【11】手把手教你入门“有关物质”.doc

1、 手把手教你入门“有关物质” 111 / 5手把手教你入门“有关物质”原 料 药 中 的 杂 质 包 括 有 机 杂 质 （ 工 艺 和 药 物 相 关 的 ） 、 无 机 杂 质 和 残 留 溶 剂 。 其 中有 机 杂 质 就 是 一 般 我 们 所 指 的 有 关 物 质 ， 是 指 在 药 物 生 产 过 程 /贮 存 中 所 引 入 /生 成的 起 始 物 料 、 中 间 体 、 副 产 物 、 异 构 体 、 降 解 物 、 催 化 剂 等 1； 药 物 制 剂 的 有 关 物 质主 要 是 指 药 物 自 身 的 降 解 物 以 及 药 物 与 辅 料 或 包 装 材 料 相 容

2、 性 产 物 等 2。 有 关 物 质 可能 会 具 有 不 确 定 的 毒 性 ， 甚 至 潜 在 的 致 癌 、 致 畸 、 致 突 变 等 性 质 ， 因 此 需 严 格 控 制 。国 内 外 药 典 中 很 多 品 种 有 关 物 质 检 测 方 法 通 过 峰 面 积 比 较 的 方 法 来 确 定 是 否 符 合 规定 ， 这 种 方 法 忽 略 了 供 试 品 溶 液 和 对 照 品 溶 液 的 实 际 浓 度 ， 是 一 种 限 量 检 测 的 方 法 。 但这 种 限 量 方 法 有 相 当 的 局 限 性 ： 一 是 忽 略 了 实 际 浓 度 会 导 致 测 定 数 据

3、的 准 确 性 降 低 ， 二是 无 法 统 计 出 有 关 物 质 的 稳 定 性 变 化 趋 势 和 样 品 的 批 间 差 异 。 越 来 越 明 显 的 趋 势 表 明 ，国 外 更 多 的 品 种 正 以 定 量 的 检 验 方 法 来 代 替 限 量 的 检 验 方 法 ， 本 文 的 目 的 就 是 以 定 量的 方 法 来 说 明 有 关 物 质 检 验 方 法 的 建 立 、 验 证 和 检 验 的 要 求 。由 于 药 物 和 有 关 物 质 本 身 一 般 都 是 有 机 物 ， 且 具 有 相 类 似 的 化 学 结 构 ， 因 此 具 有专 属 性 （ 稳 定 性 指

4、 示 性 ） 和 准 确 性 高 的 HPLC 法 就 作 为 了 有 关 物 质 检 验 的 首 选 方 法 。本 文 将 针 对 HPLC 法 检 验 有 关 物 质 方 法 的 建 立 、 验 证 和 检 验 与 大 家 作 一 个 探 讨 。一 、 有 关 物 质 检 验 方 法 的 建 立首 先 需 要 说 明 的 是 ， 任 何 一 种 检 验 方 法 都 不 可 能 是 万 能 的 ， HPLC 法 也 是 一 样 ，一 般 有 两 个 大 的 缺 陷 ： 一 是 HPLC 检 验 的 图 谱 不 是 一 个 “全 谱 ”， 也 就 是 说 一 个 HPLC方 法 并 不 会 像

5、 TLC 方 法 一 样 把 所 有 的 杂 质 都 会 同 时 检 验 出 来 ， 尤 其 是 国 内 现 在 使 用 较多 的 恒 流 的 色 谱 方 法 ， 极 性 相 差 较 大 的 化 合 物 很 难 在 一 个 色 谱 条 件 下 检 出 ； 二 是 有 一些 杂 质 在 检 验 条 件 下 没 有 响 应 ， 例 如 一 些 化 合 物 的 原 料 /中 间 体 /副 产 物 没 有 紫 外 吸 收 ，使 用 紫 外 检 验 器 是 无 法 检 验 到 的 。 因 此 在 建 立 有 关 物 质 的 检 验 方 法 时 ， 往 往 需 要 针 对 不同 的 已 知 杂 质 建 立

