1、防晒化妆品中紫外线吸收剂的检测防晒剂即紫吸收剂。它能吸收紫外线中可引起人产生急性皮炎（红斑）和皮肤灼伤的波长为280320nn 的中波紫外线(即 U.V.B)和（或）可使皮肤变黑的波长 32400nn 的长波紫紫外线（即 U.V.A）。化妆品中紫外线吸收剂用量过多对皮肤有不利影响，因此，化妆品卫生标准规定了防晒剂的使用量（见附录 1 中的表 5）、对甲氧肉桂酸乙氧乙酯高效液相色谱法（HPLC）对甲氧肉桂酸乙氧乙酯：（4-甲氧肉桂酸-2-乙氧乙酯，C 14H18O4，分子量 250.29)是淡黄色透明的粘稠性液体,266Pa 时沸点为 184187；在水中溶解度为 0.05%,在甘油中为 0.5
2、%,在丙二醇中约 5%,能经任意比例与其它醇类、植物油相混合；吸收波长 280320nm，常作紫外吸收剂。我国化妆品卫生标准规定最大允许浓度为 10%。1 应用范围本方法适用于化妆品中对甲氧肉桂酸乙氧乙酯的测定。2 原理样品中的对甲氧肉桂酸乙氧乙酯溶解于四氢呋喃等有机溶剂，有机溶剂提取后用高效液相色谱定性、定量。3 试剂3.1 四氦呋喃：色谱纯。 (1)3.2 乙腈。3.3 对甲氧肉桂酸乙氧乙酯标准溶液:精确称取对甲氧肉桂酸乙氧酯 0.5g,用少量四氢呋喃溶解,移入 100.0ml 容量瓶中并定容至刻度。移取 10.0ml 置于 50.0ml 容量瓶中,用四氢呋喃定容至刻度。此溶液 1.00m
3、l 含 1000?g 对甲氧肉桂酸乙氧乙酯。4 仪器4.1 高效液相色谱仪：具紫外分光光度检测器4.2 超声波仪。5 分析步骤5.1 样品预处理5.1.l 液体、乳液、膏霜 (2)：称取约 0.12.0g (3)样品于 50m1 离心管中，加 20m1 四氢呋喃。用超声波充分溶解混匀后加四氢呋喃至 50.0ml。溶液中有不溶物时离心分离。取上清液用。 （4）5.1.2 指甲油：称取约 1.0g 样品 (3)于 50ml 离心管中，加 15ml 乙腈，搅拌均匀，加水至25.0ml，3000r/min 离心 10min，或用聚四氟乙烯滤膜过滤，取上清液备用。 (4)(5)5.2 色谱条件色谱柱：碳
4、十八结合硅胶（4.0mm id250mm）。 (6)流动相：乙腈+水（64）。 (7)流速：1.0m1min。检测器波长：310nm。5.3 测定5.3.1 定性取标准溶液 2.0ml，加四氢呋喃稀释至 50.0m1，取 5l 注入 HPLC，求出保留时间，取样品溶液 5?l同样操作，以保留时间进行比较和定性。 （8）5.3.2 定量移取标准溶液用四氢呋喃稀释，配制成 1ml 相当于 0.0、20.0、40.0、60.0、80.0?g 的标准系列，依次取 5l 注入 HPLC，绘制浓度-峰高（或峰面积）标准曲线。取样品溶液 5?l 注入 HPIC，记录峰高或峰面积，从标准曲线查出对应的对甲氧肉
5、桂酸乙氧乙酯的含量 A（g/m1）。6 计算c=AV/m1/1000式中：c 一一对甲氧基肉桂酸乙酸乙酯含量，%；A 一由标准曲线查出的样液中对甲氧基肉桂酸乙氧乙酯含量，gml；V一样品溶液总体积，m1；m样品质量，g。注解：（1）四氢呋喃中常常加入抗氧化剂，必须采用色谱纯试剂。（2）乳液、膏霜指防晒油、擦手香酯、夜霜等。（3）称取的样品量根据对甲氧肉桂酸乙氧乙酯含量来决定，应含 14mg。（4）样液中若仍有不溶物，用聚四氟乙烯滤膜（5?m）过滤。（5）指甲油的预处理方法除用乙腈外，还可用下法：即取苯或醚 10ml，水 20ml 与样品充分混合，离心分离（3000r/min） 10min，或静
6、置分层后，取苯或醚层，将有机相挥干，用乙腈稀释至一定体积备用。（6）常用的色谱柱还有 TSK 凝胶柱 LS4l0 及等效物。（7）流动相乙腈和水的比例范围在 73l1 之间都可得到良好的分离。（8）用本法测定时，对甲氧肉桂酸乙氧乙酯的保留时间是 10min，能与其同分异构体完全分离。以对甲氧肉桂酸乙氧乙酯的相对保留时间作为 1.00 时，2 -乙基己基-对 2-甲基胺基苯甲酸酯（ESOALOL 507）是 8.47，2-乙基己基对甲氧肉桂酸酯是 8.94，同时和其它紫外吸收剂也能完全分离。二、羟苯甲酮高效液相色谱法（HPLC）羟苯甲酮即 2-羟-4 甲氧二苯甲酮。（oxybenzone，2-h
