1、阿托品与乙酰胆碱对豚鼠肠道的拮抗作用与 pA2值的测定 小组成员 （ 06药学） 苏鹤桂 谭柏森 钟润桃 彭冠 王衍栋 促胃肠动力药包括很多种类 , 这类药物有着不同受体类型和化学结构以及作用机制 , 对从食管到结肠的胃肠道的不同部位有着不同程度的促动力作用 .这类药物对胃肠道作用机制的研究包括 : 胆碱能机制、肾上腺能机制、抗多巴胺和抗胆碱脂酶机制、神经体液机制等 . 前言 而胆碱能受体药物临床上广泛应用于慢性胃炎、反流性食管炎 (GERD)、胃瘫、功能性消化不良 (FD) 等疾病的治疗 .该类药物的作用机制还没有完全明确，研究其对胃肠动力的作用机制及临床应用有重大的临床意义。 阿托品与乙酰
2、胆碱的对肠道的药理学作用 阿托品 阿托品为阻断 M胆碱受体的抗胆碱药，能解除平滑肌的痉挛 (包括解除血管痉挛，改善微血管循环 )。 乙酰胆碱 Ach可明显兴奋胃肠道，使其收缩幅度、张力增加，胃、肠平滑肌蠕动增加，并可促进胃、肠分泌，导致恶心、嗳气、呕吐、腹痛及排便等症状 pA2与 pD2值的定义 pA2 PA2是拮抗参数，当有一定浓度的拮抗药存在时，激动剂增加 2倍时才能达到原来效应，此时拮抗药的负对数即拮抗参数， pA2 = -logI = -logKI 。PA2的值越大说明拮抗剂的作用越强 pD2 PD2：是激动剂与受体亲和力的定量表示。 PD2是产生 50最大效应 (E=12Emax)的
3、摩尔浓度的负对数 (-logD)。 PD2值越大，说明药物和受体的亲和力越大，药效越强。计算方法与 PA2相似 实验方法概述与目的 本实验拟用豚鼠的离体肠道并佐以乙酰胆碱与阿托品分别作为肠道激动剂与拮抗剂进行实验。观察其对肠道的竞争性拮抗作用，同时掌握 pA2值的测定方法。 实验器材 离体器官浴池及恒温装置 PowerLab系统 加液器 培养皿 缝针 线 眼科镊子 剪刀 试药 阿托品 （ mol/L）： 310-7 乙酰胆碱 （ mol/L）：10-6、 10-5、 10-4、 10-3、10-2 台氏液 混合气体 （ 95 O25 CO2）负荷 500 mg 实验器材与试剂 实验路线 实验装
4、置 累积剂量效应曲线 离体肠 制备 猛击豚鼠头部至昏，立即剖开腹腔，自幽门下 5cm剪取空肠和回肠上段，迅速置于台氏液液中。小心修去肠系膜，用吸管吸取台氏液液缓慢冲洗肠内容物；将空肠段分割成 2 cm的小段备用。 制成的标本一端固定于通气钩上，另一端连接于肌力换能器并接入 PowerLab系统的桥式放大器上，浴池内放 20ml 台氏液液，加 500mg负荷，恒温 371C，浴池内持续通入 95 O2与 5CO2的混合气体。 实验装置完毕以后，打开 PowerLab系统，设置参数 。 描记肠肌收缩曲线，待收缩基线平稳后，按次序在浴池中加入预先配好的不同克分子浓度的乙酰胆碱。 当反应到一定高峰，再
5、递增剂量，效应不再增加，此时的效应为最大效应。 阿托品拮抗乙酰胆碱的剂量效应 曲线的制作 放去浴池中的液体，用台氏液液冲洗三次，以后每隔10min冲洗一次，共冲洗三次，再加入台氏液液至20ml。待收缩基线平稳后，加入阿托品 10 7 mol/L 0.6ml（实际浓度3 10-9 mol/L），培育 15min。 再按前法依次加入不同浓度的乙酰胆碱 ， 便可得到有拮抗剂时乙酰胆碱的累积剂量效应曲线， 此时拮抗剂 （ 阿托品 ） 摩尔浓度的负对数即 pAx。 累积剂量法加药顺序 累加次序 药液浓度（ mol/L） 药液的毫升数（ ml） 每 L中累积剂量 （ mol） 1 10-6 0.2 0.0
6、1 2 10-6 0.4 0.03 3 10-5 0.14 0.1 4 10-5 0.4 0.3 5 10-4 0.14 1 6 10-4 0.4 3 7 10-3 0.14 10 8 10-3 0.4 30 9 10-2 0.14 100 10 10-2 0.4 300 附加药顺序表 为了正确求得各参数，必须将曲线直线化。可按 D/R式使剂量效应曲线直线化。 以肠肌收缩幅度 作为纵坐标，以药物对数浓度为横坐标，绘制量效曲线。药物的最大效应即曲线的高度。 绘制累积剂量效应曲线 直线回归计算参数 公式 1m a xm a xDEEKED D 式中： D为药物剂量（浓度）， E为某一剂量的效应， KD为药物的解离常数， Emax为药物的最大效应。以 D/E为纵坐标， D为横坐标进行直线回归。根据公式 pA2 = pAx + log (x-1)，式中 pAx为拮抗剂摩尔浓度的负对数， x为用拮抗剂后与用拮抗剂前 KD之比。 2009.11.2-2009.11.20 制定实验方案，并对方案进行陈述 2009.11.30-2009.12.4 实验阶段 2009.12.7-2009.12.18 实验总结阶段 实验进程安排 试验中期 试验初期 试验末期 小组成员及分工 苏鹤桂 钟润桃 谭柏森 彭冠，王衍栋
