1、2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体导学案【学习目标】举例说出动物细胞融合与单克隆抗体的原理和应用【学习重点】单克隆抗体的制备和应用【学习难点】单克隆抗体的制备过程【考纲要求】2013 年考纲中“细胞融合与单克隆抗体”要求为。 （：理解所列知识和其他相关知识之间的联系和区别，并能在较复杂的情景中综合运用其进行分析、判断、推理和评价）【知识回顾】1、简要说明植物体细胞杂交的过程。2、人工诱导植物原生质体融合的方法有哪些？3、植物原生质体融合的原理是 。4、植物体细胞杂交的意义是 。 【自主学习】一、动物细胞融合1、概念：也称细胞杂交，是指_或_动物细胞结合形成一个细胞的过程。2、结果：形成_。3
2、、杂交细胞：融合后形成的具有原来 或 细胞遗传信息的单核细胞。4、常用的诱导因素有： 、 、 等。5、灭活的病毒诱导动物细胞融合的原理是什么？不灭活的病毒可以诱导动物细胞融合吗？5、意义：突破了 的局限，使远缘杂交成为可能；成为研究_、_、肿瘤和_培育等的重要手段。6、应用：动物细胞融合技术最重要的用途是 。7、动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较：比较项目 细胞融合的原理 细胞融合的方法 诱导手段 用途植物体细胞杂交动物细胞融合二、单克隆抗体1、抗体：由淋巴细胞（浆细胞）产生，能与 发生特异性结合的，具有 功能的球蛋白。2、长期以来人们是如何获得抗体的？这种方法的缺点是什么？3、制备原理：B
3、淋巴细胞： 。骨髓瘤细胞： 。利用 使两种细胞融合。4、单克隆抗体的确切定义是 。5、制备过程：体外培养瘤细胞诱导融合给小鼠注射特定的抗原蛋白质从 中分离出B 淋巴细胞培养的骨髓瘤细胞细胞细胞细胞选择性培养基克隆化培养专一抗体检验阳性足够数量的能分泌所需要抗体的细胞抗体6、杂交瘤细胞的特点：既能 ，又能产生 。【分组讨论】7、诱导动物细胞融合以后，在相应的培养基上至少存在 种类型的细胞。8、制备单克隆抗体的过程有两次筛选，两次筛选的目的是什么？第一次筛选是 。第二次筛选是 。9、单克隆抗体的特点： 、 、 。三、单克隆抗体的应用1、作为诊断试剂：由于单克隆抗体 、 ，所以能 ，并 。具有_、_
4、、_、_的优点。2、用于治疗疾病和运载药物：主要用于 治疗，可制成_ _。【达标训练】1、单克隆抗体是指 （ ）A单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体 B单个淋巴细胞增殖产生的抗体C单个杂交瘤细胞增殖产生的高度单一的抗体 D单个抗体通过克隆，产生大量抗体2、细胞合成 DNA 有 D 和 S 两种途径，其中 D 途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞有这两种 DNA的合成途径，但一般不分裂增殖。骨髓瘤细胞尽管没有 S 途径，但能不断的分裂增殖，将这两种细胞在试管的培养液中混合，加聚乙二醇促融，再加入氨基嘌呤可筛选出某种细胞。在培养液中存在的细胞种类及筛选出的细胞(细胞融合仅考虑两个细胞的融合)分别是（ ） A
5、三种 杂交瘤细胞 B五种 骨髓瘤细胞C五种 杂交瘤细胞 D一种 杂交瘤细胞3、下图是单克隆抗体制备流程示意图。（1） 技术是单克隆抗体技术的基础。 （2）根据培养基的用途分类，图中 HAT 培养基属于 培养基。 （3）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是 。 （4）动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采用 。（5）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的 特点，又具备淋巴细胞的特点。 （6）淋巴细胞是由动物体骨髓中的 细胞分化、发育而来。 （7）杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是 。【知识拓展】1、如何进行杂交瘤细胞的专一抗体检测及克隆化培养？ 融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞，但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔不超过一个细胞，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那么上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行 34 次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。【课后反思】