7、ydroxy-4-methoxybenzo phenone C14H12O3,228.25）是微黄色结晶粉末，熔点 66（Merek Index），6066（化妆品原料标准）在 100g 不同溶媒中溶解的克数分别为：水 0.O，95乙醇 5.85，正己烷 4.36，苯 56.2，二甲苯 44.3，二硫化碳 30.0，四氯化碳 34.5。羟苯甲酮的最大吸收波长（0.001乙醇溶液）为2424nm， 2884nm， 32514nm,在化妆品中用作紫外线吸收剂。我国化妆品卫生标准规定的最大允许浓度为 10。1 应用范围本方法适用于不同类型化妆品中羟苯甲酮的测定。2 原理用有机溶剂提取化妆品中的羟苯甲
8、酮，用高效液相色谱进行测定，以保留时间定性，以标准峰高（或峰面积）进行定量。3 试剂3.1 四氢呋喃：色谱纯。 (1)3.2 羟苯甲酮标准溶液：精确称取羟苯甲酮 0.25g，加少量四氢呋喃溶解，移置于 100ml 容量瓶中。加四氢呋喃定容至刻度。移取 5.0ml 置于 50.0ml 容量瓶中，用四氢呋喃定容至刻度。此液1.0ml 含 250?g 羟苯甲酮。4 仪器4.1 高效液相色谱仪：具紫外分光检测器。4.2 超声波仪。5 分析步骤5.1 样品预处理5.1.1 液体、乳状样品：准确称取约 0.12.5g (2)样品于 50m1 离心管中，加四氢呋喃 40. 0ml，用超声波仪分散或溶解，加四
9、氢呋喃至 50ml，如样液混浊离心分离，取上清液备用。5.1.2 指甲油：称取约 1. 0g(3)样品，置于离心管中，加四氢呋喃 5.0ml 经超声波仪超声提取后，加氯仿至 20ml，3000rmin 离心 10min，取上清液备用。5.2 色谱条件色谱柱：不锈钢填充柱（4.6mm id25Onm）填充 C8（5?m）。 (4)流动相：甲醇+四氢呋喃+水+60过氯酸（5020300.15）。 (5)流速，1.0m1min。检测器：紫外吸收检测器，波长 288nm。5.3 测定5.3.1 定性吸取 6.0ml 标准溶液置于 50.0ml 容量瓶中,加四氢呋喃定容至刻度，取 5l 注入 HPLC，
10、求出保留时间。取 5l 样品待测溶液注入 HPLC，求出保留时间，与标准保留时间,与标准保留时间比较进行定性。 (6,7)5.3.2 定量配制每毫升含羟甲氧基苯酮 0.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0?g 的标准系列，分别取 5l 注入 HPLC。绘制峰高（或峰面积）-浓度标准曲线，取样品待测溶液 5l 注入 HPLC，以标准曲线查出样品溶液中的羟苯甲酮含量（?g/ml）。6 计算c%=AV/m1/10000式中：c一羟苯甲酮含量，%；A以标准曲线查出的样品溶液中羟苯甲酮含量，g/m1；V 一样品溶液稀释的总体积，m1；m 一一样品质量，g。注解：（1）一般在四氢呋喃中加入
11、了微量的抗氧化剂，故要使用色谱纯的四氢呋喃。（2）进行样品预处理时，称取的样品质量应含 0.52.5mg 羟苯甲酮。（3）称取指甲油时，由于样品中的溶媒易挥发，称取操作应敏捷。（4）可用 Lichrosorh RP-18 色谱柱（E.Merck 公司制品）或 Nueleosil C18色谱柱（Macherey Nagel 公司制品）。（5）如用乙腈+水（7+3）作流动相，不能将 ESCA LOL 506 紫外吸收剂与羟甲氧基苯酮分离。（6）本方法选择的仪器条件，羟苯甲酮与其它异构体分离良好，羟苯甲酮的相对保留时间为1.00 时，其它异构体的相对保留时间如下：2-羟基-4 甲氧基二苯甲酚-5 磺
12、酸是 0. 48，2-羟基二苯甲酮是 0.72，2，2羟基二苯甲酮是 0.75，2，2，4，4-四羟基二苯甲酮是0.56，2，2羟基 4，4甲氧苯酮是 0.89。三、水杨酸高盖酯等 14 种防晒剂反相高效液相色谱法防晒化妆品的组分含有紫外线吸收剂。常用的紫外线吸收剂为水杨酸、对氨基苯甲酸、肉桂酸、二苯甲酮等的衍生物。此外，为了完全防止紫外线，防晒化妆品中还加有能使紫外线散乱起到遮蔽作用的无机覆盖剂，如氧化锌、氧化钛、滑石粉、高岭土等，我国化妆品卫生标准 GB 7916一 87 对紫外线吸收剂的使用量做了限制。本法使用高效液相色谱，一次进样同时测定 2，4-二羟基二苯甲酮等 14 种紫外吸收剂，