6、 特 定 的 检 验 方 法 ， 作 为 有 关 物 质 检 验 方 法 的 补 充 ， 这 个 方 法 即 可 能 是HPLC 法 ， 也 可 能 是 TLC 法 ， 甚 至 可 能 是 紫 外 法 或 滴 定 法 等 等 ， 需 要 说 明 的 是 ， 对 于 此类 杂 质 在 总 杂 质 计 算 中 不 应 被 重 复 计 算 。有 关 物 质 HPLC 检 验 方 法 在 建 立 时 需 考 虑 到 在 该 色 谱 条 件 下 是 否 所 有 潜 在 的 杂 质 都能 被 检 出 、 各 杂 质 的 响 应 值 是 否 合 适 、 有 关 物 质 与 含 量 之 间 的 质 量 守 衡

7、 （ Mass Balance， 即 理 论 上 含 量 降 低 多 少 有 关 物 质 就 应 该 增 加 多 少 ） 。 很 多 人 在 有 关 物 质 检 验方 法 建 立 时 参 考 的 是 含 量 测 定 的 方 法 甚 至 是 血 药 浓 度 测 定 的 方 法 ， 往 往 这 是 不 合 适 的 ，因 为 这 些 方 法 都 是 针 对 主 成 分 的 测 定 方 法 ， 它 不 会 去 考 虑 杂 质 的 检 出 情 况 和 准 确 性 ， 只需 要 不 干 扰 主 成 分 的 测 定 即 可 ， 而 且 往 往 在 含 量 测 定 的 浓 度 下 杂 质 不 能 够 检 出

8、， 因 此 无论 是 流 动 相 的 组 成 还 是 检 验 波 长 ， 可 能 都 不 适 合 有 关 物 质 的 测 定 。由 于 制 剂 有 关 物 质 的 检 验 重 点 是 降 解 物 和 相 容 性 产 物 ， 因 此 原 料 药 生 产 工 艺 杂 质（ 包 括 原 料 、 中 间 体 、 副 产 物 等 ） ， 如 果 不 是 降 解 物 的 话 ， 都 不 是 制 剂 有 关 物 质 重 点 关注 的 内 容 ， 在 制 剂 质 量 标 准 中 甚 至 可 以 不 订 入 2。 因 此 制 剂 有 关 物 质 的 检 验 方 法 很 可能 与 原 料 药 会 有 所 不 同

9、， 这 时 需 对 原 料 药 中 可 能 存 在 的 工 艺 杂 质 进 行 重 新 定 位 ， 这 也 是方 法 建 立 和 专 属 性 验 证 的 一 部 分 。有 关 物 质 HPLC 检 验 方 法 的 建 立 主 要 有 四 个 关 键 点 ： 色 谱 柱 的 选 择 、 流 动 相 的 组成 、 检 验 条 件 的 选 择 、 杂 质 测 定 的 方 法 。 下 面 我 将 从 这 四 点 出 发 说 明 有 关 物 质 是 如 何建 立 的 。1、 色 谱 柱 的 选 择根 据 主 成 分 和 杂 质 的 化 学 性 质 ， 选 择 合 适 的 色 谱 柱 ， 使 其 能 够

10、尽 可 能 在 一 个 色 谱条 件 下 检 验 所 有 杂 质 。 在 选 择 时 往 往 极 性 强 化 合 物 选 择 极 性 色 谱 柱 、 极 性 弱 的 化 合 物 选手把手教你入门“有关物质” 112 / 5择 非 极 性 色 谱 柱 ， 但 由 于 成 本 和 环 保 的 原 因 ， 除 极 性 非 常 强 的 化 合 物 外 （ 例 如 糖 ） ， 一般 我 们 首 选 非 极 性 色 谱 柱 （ 例 如 C18） 。 即 使 相 同 类 型 的 色 谱 柱 ， 由 于 品 牌 、 规 格 、型 号 等 差 异 ， 色 谱 柱 的 保 留 行 为 可 能 会 有 很 大 差

11、异 ， 因 此 在 检 验 时 应 尽 可 能 固 定 这 些 参数 。2、 流 动 相 的 组 成流 动 相 的 组 成 往 往 取 决 于 色 谱 柱 的 选 择 ， 在 色 谱 柱 选 定 后 ， 通 过 调 节 流 动 相 中 各组 分 的 比 例 、 pH 值 、 缓 冲 盐 （ 包 括 离 子 对 ） 的 种 类 /浓 度 等 条 件 ， 使 主 成 分 和 杂 质 能够 分 离 并 在 一 个 条 件 下 检 验 ， 必 要 时 应 使 用 梯 度 。 缓 冲 盐 ， 特 别 是 离 子 对 试 剂 ， 各 厂 家的 质 量 差 别 比 较 大 ， 因 此 在 使 用 时 应 尽

