1、抗体 ProteinA 纯化一 ProteinA 柱子的制备1. 配制溶液；结合洗涤缓冲液：NaCl，0.5M ；Na 2HPO4 ，20mM ；PH8.0。配制 500ml 的方法：称取 NaCl 4.383g，Na 2HPO4 3.5814g 溶解于 450ml 的双蒸水中。调节 PH 为 8.0,补加双蒸水至总体积 500ml。2. 制备空柱子（1）先打开用过的 PD-10 上盖，拿掉上面的盖膜。盖上盖子，摇晃，倒去里面的填料，用 PBS 清洗 3 次。（2）用胶带固定好 PD-10 空柱子，要求垂直放置。（3）在 PD-10 空柱子里加入 2ml 的 Binding Wash buff
2、er.结合缓冲液。（4）ProteinA 填料混匀， （10ml 包装一小瓶） 。（5）加入 5ml 的 ProteinA 到柱子中。（6）（7）（8）二纯化步骤1. 样品准备；将兔血清与结合缓冲液 1：1 混合，过滤（防止堵塞柱子） 。2. 平衡柱子：用 5-10 倍体积的结合缓冲液过 Protein A 柱。3. 上样：将准备好的血清样品上样，根据柱子的结合能力考虑上样量的体积。4. 洗脱杂蛋白：用结合缓冲液冲洗柱子，直至结合液中不含蛋白。5. 收集抗体：用洗脱液过柱，同时收集漏出液（约 3-4ml/管） ，直至漏出液中不含蛋白。测定各收集管中的蛋白含量，合并蛋白管。 （注意：收集管中需事先加入约 150ul 的1M PH9.0 Tris-HCl 缓冲液，防止抗体在过酸的环境下失活）6. 柱子再生：用 5-10 倍体积的再生液再生柱子。7. PBS 透析收集的抗体。三试剂的制备1. 结合缓冲液 1000ml 500ml甘氨酸 112.6g 56.3g氯化钠 175.2g 87.6g氢氧化钠调 PH 至 9.02. 洗脱缓冲液 500ml甘氨酸 7.507g用盐酸调 PH 至 3.03. 再生缓冲液 500ml甘氨酸 7.507g酸调 PH 至 2.04.称取 12.1gTris 碱，加 80 毫升的双蒸水，溶解后用盐酸调节 PH8.0，补加到水 100 毫升，