13、分离效果好。本法简单、快速、灵敏、实用。1 应用范围本法适用于防晒化妆品中紫外线吸收剂的检测，可检测 14 种紫外线吸收剂，其最低检测量见表2-3-27。表 2-3-27 紫外吸收剂及化妆品卫生标准（GB 9716-87 ）中规定的化妆品中最大允许浓度序号 代号 物质名称 英文名称 本法检出限(?g/g)最大允许浓度(%)供应商 保留时间(min)(nm)5-11 SALA9 水杨酸高()(此字由艹和孟组成)脂Homomenthyl salicylate 25 10 Quest In-ternational(NL)43.22 250.615-20 SALA9 水杨酸-4-异丙基苄酯4-Isop
14、ropylbenzyl salicylate 4 Vebvy() 39.59 240.755-3 PABA8 对-二甲按基苯甲酸-2-乙酸已酯2-ehylhexyl 4-dime-thylaminobenzoate 2.5 8 Van Dyk (NL) 42.35 304.2BENZ1 2,4-二羟基二苯甲酮2,4-Dithydroxyben-zophenone 5 - Sigma() 27.05 284.75BENZ2 2,2-二羟基-4-甲氧基二苯甲酮2,2-Dihydroxy-4-methoxyben-zophenone 7.5 - Saipo() 29.85 284.39BENZ3 2
15、,2-二羟基-4,4-二甲氧基二苯甲酮-5-磺酸(钠盐)2,2-Dehydroxy-4,4-dimethoxyben-zophenone-5-sulfon-ic acid(sodium salt)10 - Saipo() 3.27 263.06BENZ4 2,2,4,4-甲羟基二苯甲酮2,2,4,4-Tetrahy-droxybenzophenone 5 - Saipo() 17.05 292.075-32 BENZ5 2-羟基-4-甲氧基二苯甲酮2-Hydroxy-4-methoxyeben-zophenon 5 10 Sigma() 33.84 2845-33 BENZ6 2-羟基-4-甲
16、氧基二苯甲酮-5-磺酸(钠盐)2-Hydroxy-4-methoxy-benzophe-none-5-sulfonic acid (sodium salt)7.5 5(酸) Sigma() 9.91 266.825-17 CAMP4 3-(4-甲基亚苄基茨烷-2-酮)3-(4-Methylbenzy-lidene)-bornan-2-one 2.5 6 Merck(D) 38.61 294.025-27 SSCR1 2-苯基苯咪唑-5-磺酸2-Phenylbenz-imidazole-5-sulphnic acid 2.5 8(酸) Saipo() 6.89 278.295-14 CINA7
17、对-甲氧基肉桂酸二乙酸铵Diethanolammonium 4-methoxycinnamate 2.5 3(酸) Saipo() 18.49 292.245-18 CINA10 对-甲氧基肉桂酸异戊酯Isoamyl 4-methoxycinnamate 1.3 10 Haarman & Reimer (NL) 37.73 294.945-5 CINA11 对-甲氧基肉酸-2-乙酸已酯2-Ethylhexyl 4-methoxy-cinnamate 10 Givaudan (CH) 42.29 292.78 此序号为化妆品卫生标准(GB 7916-87)中表 5 的序号,5-11 即表 5 中