12、 可 能 使 用 固 定 的 可 靠 的 品 牌 。3、 检 验 条 件 的 选 择选 择 合 适 的 检 验 器 是 有 关 物 质 检 验 的 一 个 重 点 ， 各 种 类 型 的 检 验 器 都 有 各 自 的 优缺 点 。 例 如 紫 外 检 验 器 的 优 点 是 成 本 低 、 适 用 性 广 、 操 作 简 单 ， 缺 点 是 紫 检 验 器 为 非 质量 型 ， 各 杂 质 和 主 成 分 的 响 应 值 可 能 会 差 别 非 常 大 ； 而 蒸 发 光 散 射 检 验 器 的 优 点 为 它 是质 量 型 检 验 器 ， 各 杂 质 与 主 成 分 的 响 应 值 比 较

13、 接 近 ， 缺 点 是 价 格 比 较 高 、 非 挥 发 性 流 动相 不 能 使 用 、 检 验 结 果 非 线 性 。作 为 最 通 用 的 紫 外 检 验 器 ， 有 关 物 质 检 验 波 长 的 选 择 非 常 关 键 ， 这 一 方 面 决 定 了是 否 所 有 潜 在 杂 质 能 够 检 出 ， 同 时 也 决 定 了 检 验 时 是 否 可 以 采 用 主 成 分 对 照 的 方 法 测 定（ 本 文 中 所 说 的 对 照 既 可 指 主 成 分 对 照 品 ， 也 可 指 主 成 分 自 身 对 照 ） 。4、 杂 质 测 定 的 方 法通 常 只 有 校 正 因 子

14、在 0.9 1.1 时 才 可 以 使 用 主 成 分 对 照 的 方 法 （ 国 外 由 于 有 关物 质 标 准 制 定 得 比 较 严 格 ， 所 以 校 正 因 子 在 0.8 1.2 时 仍 可 以 使 用 主 成 分 对 照 的 方法 ） ， 校 正 因 子 超 过 此 范 围 的 杂 质 应 选 择 外 标 法 或 加 校 正 因 子 的 方 法 测 定 。 校 正 因子 一 般 是 通 过 同 时 进 行 杂 质 和 主 成 分 的 线 性 测 定 （ 线 性 浓 度 范 围 通 常 是 从 报 告 阈 值 或 定量 限 到 杂 质 限 度 或 对 照 浓 度 的 120% 1

15、50%） ， 再 用 主 成 分 的 斜 率 除 以 杂 质 的 斜 率 而 得出 ， 在 计 算 时 将 杂 质 峰 面 积 与 校 正 因 子 相 乘 即 可 。 校 正 因 子 的 概 念 与 EP 中 的 概 念 相同 ， 与 USP 中 的 相 对 响 应 因 子 互 为 倒 数 ， 因 此 在 使 用 中 一 定 要 注 意 。二 、 有 关 物 质 检 验 方 法 的 验 证根 据 对 药 典 的 理 解 ， 相 当 大 多 数 的 研 发 人 员 和 检 验 人 员 认 为 有 关 物 质 检 验 方 法 应该 是 一 个 限 量 检 验 方 法 ， 验 证 可 以 按 照 限

16、 量 的 方 法 进 行 。 但 这 种 理 解 是 不 合 适 的 ， 我 从以 下 几 个 方 面 来 论 述 有 关 物 质 （ 最 起 码 是 限 度 超 过 报 告 阈 值 的 有 关 物 质 ） 应 按 定 量方 式 进 行 验 证 和 检 验 的 ：A、 对 于 外 标 的 检 验 方 法 例 如 含 量 ， 样 品 称 量 要 求 “精 密 称 定 ”， 以 代 入 浓 度 进 行 计算 ； 限 量 法 只 需 要 “称 取 ”一 定 范 围 内 的 样 品 即 可 ， 因 为 称 量 结 果 并 不 代 入 计 算 ，也 就 是 说 样 品 的 称 量 范 围 控 制 在 较

