1、动物组织块,细胞悬液,原代培养,传代培养,胰蛋白酶处理分散成单个细胞,幼龄动物的器官组织；动物胚胎,细胞贴壁 接触抑制,原代培养 传代培养,加入培养液,用胰蛋白酶等处理贴壁细胞,适宜条件,不死性细胞,课 前 复 习,代孕母牛,胚胎 移植,体细胞核移植过程 （体细胞克隆动物）,存在的问题（1）成功率非常低 （2）克隆动物表现出遗传和生理缺陷等健康问题（3）对克隆动物食品的安全性问题也存在争议。,专题2 细胞工程,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,主备人：姚雪丰 议课时间：第15周 上课时间：第17周,环节：学习目标,1.掌握动物细胞融合与植物体细胞杂交的区别和联系。 2.简述动物细胞融合和单
2、克隆抗体制备的过程。 3.了解单克隆抗体在医学实践中的应用，并说出其应用实例。,阅读教材5254页，回答下列问题：,环节：问题导学,1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？ 2.常规血清抗体与单克隆抗体有何区别？ 3.单克隆抗体怎么制备？ 4.单克隆抗体主要有哪几方面的用途？,一、动物细胞融合,9:45,环节：点拨精讲,细胞融合是正常的生命活动,两个细胞正在融合,受精作用,1、概念：,指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,2、结果,形成单核的杂交细胞,3、原理,细胞膜的流动性,4、诱导方式,物理法：离心、振动、电激,化学法：聚乙二醇（PEG),生物法：灭活的病毒,一、动物细
3、胞融合,动物细胞融合过程示意图,不同DNA的两个细胞,灭活的病毒,有丝分裂,两个完整的杂交细胞,技巧归纳 灭活的病毒能作为诱导剂,不灭活的病毒不能作为诱导剂 1.灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质重新排布,细胞膜打开,细胞发生融合。 2.不灭活的病毒会感染细胞,而不能诱导细胞融合。,5、过程：,动物细胞A 动物细胞B,诱导，融合,1个完整的杂交细胞AB,（膜融合、质融合）,（核融合）,细胞融合完成的标志:细胞核融合成一个核,6、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。,7、应用： 成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。,
4、最有价值的应用,制备单克隆抗体,动物细胞融合,杂种细胞,愈伤组织,杂种植株,植物细胞A,植物细胞B,原生质体A,原生质体B,植物体细胞杂交,去壁,原生质体融合,植物组织培养,物理法,化学法,生物法： 灭活的病毒,常用方法,8.植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较,主要用于制备,单克隆抗体,获得杂种植株,用途,物理、化学方法,（同左）,灭活的病毒,物理（离心、振荡、电刺激）,化学（聚乙二醇）,诱导方法,使细胞分散后诱,导细胞融合,去除细胞壁后诱,导原生质体融合,细胞融合的方法,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性、,植物细胞全能性,原理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,比较项目,8.植物体细胞杂交、动物细
5、胞融合的比较,例1 下图表示细胞融合技术的一些过程,请据图回答:,(1)若A、B细胞为动物细胞,从A 和B细胞到C细胞的过程中,常用作为 来 诱导融合。A、B融合为C的过程 说明细胞膜具有 特性。其融合完成的标志是。得到的C细胞可称为 。,灭活的病毒,诱导剂,流动性,细胞核融合,杂交细胞,(2)若A、B细胞为植物细胞,那么这样的细胞已经用酶降解去掉了,这种酶可能是 酶,由此生成的A和B细胞称为 。A、B到C细胞的过程中,常用的物理方法是;融合完成的标志是 ;形成的D细胞还要应用 技术把D培养成植株。 (3)若A为人细胞,B为鼠细胞,并分别用红、绿荧光染料标记细胞膜上的蛋白质,在形成C细胞时,细
6、胞一半发红色荧光,一半发绿色荧光。到D细胞阶段,两种颜色的荧光均匀分布,原因是。,细胞壁,纤维素酶和果胶,原生质体,离心、振动、电激,形成新的细胞壁,植物组织培养,细胞膜上的蛋白质是可以运动的,二、单克隆抗体,什么是抗体？ 由何种细胞产生？ 主要分布在哪里？ 起何作用？,效应B细胞,血清,特异性免疫作用,抗体：机体受抗原刺激后产生的，并且能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。,读下面一段文字资料，思考以下问题：,长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏
7、。人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B细胞进行无性繁殖，即克隆。,1、请从以上文字资料中找出单克隆抗体的概念,2、怎样才能获得单克隆抗体？,提示1：仅用细胞培养技术可行吗？,提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？,提示3：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？,用单个B细胞进行无性繁殖（克隆），得到的细胞群能够分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体，这种抗体就叫做单克隆抗体。,接受抗原刺激后，能分泌针对该抗原的特异性抗体，
