化合物。可用于梯度洗脱。对于非挥发性的化合物均有几乎相等的响应，与质量大小有关而与结构无关。沸点与流动相接近的化合物不能被检测。,第一部分 概述,第二部分 原理,雾化阶段，部分流动相变成细小雾滴,细小雾滴通过漂移管的时候被蒸发,检测阶段，目标物的光散射度被测定,光散射度随目标物浓度的变化而变化,2.1 雾化,雾化气入口,流动相入口,Color seal,Ring,玻璃管,来自色谱仪的流动相被入口气(比如氮气、空气)雾化，然后被后者带到玻璃管。入口气中不能含有颗粒，因为后者会干扰样品检测。(空气压缩机、氮气瓶可以作为气源)。应当着重指出的是ELSD对气源中杂质
3、气体含量、含水量要求不高，但务必不能含有颗粒，某些空气压缩机中含有干燥剂和活性炭，假如不能较好地过滤后者的颗粒，会引起较高的噪声，ELSD LT II的噪声应低于3 MV(gain=12，不通流动相)。ELSD LT II耗气量较大，一瓶气体在7080 h内就会消耗完。流动相雾化时，大的流动相液滴 沿玻璃管壁流下，然后经虹吸管流出。只有细小的雾滴被雾化气带入漂移管中。,为了使流动相蒸发，一个温控的漂移管被使用。漂移管出口直接与检测室连接。在LC中，低沸点溶剂比如水和有机溶剂(比如甲醇、氯仿、乙腈)是常用的流动相。如果使用了流动相添加物(你如酸、碱、盐)，添加物可能会在流动相蒸发后结晶，这会导致
4、雾化器堵塞、污染漂移管并进一步造成基线噪声增大。请不要使用含有高沸点添加物的流动相。,2.2 流动相的蒸发,如果分离过程必须使用流动相添加物，下列物质可以被添加：NH4OH (氢氧化铵)(C2H5)3N (三乙胺)CH3COONH4 (乙酸铵)HCOOH (甲酸)CH3COOH (乙酸)CF3COOH (三氟乙酸) *所有可在LC/MS中使用的挥发性溶剂均可在ELSD中作为添加物使用。,2.3检测,检测室,散射光强度与散射颗粒的质量间存在指数比例。I = k mb (power function)I 散射光强度; m 散色颗粒的质量; k、b 常数.Log I对Log m作图可以得到线性响应。
5、常数k和b随测试条件(比如温度和流动相特性)的改变而变化。,ELSD LT II测试咖啡因,f(x)=x(1.59947)EXP(8.98178),r2=0.9997023,LC SolutionCurve fit type: Exponential,ExcelPower function,I = k mb,Ln I = ln k + b*ln m,要点,想要得到幂函数的工作曲线，至少需要两个不同的浓度点；想要得到方程的相关系数，至少需要3个不同的浓度点。目前中国药典方法采用的是两点法。不同的浓度点不应过于接近，否则拟合出来的方程偏差过大；选点可遵循这样的例子：1, 2, 4, 8, 16,第
6、三部分 仪器部件及功能,Rear,Life of LED = 5000 h,每按一下，所设定的参数增加一个单位。按住改建，参数以更快的速率增大。,每按一下，所设定的参数减小一个单位。按住改建，参数以更快的速率减小。,让仪器接受所设定的参数值。,将当前的检测器信号变为0.,打开或关闭光源。状态灯显示光源是亮或灭：当LED状态灯亮，则表明光源是亮的；反之光源是灭的。,移动光标到下一副或上一副屏幕。,移动光标到下一个或上一个区域。,第四部分 操作前的准备,ParafilmTM is used to cover various openings inside the compartment and o
7、n the nebulizer cell to prevent dust particles from entering the system during shipment.,组装配件,A. 移除流路和雾化器上的封口膜。,B. 将30 mm螺帽拧到玻璃管上，先不要拧紧；将雾化器插入螺帽中，插到底，然后拧紧螺帽。,C. 接下来，将13 mm螺母拧到玻璃管的另一个口上，不要拧紧。将漂移管入口通过13 mm螺母插到玻璃管中，然后拧紧13 mm螺母。,D. 将雾化器入口管安装到仪器左侧的流路入口。连接时，内部的PTFE管应比外面的绿色套管长出2 mm。,E. 用流动相充满虹吸管。,F. 将提供的废液
8、管连接到虹吸管的出口处。,G. 将雾化气管连接到雾化器。,关键点一般使用流动相充满玻璃管的虹吸管处。如果流动相挥发性较强(比如正己烷、二氯甲烷)，可以用水或异丙醇充满虹吸管。流动相应位于虹吸管的弯曲处，但不能积存或淹没玻璃管与漂移管的连接处。虹吸管出口处连接的废液管的排布应注意：使用夹持工具将靠近虹吸管处的部分固定，以防止废液管移动时损伤虹吸管；废液管自入口至出口应一路向下，中间不能有高低起伏，以便废液顺利排出。确保废液管的出口未浸没在废液桶的液面以下，不论您用什么方式。从检测室出来的废气应一路向下，中间不能有高低起伏，以便废气冷凝得到的液体不会倒流到检测室。,第五部分 基本操作,5.1 显示
9、屏,状态屏幕：显示四项参数的实时值。当温度未达到预定值时，Temp闪烁；当气压小于300 kPa或未达到预定值时，Press闪烁；仪器仅能指示气压，气压设定应通过气源。,信号补偿*：应设定为正数或更高值，否则可能观察不到信号；当基线稳定后，offset数值相当于初始值，与基线高度一致。,漂移管温度*：依据流动相性质、样品性质设定。(20-80 C, 100 C，比室温高5 C，设置才有效)增益*：用于放大或缩小信号，对于分析灵敏度基本无益。一般高浓度样品，增益值应较小，对于低浓度样品，增益值应设定大一些。Gain增加1，信号值乘2.,噪声过滤*：设定一个时间常数(噪声释放的时间间隔)以滤除噪声