17、 小 的 范 围 内 （ 不 是 百 分 之 十 ） ， 只 要 在 范 围 内 ， 实 际称 量 值 已 不 影 响 检 测 结 果 。 在 有 关 物 质 检 验 中 ， 往 往 要 求 供 试 品 和 对 照 品 称 量 “精密 称 定 ”。B、 从 趋 势 分 析 的 角 度 来 说 ， 采 用 限 量 法 无 法 对 稳 定 性 结 果 和 年 度 质 量 回 顾 进 行 杂 质 的趋 势 统 计 和 分 析 。C、 ICH Q3A 和 Q3B 两 部 分 均 有 描 述 ， 定 量 限 不 得 高 于 报 告 阈 值 ， 即 需 要 报 告 的 杂 质 具备 定 量 的 条 件 。

18、D、 ICH Q3A 和 Q3B 两 部 分 对 于 杂 质 的 描 述 ， 对 于 数 据 的 最 终 报 告 ， 均 采 用 数 据 的 方 式 ，应 为 定 量 计 算 而 得 出 的 。E、 USP3 等 国 外 药 典 中 要 求 未 知 杂 质 的 限 度 为 不 得 过 0.1%， ICH Q3A 和 Q3B 也 要 求 超过 鉴 定 阈 值 （ 一 般 为 0.10%） 的 杂 质 必 须 鉴 定 ， 检 验 时 必 须 采 取 先 修 约 后 判 定 ， 这 是手把手教你入门“有关物质” 113 / 5限 量 法 所 不 需 要 的 。F、 USP4 和 EP5 附 录 中

19、对 于 有 关 物 质 的 积 分 、 计 算 和 报 告 ， 也 说 明 了 其 检 验 方 法 应 为 定量 的 。综 上 所 述 ， 有 关 物 质 检 验 宜 采 用 定 量 测 定 的 方 法 ， 对 应 的 方 案 验 证 也 应 采 用 定 量的 方 法 （ 限 度 低 于 报 告 阈 值 的 杂 质 可 采 用 限 量 测 定 /验 证 ） ， 即 最 少 需 要 进 行 专 属 性 、准 确 性 、 精 密 度 、 定 量 限 、 线 性 /范 围 、 耐 受 性 等 几 方 面 的 验 证 ， 同 时 需 进 行 系 统 适用 性 的 考 查 。 下 面 我 从 验 证 的

20、 几 大 模 块 分 别 阐 述 有 关 物 质 检 验 方 法 的 验 证 要 求 。1、 专 属 性专 属 性 最 主 要 的 要 求 就 是 溶 剂 、 主 成 分 和 辅 料 等 对 杂 质 检 验 没 有 干 扰 。 对 于 溶 剂干 扰 主 要 为 在 溶 剂 峰 位 置 与 潜 在 杂 质 峰 是 否 重 叠 ， 以 及 溶 剂 峰 是 否 影 响 杂 质 峰 的 正 常 积分 。 对 于 主 成 分 干 扰 ， 需 要 考 查 已 知 杂 质 和 强 制 降 解 峰 是 否 与 主 峰 重 叠 ， 一 般 需 要采 用 二 极 管 阵 列 检 验 器 证 明 主 成 分 峰 的

21、 纯 度 。 除 了 峰 纯 度 外 ， 在 强 制 降 解 试 验 中 ， 需要 考 查 质 量 平 衡 ， 即 在 主 成 分 含 量 降 低 约 10% 20%情 况 下 ， 含 量 降 低 值 与 有 关 物 质 绝对 增 加 值 的 偏 差 不 超 过 5%， 否 则 说 明 有 关 物 质 的 检 验 方 法 不 适 用 ， 有 些 杂 质 未 检 出 ，或 者 有 些 杂 质 的 校 正 因 子 不 准 确 。对 于 辅 料 干 扰 ， 需 要 考 查 已 知 杂 质 /降 解 物 峰 与 辅 料 峰 能 够 识 别 并 充 分 分 离 ， 以确 保 杂 质 能 够 完 全 、

22、准 确 的 检 验 。 这 里 需 要 说 明 的 是 ， “把 辅 料 峰 算 成 杂 质 峰 也 是 合格 的 ”这 种 理 论 是 完 全 不 对 的 ， 辅 料 峰 是 不 能 被 计 入 杂 质 峰 的 ， 因 为 杂 质 是 被 要 求 准 确 、定 量 的 。对 于 原 辅 料 有 关 物 质 检 测 ， 必 要 时 应 使 用 成 品 有 关 物 质 的 检 验 方 法 进 行 中 间 体 粗品 的 考 查 ， 以 确 定 中 间 体 的 杂 质 在 主 成 分 中 残 留 的 情 况 。2、 准 确 性由 于 有 关 物 质 相 对 浓 度 较 低 ， 因 此 对 于 准 确