18、的序号 11。2 原理化妆品中各种紫外吸收化合物由于其结构上的差异可被反相高效液相色谱分离。根据其保留时间及其紫外可见吸收光谱进行定性；峰面积进行定量。3 试剂3.1 甲醇:色谱级。3.1 乙腈:色谱级。3.3 紫外吸收剂贮备液:取表 2-3-27 紫外线吸收化合物各 0.1000g,用甲醇溶解并定容至100.0ml。浓度为 1.00mg/ml。紫外吸收剂标准溶液：取上述紫外吸收贮备液 10.0ml,用甲醇定容至 100ml,浓度为 0.10mg/ml。3.4 高氯酸:分析纯。3.5 高氯酸钠:分析纯。3.6 硫酸:分析纯。3.7 水、去离子水及二次重蒸水。所有溶剂和溶液在进行 HPLC 分析
19、前都经 0.45?m 的微孔滤膜过滤及真空脱气。4 仪器4.1 高效液相色谱仪：Varian 5000 型（Z?g，Switzerland）。4.2 检测器：Varian polychrom 9060 型二极管珍列阵检测器。4.3 积分仪：Varian 4290 型。4.4 微量进样器：10?l。5 分析步骤 （1）5.1 称取 1g 防晒化妆品于离心管中，加 0.25ml 2mol/L 硫酸和 10ml 甲醇,30恒温超声水浴30min，然后以 900r/min 离心 10min，提取上清液；残留物按上述方法重新萃取一次，合并二次萃取液，用甲醇定容至 25ml。5.2 色谱条件5.2.1 色
20、谱柱：Lichrosorb RP-18 柱（250mm4.6mm id.，10?m，Merck，Darmstadt，F.R.G.）。5.2.2 流动相流动相 A： 10 -3molL 的高氯酸和 510-2molL 高氯酸钠的乙腈-水溶液（5+95，VV）；流动相 B：110 -3mo1L 高氯酸和 510-2mo1L 高氯酸钠的乙腈-水溶液3565，VV。流动相 C：110 -3mo1L 的高氯酸和 510-2mo1L 高氯酸钠的乙腈-水溶液（8020，VV）。起始为流动相 A，在 20min 内线性梯度变换到流动相 B：保持流动相 B 5min，然后在 40min 内梯度变换到流动相 C。
21、5.2.3 流速：2.5ml/min。5.2.4 柱温：30。5.2.5 进样体积：10?l。5.2.6 检测波长：3l1 nm。5.2.7 检测器灵敏度：0.32a.u.f.s.。5.2.8 纸速：0.5cmmin。5.3 测定5.3.1 定性取 10?l 样品处理液（5.l），注入高效液相色谱仪。根据其保留时间（参照表 2-3-27）及紫外可见吸收光谱定性。5.3.2 定量5.3.2.1 标准曲线移取 0、0.50、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.0ml 紫外吸收剂标准液于 10ml 具塞刻度管中，用甲醇稀释至刻度。取 10?l 进行高效液相色谱分析，记录各峰面积，
22、用峰面积与对应的紫外吸收剂浓度作图获得标准曲线。5.3.2.2 取 5.1 制备的样品处理液，进行高效液相色谱分析，记录其各峰面积。在标准曲线上查得相应的紫外吸收剂浓度。6 计算按下式计算防晒吸收剂含量：c=A25/（m10000）式中：c 一一样品中紫外吸收剂的浓度，%；A一从标准曲线上查得的紫外吸收剂浓度，?g/m1；m一样品质量，g。7 方法的准确度、精密度样品加标加回收率为 97100，平均变异系数不大于 2（n=5）。注解：（1）由于 PABA 8 和 CINA II 在所用色谱条件下不能分离（如 图 2-3-36），在进行分析之前确定样品中是否同时存在这两种物质是必要的。可用薄层层
23、析对其进行快速扫描。（2）若样品中 PABA 8 及 CINA 11 共存，为了分离这两种防晒剂，样品经 10ml 甲醇离心后，减压蒸馏此甲醇溶液，残渣用 5ml 2mo1L 硫酸萃取两次，合并上层酸萃取液。此萃取液含有PABA 8（溶液 A）；萃取残渣用 10ml 甲醇溶解，该液（溶液 B）含有 CINA 11。溶液 A、溶液 B分别进行 HPLC 分析。此时标准溶液也需配两组：标准溶液 A，含有 BENZ 4， BENZ 8，SSCR 1， PABA 8，用 2mo1L 的硫酸作溶剂；标准溶液 B，含有其余的 10 种紫外吸收化合物，用甲醇作溶剂。 图 2-3-37 为标准溶液 A 和标准溶液 B 的色谱图。（3）保留时间在实验条件下重现性良好，平均变异系数小于 3。来源网址：http:/
