1、ICS 点击此处添加中国标准文献分类号中 华 人 民 共 和 国 粮 食 行 业 标 准LS/T XXXXXXXXX粮油检测 粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定 超高效液相色谱方法Inspection of grain and oilsDetermination of deoxynivalenol in grains by ultra-high performance liquid chromatography 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识（征求意见稿）XXXX - XX - XX 发布 XXXX - XX - XX 实施发 布XX/T XXXXXXXXX1前 言本标准按照 GB/T 1
2、.12009 给出的规则起草。本标准由国家粮食局提出。本标准由全国粮油标准化技术委员会（SAT/TC 270）归口。XX/T XXXXXXXXX2粮油检测 粮食中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定 超高效液相色谱方法1 范围本标准规定了免疫亲和层析净化超高效液相色谱法测定谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀烯醇的条件和详细分析步骤。本标准适用于小麦、玉米、稻谷及其制品中脱氧雪腐镰刀烯醇的测定。本标准方法脱氧雪腐镰刀烯醇的检出限为 0.05mg/kg。2 原理试样中的脱氧雪腐镰刀烯醇经过水提取，提取液经过滤、免疫亲和柱净化、浓缩后，用配有紫外检测器的快速高效液相色谱仪进行测定，外标法定量。3 试剂和材料除另有规定外
3、，所用试剂均为分析纯，实验用水应符合 GB/T 6682 中一级水的要求。3.1 试剂3.1.1 甲醇：色谱纯。3.1.2 乙腈：色谱纯。3.1.2 聚乙二醇：分析纯。3.2 试剂配制乙腈/水（10:90）：取 10mL 乙腈（3.1.2）加入 90mL 水。3.3 标准品脱氧雪腐镰刀烯醇标准品：纯度99%；或有证溶液标准物质。3.4 标准溶液的配制3.4.1 标准储备液：准确称取适量的脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品，用乙腈（3.1.2）稀释成浓度为 0.1 mg/mL 的标准储备液，-20避光保存备用。3.4.2 标准工作液：准确移取适量的脱氧雪腐镰刀烯醇标准品储备溶液，用乙腈/水（3.2.1）定
4、容为标准工作液，使工作液浓度为 0.1g/mL，0.2g/mL ，0.5g/mL ，1g/mL，2 g/mL，5 g/mL。4避光密封保存，有效期一周。3.5 材料 3.5.1 定性滤纸：12 cm Whatman 4 号 1，或相当者。1) 1 Whatman 4 号为适合的市售产品的实例。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示本标准对该产品的认可。如果其他产品具有相同的效果，可经实验评估后使用这些等效的产品，下同。XX/T XXXXXXXXX33.5.2 玻璃纤维滤纸：9 cm Whatman GF/A，或相当者。3.5.3 脱氧雪腐镰刀烯醇免疫亲和柱。3.5.4 微孔滤膜：0.2
5、2m，有机系。3.5.5 注射器：10 mL 和 20 mL。4 仪器和设备 4.1 快速高效液相色谱仪：配有紫外检测器4.2 谷物粉碎机4.3 高速均质器：18 000 r/min 22 000 r/min4.4 氮气吹干仪4.5 空气压力泵4.6 天平：感量 0.01mg4.7 多功能振荡器4.8 离心机4.9 泵流操作架5 分析步骤5.1 试样制备将大于 1kg 样品用谷物粉碎机磨细至粒度小于 1 mm，混匀二次取样，将试样装入洁净的容器内，密封，标明标记，置于 4下避光保存。用于检测。5.2 测定步骤5.2.1 提取准确称取经过谷物粉碎机磨细（粒度小于 1mm）的试样 25.0g（m，
6、精确到 0.1g）于均质杯或250mL 磨口具塞三角瓶中，加入 5.0g 聚乙二醇（3.1.2）和 100.0 mL（ ）蒸馏水，高速搅拌提取1V2min 或者摇床 3000 转/min，振荡提取 30min。静置，通过快速定性滤纸 （3.5.1）过滤，用玻璃纤维滤纸（3.5.2）过滤 12 次，至滤液澄清，备用。5.2.2 免疫亲和柱净化将免疫亲和柱连接于 10.0mL 玻璃注射器下。准确移取 2.0mL（ ）样品提取液注入玻璃注射器2V中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以 1mL/min 2mL/min 流速缓慢通过免疫亲和柱，直至部分空气通过柱体。以 10.0mL 蒸馏水淋
7、洗柱子，弃去全部流出液，并使部分空气通过柱体。加入 1 mL 甲醇（ 3.1.1）洗脱，控制流速为 1mL/min 2mL/min，收集全部洗脱液，55下氮吹至干，准确加入 1 mL（V）乙腈/水溶液（10:90 ） （3.2.1）复溶，过 0.22m 滤膜（3.5.4）供液相色谱测定。*注：对于脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量较高的样品，可将提取滤液进行适当稀释，以保证脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量XX/T XXXXXXXXX4不超过免疫亲和柱的吸附容量。由于不同厂商提供的亲和柱操作程序可能有所不同，实际操作时，请参照免疫亲和柱厂商提供的操作说明和程序使用。5.3 测定条件5.3.1 仪器参考条件色谱柱：C
8、 18 柱，50 mm3 mm，1.7m，或相当者。流动相：A：乙腈，B：水。等度洗脱，A：B=10 ：90。流速：0.1 mL/min。紫外检测波长：220nm。进样量：10 L。柱温：25。5.3.2 标准曲线的制作在上述色谱条件下，等基线平稳后进样分析。用进样器吸取 10L 脱氧雪腐镰刀烯醇标准工作液（ 3.4.2）注入快速高效液相色谱仪进行分析，测定标准溶液的响应值（峰面积） ，得到脱氧雪腐镰刀烯醇标准溶液快速高效液相色谱图。参考谱图见附录 A。以脱氧雪腐镰刀菌烯醇浓度为横坐标，相对应色谱峰峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。5.3.3 试验溶液的测定用进样器吸取 10L 样液注入快速高
9、效液相色谱仪进行分析。比较样品与标准的色谱图，根据保留时间定性，根据样品色谱图中目标峰峰面积，用标准工作曲线进行定量，得到样液中脱氧雪腐镰刀烯醇的浓度 。平行测定次数不少于两次。用进样器吸取 10L 流动相，按前步骤得出空白试样的浓1c度为 。05.4 平行试样按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。6 结果计算试样中脱氧雪腐镰刀烯醇的含量按式、计算：WVcX)(01其中：21mXX/T XXXXXXXXX5式中： 试样中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量，mg/kg；1X 样液中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量，mg/L；1c 空白试验脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量，mg/L；0 样液最终定容体积，mL； V 最终样液所代表的试样质量，g；W 试样称取量，g；m 样品提取液总体积，mL；1 通过亲和柱的样品提取液体积，mL。2V计算结果表示到小数点后 2 位。7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 15%。8 其它方法回收率为 80%110%.方法的检出限为 0.05mg/kg 定量限为 0.15mg/kg。XX/T XXXXXXXXX6附录 A脱氧雪腐镰刀菌烯醇液相色谱图图 1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的液相色谱图