23、 性 要 求 也 并 不 像 含 量 测 定 要 求 那 样 高 ，但 也 有 其 特 殊 性 ， 即 回 收 率 计 算 方 法 应 与 检 验 方 法 一 致 。 也 就 是 说 ， 如 果 检 验 方 法 规定 为 外 标 法 ， 则 回 收 率 计 算 时 应 采 用 外 标 法 ； 如 果 检 验 方 法 规 定 为 校 正 因 子 法 ， 则 回收 率 计 算 时 应 采 用 校 正 因 子 法 ； 如 果 检 验 方 法 规 定 为 主 成 分 对 照 法 ， 则 回 收 率 计 算 时 应采 用 主 成 分 对 照 法 。 否 则 一 概 采 用 外 标 法 计 算 是 没 有

24、 任 何 意 义 的 ！有 关 物 质 准 确 性 验 证 一 般 采 用 加 样 回 收 法 ， 分 别 验 证 报 告 阈 值 、 限 度 值 和 限 度 值120% 150%三 个 浓 度 水 平 下 的 回 收 率 。 在 试 验 时 ， 分 别 配 制 相 应 的 对 照 溶 液 、 供 试品 溶 液 和 三 个 杂 质 浓 度 水 平 的 加 标 供 试 品 溶 液 ， 计 算 时 分 别 测 定 供 试 品 加 标 前 后 特定 杂 质 的 量 ， 扣 除 供 试 品 中 含 有 的 杂 质 的 量 ， 计 算 回 收 率 。一 般 在 报 告 阈 值 水 平 ， 回 收 率 可

25、 接 受 标 准 为 80% 120%； 0.5% 1.0%含 量 水 平 的杂 质 ， 回 收 率 可 接 受 标 准 为 95.0% 105.0%。3、 精 密 度由 于 供 试 品 中 的 杂 质 种 类 、 数 目 和 含 量 ， 与 工 艺 和 批 间 差 异 有 很 大 影 响 ， 因 此对 于 超 过 报 告 阈 值 的 杂 质 ， 精 密 度 验 证 可 以 通 过 配 制 多 份 平 行 样 品 进 行 测 定 ； 而 对 于 供试 品 中 不 含 /含 量 低 于 报 告 阈 值 的 杂 质 ， 可 以 通 过 计 算 不 同 浓 度 水 平 回 收 率 的 RSD 来得

26、出 。 精 密 度 验 证 时 ， 测 定 方 法 同 样 应 按 照 规 定 的 方 法 进 行 。4、 定 量 限 和 检 出 限按 照 ICH Q2 的 要 求 ， 定 量 限 和 检 验 限 一 般 有 三 种 测 定 方 法 ， 但 在 实 际 HPLC 方法 中 应 用 最 多 的 是 信 噪 比 法 ， 即 定 量 限 为 信 噪 比 10:1、 检 验 限 为 信 噪 比 2 3:1 时 被测 物 的 进 样 量 。 但 在 实 际 中 往 往 这 种 测 定 方 式 是 没 有 意 义 的 ， 因 为 信 噪 比 决 定 于 被 测 物的 峰 高 和 噪 音 的 波 动 大

27、小 ， 不 同 的 仪 器 、 峰 保 留 时 间 、 仪 器 状 态 、 流 动 相 配 制 、 甚 至 室温 ， 都 可 能 会 严 重 影 响 信 噪 比 的 测 定 结 果 ， 甚 至 可 能 是 不 同 数 量 级 的 差 别 ， 因 此 定手把手教你入门“有关物质” 114 / 5量 限 /检 验 限 不 应 只 在 验 证 时 进 行 ， 在 检 验 中 同 样 也 需 要 进 行 确 认 ， 并 作 为 系 统 适 用性 试 验 的 一 部 分 ， 以 保 证 检 验 结 果 的 准 确 性 。如 果 说 这 种 定 量 限 /检 验 限 的 验 证 方 法 不 适 合 ， 那