8、在体液免疫中具有重要功能。 B淋巴细胞本身是一种终末分化细胞，通常不再进行细胞分裂，存活一段时间后便会死亡短命细胞,B淋巴细胞,所以B淋巴细胞在体外培养时不能无限增殖，而癌细胞是可以无限增殖的。,骨髓瘤细胞 :,恶性增殖的转化细胞，只要营养条件适合可永远分裂和存活长命细胞。经筛选与驯化，现已建立多种骨髓瘤细胞株没有抗体分泌物。,因此可以利用小鼠骨髓瘤细胞与之融合，就可获得既能无限增殖又能产生单一抗体的细胞。,特点：产量低、特异性差、纯度低、反应不够灵敏,常规抗体制备,一个B淋巴细胞：只分泌一种特异性抗体,单克隆抗体,杂交瘤细胞,小鼠骨髓瘤细胞：能无限增殖,融合,向动物体内反复注射抗原，使动物产
9、生抗体，然后从血清中分离 所需抗体。,优点：特异性强，灵敏度高。,二、单克隆抗体的制备,1. 单克隆抗体的制备过程,3.为何要进行两次筛选？,4.如何进行第2次筛选？,培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。,第1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。 第2次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。,1.本过程利用了哪些原理？,免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理,2.为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？,这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的 遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力， 而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量 单克隆抗体。,思考：,2.单克隆抗体的优点：,3.单克隆抗体的
10、应用,特异性强，灵敏度高，可大量制备,（1）作为诊断试剂最广泛应用具有准确、高效、简易、快速,（2）用于治疗疾病和运载药物,“生物导弹” 单克隆抗体药物单抗导向，药物为弹头,主要用于治疗癌症治疗，单克隆抗体作为载体，运载 抗癌药物，形成“生物导弹”，准确杀伤癌变细胞。,例2 下图是单克隆抗体的制备过程,请据图回答问题:,(1)抗体的化学本质是 ,主要分布于 中,也分布于组织液及外分泌液中。 (2)若想通过过程获得所需的B淋巴细胞,应先对小鼠进行的处理是 ,该处理的实质是在小鼠体内发生的过程。制备单克隆抗体的B淋巴细胞一般从 中采集。,球蛋白,血清,注射(相应的)抗原,体液免疫,脾,(3)过程除
11、了采用诱导植物细胞原生质体融合的方法外,还可以 用 作为诱导剂。细胞两两融合后,可出现 种融合细胞。 (4)过程中杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的方式 是 。 (5)过程要挑选出能产生 的细胞群继续培养。,特定抗体,灭活的 病毒,3,主动运输,两个“过程”,动物细胞融合过程,单克隆抗体制备过程,三个“一”,一个诱导细胞融合的新方法灭活病毒,一个新细胞杂交瘤细胞,一个优势单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势,重点,环节：课堂总结,1在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（ ）A结果是相同的 B杂种细胞的形成过程基本相同C操作过程中酶的作用相同 D诱导融合的手段相同,环节：当堂检测
12、,2.能使动物细胞融合的特有的诱导因子是( )。 A.离心 B.灭活的病毒 C.电刺激 D.振动,B,3、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓疤细胞融合的是（ ） A.经过免疫的B淋巴细胞 B.没经过免疫的T淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的淋巴细胞,A,4.要想获得大量的单克隆抗体就必须用单个的B淋巴细胞进行无性繁殖,形成细胞群。其原因是( )。 A.在体外培养条件下,B淋巴细胞可以无限增殖 B.在动物体内B淋巴细胞可产生多达百万种以上的抗体 C.每一个B淋巴细胞都参与特异性免疫反应 D.每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗
13、体,D,5.某同学在学习“细胞工程”时,列表比较动植物细胞工程的有关内容,你认为错误的是( )。,B,6. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ）淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞A B C D,C,7、下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。,（1）_技术是单克隆抗体技术的基础。 （2）根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于_培养基。 （3）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是_。 （4）动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采用_。 （5）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的_特点，又具备淋巴细胞的_特点。 （6）淋巴细胞是由动物体_中的_细胞分化、发育而来。 （7）杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是_。,动物细胞培养,选择,特异性强,灵敏度高,灭活的病毒,在体外大量增殖,分泌特异性抗体,骨髓,造血干细胞,主动运输,