10、。默认值为1 s，改变此值峰形和响应值会略微变化。时间常数变大，峰形更平滑，但可能会把某些较窄的峰滤除。目标峰与相邻峰分离较差时，推荐调整filter。气压单位：kPa、psi。,LED(光源)：开/关。“#H”为LED实际使用时间。LED的寿命为5000 h，当实际使用时间超过5000 h，开机后就会显示“the maximum usage of the lamp has exceeded”。重置LED使用时间*：当光标处于该区域时，点击ENTER就会将“#H”重置为0。重置的前提是更换了新的光源。,气阀：开/关。程序时间*：在此设定时间，然后将气阀设定为on。从设定时刻开始计时，经历设定时
11、间后，气阀自动关闭。,5.2 操作,打开仪器后部的电源开关,打开喷雾气阀门，将压力调节到350 kPa。压力值显示在状态屏幕上。,打开pump，使虹吸管处充满液体。,设定参数：漂移管温度、gain(有时甚至需要设置filter constant time),平衡流动相、等待参数达到预定值，然后自动调零。,注意,如果仪器置于密封较好的通风橱或其他低压环境下，虹吸管中的液体可能会流出来影响结果，务必采取手段确保虹吸管中的液面与漂移管入口管的下切面一致；雾化气压力不能超过450 kPa；确保流动相不会腐蚀仪器：不锈钢(雾化室、漂移管)、玻璃(雾化室)、PTFE(入口管)；流动相进入ELSD前，应先通
12、雾化气；不挥发或难挥发添加物不应出现在流动相中。,漂移管蒸发温度如何设定?,漂移管温度设定依据流动相的沸点。一般而言，流动相为纯有机溶剂时设为35C，流动相为有机相水溶液时设为40C，含水较高的流动相设定为50C。流动相中添加物的沸点高于溶剂时，可适当提高漂移管温度；如果目标化合物对热不稳定，则可尽可能的降低蒸发温度以避免化合物热分解；流速较高时，适当提高漂移管温度可降低噪声。,两条指导方针：A. 升高温度有利于流动相及添加物气化；B. 降低温度可降低目标物的分解,衡量标准：信噪比。,5.3 优化分析条件,优化流动相,溶剂中的蒸发残渣是引起噪声的主要原因。对溶剂的要求：使用蒸馏水和HPLC级试
13、剂；蒸发残渣应低于1 ppm。添加物在离子型化合物分离中具有改善峰形、优化分离等重要作用。然而在ELSD中应慎用：不挥发性添加物不能使用；三氟乙酸、乙酸、三乙胺等挥发性试剂可以使用，但可能会引起噪声增高的现象，所以在添加物类型、添加浓度方面需要优化。此外，所用试剂中不应含有抗氧化剂(比如THF中含有BHT)。所用试剂不应腐蚀PTFE、不锈钢、玻璃等材料。,样品处理,进样前用微孔滤膜(0.45 m、0.22 m)过滤样品。,色谱柱处理,对于新柱，应在不接检测器的情况下冲洗一定体积(比如20倍柱体积)，这样可以将小于筛板孔径的微小颗粒冲洗出来。冲洗后，在某种特定流动相条件下测试基线并记录，以备参考
14、。定期冲洗色谱柱，冲洗时不接检测器。极端pH值的流动相会腐蚀填料，产生一些小于筛板孔径的颗粒，故不应在允许的pH范围外使用色谱柱。,5.4 关机,用流动相冲洗不少于15 ml(通雾化气)(如果流动相中含有添加物，则应用甲醇水溶液冲洗15ml),停止送液,通雾化气30 min,停止送气，然后关闭仪器电源,故障,噪声过高：雾化气含有过多的颗粒；流动相中含有高沸点添加物。检不到峰：排气管堵塞；虹吸管中无液封导致漏气；雾化器堵塞。,灵敏度下降或噪声尖峰的出现很有可能是漂移管污染引起的。可以遵循下面的方法冲洗检测器整个流路：取下分析柱并设置雾化气压力为 350 kPa。设置漂移管温度为40C ，以水作为
15、流动相，流速2 mL/min 冲洗10 min。然后流动相换为乙醇，同样条件下冲洗30 min。冲洗结束后，检查是否还有噪声尖峰出现。 如果没有解决噪声尖峰的问题，那么遵循下面的方法再次进行清洗。流动相由乙醇换为水，冲洗10 min。流动相换为 5 mmol/L 三氟醋酸水溶液，漂移管温度40C 条件下冲洗10 min。将漂移管温度设为80C，再冲洗10 min。流动相换为水，漂移管温度40C 条件下冲洗20 min。,To remove the nebulizer from the instrument:,Disconnect the nebulizer liquid inlet from
16、the column.Disconnect the gas inlet from the nebulizer.Unscrew the nebulizers 30 mm nut, and remove the nebulizer from the glass chamber.Remove the 30 mm nut and the seal from the nebulizer.,To clean the nebulizer:,1 Fill a 20 mL or 50 mL beaker with approximately 2 cm of cleaning solvent.2 Remove t
17、he nebulizer gas inlet fitting to avoid damaging it with the cleaning solvent.3 Place the nebulizer vertically in the beaker.The nebulizer outlet should be placed at the bottom of the beaker and the nebulizer inlet should be pointing up. NOTEThe cleaning solvent is dependent on the nature of the material that is present in the nebulizer. In most cases,ethanol 2-propanol is a satisfactory solvent.,