28、 么 怎 么 样 去 进 行 定 量 限 的 验 证 呢 ？根 据 ICH Q3A 和 Q3B 的 要 求 ， 定 量 限 不 得 高 于 报 告 阈 值 ， 因 此 我 们 通 常 按 照 报 告 阈 值相 对 浓 度 配 制 成 相 应 的 对 照 品 溶 液 ， 在 进 样 检 验 ， 要 求 其 信 噪 比 不 得 低 于 10:1（ 对于 限 量 检 验 ， 要 求 按 照 限 度 值 配 制 的 对 照 品 溶 液 的 信 噪 比 不 得 低 于 3:1） 。 这 种 溶 液同 样 在 有 关 物 质 检 验 中 也 应 当 考 查 ， 如 果 信 噪 比 没 有 通 过 ， 则

29、系 统 适 用 性 试 验 没 有 通 过 ，需 要 通 过 更 换 流 动 相 /色 谱 柱 /色 谱 仪 等 方 法 来 解 决 。 定 量 限 及 以 上 的 杂 质 可 以 定 量 检验 ， 因 此 定 量 限 验 证 除 需 满 足 信 噪 比 的 要 求 外 ， 还 应 满 足 重 复 性 的 要 求 ， 一 般 连 续 进样 六 针 ， 其 峰 面 积 的 RSD 不 得 过 10%。5、 线 性 /范 围一 般 至 少 五 个 点 ， 从 定 量 限 到 限 度 值 的 120% 150%， 上 限 不 宜 过 高 ， 否 则 线 性斜 率 会 发 生 漂 移 ， 相 关 系

30、数 至 少 为 0.99， 面 积 归 一 化 法 至 少 为 0.999。 如 果 定 量 限 和限 度 值 150%回 收 率 通 过 ， 可 不 必 考 查 Y 轴 截 距 与 斜 率 的 比 值 。6、 耐 受 性有 关 物 质 一 般 不 宜 做 较 大 范 围 的 变 化 ， 尤 其 是 梯 度 的 方 法 ， 可 重 点 关 注 相 同 规 格不 同 品 牌 的 色 谱 柱 之 间 的 耐 受 性 ， 其 他 例 如 流 动 相 比 例 2%、 pH0.1、 柱 温 5也 需 要 关 注 。 在 耐 受 性 试 验 中 需 要 考 查 不 同 条 件 下 主 要 杂 质 的 数

31、目 、 相 对 保 留 时 间 和 检验 结 果 是 否 可 以 接 受 ， 也 要 考 查 系 统 适 用 性 试 验 是 否 能 够 通 过 。溶 液 稳 定 性 也 可 以 作 为 耐 受 性 的 一 部 分 ， 这 里 既 需 要 考 查 供 试 品 溶 液 的 稳 定 性 ，也 需 要 考 查 对 照 溶 液 的 稳 定 性 。 溶 液 稳 定 性 是 检 验 结 果 是 否 有 效 的 基 本 依 据 ， 也 会 实 验室 调 查 提 供 了 可 能 。 对 于 有 光 敏 感 的 样 品 必 要 时 也 应 考 查 光 稳 定 性 。7、 系 统 适 用 性 试 验系 统 适 用

32、 性 试 验 是 色 谱 检 验 的 最 基 本 要 求 ， 如 果 没 有 通 过 表 明 系 统 没 有 能 够 达 到检 验 的 要 求 ， 所 产 生 的 数 据 也 是 无 效 的 。 有 关 物 质 检 验 中 最 常 见 的 系 统 适 用 性 试 验 一 般为 重 复 性 和 分 离 度 考 查 。 重 复 性 一 般 是 通 过 连 续 进 样 对 照 溶 液 /系 统 适 用 性 溶 液 （ 一般 为 五 针 或 六 针 ） ， 计 算 峰 面 积 的 RSD 得 出 的 ， 一 般 0.1%杂 质 溶 液 的 RSD 不 得 过10%、 0.5% 1.0%杂 质 溶 液

