1、 植物组织中可溶性糖与淀粉的测定一、蒽酮法测定可溶性糖【仪器与用具】 分光光度计；电炉；铝锅；20ml 刻度试管；刻度吸管 5ml 1 支，1ml 2 支；记号笔；吸水纸适量。【试剂】 1蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮 1g，溶于 50ml 乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。2浓硫酸（比重 1.84） 。【方法】1标准曲线的制作 取 20ml 刻度试管 11 支，从 010 分别编号，按表 24-1 加入溶液和水。表 1 各试管加溶液和水的量管 号 0 12 34 56 78 910100g/ml 蔗糖液(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.
2、0水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0蔗糖量( g) 0 20 40 60 80 100然后按顺序向试管内加入 1ml 9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面快速加入 5ml 浓硫酸，摇匀。比色液总体积为 8ml，在恒温下放置 30min，显色。然后以空白为参比，在 485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。按表 1 加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入 0.5ml 蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml 浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温 1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在 630nm 波长下测其光密
3、度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。2可溶性糖的提取取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取 0.100.30g，共 3 份，或干材料。分别放入 3 支刻度试管中，加入 510ml 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取 2 次） ，提取液过滤入 25ml 容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。3显色测定 吸取样品提取液 0.5ml 于 20ml 刻度试管中（重复 2 次） ，加蒸馏水1.5ml，以下步骤与标准曲线测定相同，测定样品的光密度。4计算可溶性糖的含量可溶性糖含量(mg/g)= 310WnaVC式中 C标准方程求得糖量 (g)
4、；a吸取样品液体积(ml)；V提取液量(ml) ；n 稀释倍数；W组织重量（g） 。四、淀粉含量的测定【仪器与用具】电子天平；容量瓶：100ml4，50ml2；漏斗；小试管若干支；电炉；刻度吸管0.5ml1，2.0ml3，5ml4 ；分光光度计；记号笔。【试剂】（1）浓硫酸（比重 1.84） ；（2）9.2mol/L HClO 4；（3）2%蒽酮试剂：同蒽酮法（或 9%苯酚，同方法一） ；（4）淀粉标准液：准确称取 100mg 纯淀粉，放入 100ml 容量瓶中，加 6070ml 热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸 0.5h，冷却后加蒸馏水稀释至刻度，则每 ml 含淀粉 1mg，吸取此液 5.0ml，
5、加蒸馏水稀释至 50ml，即为每 ml 含淀粉 100g 的标准液。【方法】1标准曲线制作取小试管 11 支从 010 编号，按表 2 加入溶液和蒸馏水。以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可，绘制相应的标准曲线。表 2 各试管加入标准液和蒸馏水量管 号 0 12 34 56 78 910淀粉标准液(ml) 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0蒸 馏 水（ ml） 2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0淀粉含量（mg） 0 40 80 120 160 2002样品提取将提取可溶性糖以后的残渣，移入 50ml 容量瓶中，加 20ml 热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸 15min，再加入 9.2mol/
6、L 高氯酸 2ml 提取 15min，冷却后，混匀，用滤纸过滤，并用蒸馏水定容（或以 2500r/min 离心 10min） 。3测定 可采用苯酚法或蒽酮显色法测定。按下式计算淀粉的含量。淀粉水解时，在单糖残基上加了 1 分子水，因而计算时所得的糖量乘以 0.9 才为扣除加入水量后的实际淀粉含量。淀粉含量（%）= 106WaVC式中 C标准曲线查得的淀粉含量（ g） ；V提取液总量（ml） ；a显色时取液量（ml） ；W样品重（g） 。注：淀粉水解完全度试验 样品测定中可同时作 1 份用于淀粉水解完全度检验的样品，在酸解过滤后，将其残渣加上 2ml 水，搅拌均匀，吸 2 滴于白瓷盘上，加 2 滴 I2-KI 溶液，显微镜下观察，若出现紫蓝色颗粒，证明水解不完全，其正式测试样品需再加高氯酸水解，直至不出现蓝紫色为止。
