1、脂肪和类脂(磷脂、糖脂、固醇脂等)统称为脂类。它是构成人体 组织的正常成分,不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶剂中。在化学 组成上,脂类属于脂肪酸的酯或与这些酯有关的物 质。脂类的主要功能是氧化供能。脂肪主要存积于脂肪组织中,并以油滴状的微粒存在脂肪 细胞浆内。在病理检验中,脂类染色法最常用以 证明脂肪变性,脂肪栓子以及 肿 瘤的鉴别。脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料,最常用的有苏丹, 苏丹 ,苏丹黑及油红O等。脂肪被染色,实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。经 研究认为组织中脂 质在液态或半液态时, 对苏丹染料着色效果最好。根据这一原理,适当提高温度(37-60)对组织切片
2、染色效果是有好处的。脂类染色,用冰冻 或石蜡切片,以水溶性封固剂封固,如甘油明胶和阿拉伯糖胶等。一、苏 丹 (Sudan )染色法:操作方法:(1) 固定于10%甲醛的组织。(2) 水洗后采用冰冻或石蜡切片。(3) 经蒸馏水后,浸染于 Harris苏木素 或明矾苏木素中淡染1-2分钟。(4) 自来水冲洗。(5) 水洗后,移入 70%酒精5秒钟。(6) 投入苏丹染液中约30分钟或更长时间,置于56温箱中。(7) 在70%酒精中洗涤5-10秒钟。(8) 洗于蒸馏水中,然后将切片移于 载玻片上。(9) 切片移于玻片上,将切片周围 的水分小心擦掉。(10) 甘油明胶封固。结果:脂肪呈橙红色或鲜红色或黑
3、色,胆脂素呈淡 红色,脂肪酸不着色,细胞核呈蓝色。试剂配制:1. 苏丹染液配法:将0.15克苏丹溶解于100ml70%酒精或纯丙酮和70%酒精混合液中(各50ml),临用时过滤,所得滤液即为饱和浓度。注:浸染时,容器必 须盖好,否 则酒精或丙 酮挥发,染料沉淀。2.甘油明胶配制:明胶 40g蒸馏水 210ml甘油 250ml石碳酸结晶 5ml先将明胶浸入蒸馏水中2小时或更长时间,然后加甘油和石碳酸,加热15分钟,摇搅直至混合液均匀为止。二、苏 丹 (Sudan )染色法:苏丹又名猩红,是苏丹的衍生物,作为脂肪染剂,经各地实验证明,其结果优于苏丹。其染色步骤与苏丹染法完全相同,从略。试剂配制:将
4、1-2克猩红染剂加纯酒精70ml,10%氢氧化钠20ml ,蒸馏水10ml ,制成混合液,以微火加 热,置37温箱中1小时,取出冷却后过滤,12 小时后即可使用。注:此液5天内失效,如此看来,浪费较大,建 议配制70% 酒精饱和液,或纯丙酮和70%酒精饱和液,它们使用方便,且不易失效。结果:脂肪呈猩红色,比苏丹更为 清晰。三、油红 染色法:油红作为脂肪染色剂,其染色步 骤简 便,染色 结果肯定,并且优于苏丹。试剂配制:油红O 0.5g异丙醇(含量98%) 100ml此为油红饱和液,可 长期保存备用。染色步骤:(1)冻切片(2)蒸馏水充分洗涤。(3)油红稀释液染10-15 分钟,避光、密封。油 红稀释液的配制:(4)取油红饱和液6毫升,加蒸 馏水 4毫升,静置5-10 分钟后过滤后使用。(5)60%乙醇 镜下分化至间质清晰。(6)水洗。(7)Marry氏苏木素复染核。(8)水洗。(9)甘油或甘油明胶封片。结果:脂肪呈鲜红色,细胞核呈蓝色,间质无色。注意事项:1. 油红染色时应避免试剂挥发过多,否则易形成背景沉淀。2. 60%乙醇分化,应于镜下控制至脂肪组织呈鲜红色,间质无色时为度。