33、的 RSD 不 得 过 5.0%、 1.0%以 上 杂 质 溶 液 的 RSD 不 得 过 2.0%；由 于 国 外 对 杂 质 研 究 得 比 较 细 ， 往 往 分 离 度 测 定 是 通 过 配 制 专 门 含 有 特 定 杂 质 的 对 照 品溶 液 /系 统 适 用 性 溶 液 /分 离 度 溶 液 ， 再 进 样 检 验 完 成 的 ， 而 国 内 由 于 对 杂 质 研 究 比 较粗 ， 往 往 是 通 过 观 察 供 试 品 溶 液 的 图 谱 来 完 成 的 。好 的 系 统 适 用 性 试 验 ， 除 分 离 度 和 重 复 性 检 测 外 ， 还 包 括 每 次 的 定

34、量 限 溶 液 测 定 ，即 配 制 的 定 量 限 溶 液 的 信 噪 比 应 不 低 于 10:1。三 、 有 关 物 质 检 验 方 法 的 检 验通 过 以 上 内 容 ， 可 以 得 出 结 论 ： 有 关 物 质 检 验 宜 定 量 检 验 。 因 此 在 检 验 中 需 要 注意 以 下 几 个 方 法 的 内 容 ：1、 系 统 适 用 性 要 求同 以 上 验 证 部 分 的 相 关 要 求 。2、 最 小 峰 面 积 的 设 定在 一 些 药 典 或 标 准 中 有 这 样 的 描 述 ： “小 于 对 照 品 溶 液 主 峰 面 积 0.5 倍 的 忽 略不 计 ”， 这

35、 实 际 上 是 指 杂 质 的 报 告 阈 值 ， 而 并 不 能 当 作 最 小 峰 面 积 。 因 为 杂 质 检 测 是定 量 测 定 的 ， 检 测 结 果 是 通 过 计 算 后 再 修 约 得 到 的 ， 如 果 按 照 此 峰 面 积 设 置 最 小 峰 面积 ， 则 有 一 部 分 峰 面 积 略 小 于 设 定 值 的 杂 质 不 会 被 积 出 ， 进 而 造 成 漏 检 ， 例 如 最 小 峰 面积 设 定 为 100， 则 峰 面 积 为 99 的 杂 质 不 会 被 积 出 ， 但 二 者 的 计 算 结 果 可 能 都 是 0.05%。手把手教你入门“有关物质”

36、115 / 5那 么 是 不 是 最 小 峰 面 积 设 置 得 越 小 甚 至 是 0 才 好 呢 ？ 也 不 是 ， 这 样 会 造 成 非 常 小 的 峰甚 至 小 于 检 测 限 的 峰 也 被 积 出 ， 影 响 最 终 的 计 算 。 参 考 EP 和 最 新 的 USP 对 于 色 谱 法测 定 有 关 物 质 的 要 求 ， 最 小 峰 面 积 一 般 设 置 为 不 超 过 报 告 阈 值 的 一 半 ， 但 在 最 终 结果 的 报 告 中 ， 只 有 超 过 报 告 阈 值 的 杂 质 才 被 报 告 和 计 入 总 杂 质 。 这 也 是 同 一 份 样 品 在不 同

37、实 验 室 中 的 检 测 结 果 可 能 存 在 巨 大 差 别 的 重 要 原 因 。而 对 于 有 杂 质 采 用 校 正 因 子 法 测 定 的 方 法 时 ， 也 应 适 当 设 置 降 低 最 小 峰 面 积 ， 以保 证 略 小 于 报 告 阈 值 的 杂 质 能 够 得 以 正 常 积 分 、 计 算 、 修 约 甚 至 报 告 。3、 与 主 峰 不 能 完 全 分 离 杂 质 的 积 分在 很 多 检 验 中 会 有 主 峰 与 杂 质 峰 不 能 完 全 分 离 的 情 况 ， 这 时 积 分 就 非 常 重 要 了 ，一 般 系 统 默 认 的 方 法 都 是 将 相

38、邻 峰 沿 谷 底 进 行 垂 直 分 割 ， 这 样 会 造 成 杂 质 峰 内 含 有 大量 的 主 成 分 在 里 面 ， 这 时 应 采 用 谷 -谷 积 分 （ 或 者 采 用 切 线 积 分 ） 的 方 式 进 行 积 分 ，以 保 证 杂 质 峰 内 不 包 含 主 成 分 ， 而 由 于 主 成 分 浓 度 远 大 于 杂 质 ， 因 此 也 可 以 确 保 积 分后 剩 余 的 三 角 形 中 不 包 含 杂 质 （ 切 线 积 分 下 面 没 有 三 角 形 ， 三 角 形 面 积 均 计 入 主 成 分 ） ，进 而 计 算 出 准 确 的 检 测 结 果 。但 需 要

39、注 意 的 是 ， 两 个 杂 质 峰 没 有 完 全 分 离 的 话 是 不 能 采 用 谷 -谷 积 分 的 ， 否 则下 面 的 三 角 形 面 积 将 被 漏 检 ， 这 时 应 根 据 实 际 情 况 决 定 采 用 垂 直 积 分 或 者 切 线 积 分 的 方式 。4、 有 关 物 质 单 个 杂 质 的 计 算采 用 自 身 对 照 法 比 较 简 单 ， 直 接 用 供 试 品 溶 液 杂 质 峰 面 积 除 以 对 照 溶 液 主 峰 面 积 ，再 除 以 对 照 溶 液 的 稀 释 倍 数 即 可 ； 而 对 于 采 用 外 标 法 或 主 成 分 对 照 品 法 时 ，

40、 需 要 分 别计 算 对 照 品 溶 液 的 浓 度 和 供 试 品 溶 液 的 理 论 浓 度 ， 其 中 供 试 品 溶 液 理 论 浓 度 的 应 考 虑 供试 品 的 含 量 ， 尤 其 对 于 不 稳 定 的 制 剂 产 品 。为 便 于 申 报 数 据 的 统 计 、 稳 定 性 和 趋 势 分 析 的 要 求 ， 一 般 可 以 将 有 关 物 质 计 算 的结 果 进 行 修 约 （ 用 于 放 行 检 验 的 可 以 按 照 质 量 标 准 的 小 数 点 位 数 进 行 修 约 ） ： 对 于 原 辅料 结 果 小 于 1 的 应 保 留 至 2 位 小 数 ， 对 于

41、结 果 大 于 1 的 应 保 留 至 1 位 小 数 1； 对 于 制剂 产 品 结 果 小 于 1 的 应 保 留 至 与 报 告 阈 值 相 同 的 小 数 点 位 数 ， 结 果 大 于 1 的 应 保 留至 1 位 小 数 2。 将 修 约 之 后 的 结 果 与 报 告 阈 值 进 行 比 较 ， 如 果 结 果 大 于 报 告 阈 值 ， 应 报告 实 际 修 约 结 果 ； 如 果 小 于 报 告 阈 值 ， 则 可 以 报 告 “小 于 *（ 报 告 阈 值 /定 量 限 的数 值 ） ”。 对 于 一 些 特 定 杂 质 ， 峰 面 积 小 到 未 被 积 分 时 ， 可

42、以 报 告 “小 于 *（ 检 测限 的 数 值 ） ”/“未 检 出 （ 检 出 限 为 *） ”。5、 有 关 物 质 总 杂 质 的 计 算有 关 物 质 总 杂 质 不 应 该 采 用 总 峰 面 积 ， 按 照 单 个 杂 质 的 计 算 公 式 进 行 计 算 ， 因 为这 样 会 将 小 于 报 告 阈 值 的 杂 质 也 同 时 计 算 在 内 ， 造 成 结 果 的 不 准 确 。 总 杂 质 在 计 算 时 ，应 将 所 有 规 定 内 的 各 超 过 报 告 阈 值 的 杂 质 相 加 得 出 。6、 有 关 物 质 的 统 计有 关 物 质 在 检 验 时 ， 应 尽

43、可 能 地 保 证 使 用 相 同 品 牌 、 填 料 和 规 格 的 色 谱 柱 ， 甚 至相 同 品 牌 的 仪 器 和 试 剂 ， 以 保 证 各 杂 质 峰 位 置 的 一 致 性 。 在 有 关 物 质 报 告 时 ， 应 同 时 报告 各 杂 质 的 相 对 保 留 时 间 ， 一 般 相 对 保 留 时 间 2.0 以 内 的 杂 质 可 以 确 定 至 小 数 点 后 一位 ， 2.0 以 上 的 杂 质 会 由 于 系 统 的 漂 移 最 好 规 定 一 定 的 范 围 。 在 稳 定 性 和 年 度 质 量 回 顾时 对 于 有 关 物 质 的 统 计 应 基 于 相 对 保 留 时 间 分 别 对 单 一 杂 质 和 总 杂 质 进 行 统 计 。hongwei2000 药物一致性评价 2016-08-10