1、高中生物实验复习资料1一、显微镜的使用 光学系统：目镜、物镜、反光镜 1.结构机械系统：镜座、镜柱、镜臂、载物台、压片夹、遮光器、镜筒、粗（细）准焦螺旋。2.使用方法：先在低倍镜下寻找视野：取镜安放对光安放玻片调焦观察后用高倍镜观察：在低倍镜下找到目标 移动装片，使目标位于视野中央 转动转换器，使用高倍镜 调节细准焦螺旋，使物象清晰；调节反光镜、通光孔，使视野变亮。3.注意事项：换上高倍镜后只能旋转细准焦螺旋，不能转动粗准焦螺旋，否则会压碎装片或损坏物镜。物镜越长，放大倍数越大，距载玻片的距离越近；反之放大倍数越小，距载玻片距离越远。目镜越长，放大倍数越小，反之放大倍数越大。放大倍数是指物像的
2、长度或者宽度。若视野一半亮一半暗，则可能是反光镜的角度不对。若观察切片标本材料一半清晰，一半模糊不清，则可能是切片薄厚不均。2、染色实验、还原糖的检测和观察1.原理：糖类中的还原糖（葡萄糖、果糖、麦芽糖）与斐林试剂发生作用，产生砖红色沉淀。2.材料：苹果（梨）匀浆、斐林试剂（甲液：质量浓度为 0.1g/mol 的 NaOH 溶液，乙液：质量浓度为 0.05g/mol 的 CuSO4 溶液）3.步骤：取样液 2mL 于试管中加入刚配的斐林试剂 1mL（甲、乙两液等量混合均匀后再加入）水浴加热（50-65）2min 左右观察颜色变化（白色浅蓝色砖红色）4.注意事项：苹果或梨组织液必须临时制备。因为
3、苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。斐林试剂现用现配。、脂肪的检测和观察1.原理：脂肪可以被苏丹染成橘黄色（或被苏丹染成红色）2.材料：花生种子匀浆（或切片）、苏丹（或苏丹）染液3.步骤：制作切片（切片越薄越好）将最薄的花生切片放在载玻片中央 染色：用毛笔蘸取切片放在载玻片上滴苏丹染液 23 滴切片上染色 3min（苏丹染色 1min）滴体积分数 50%的酒精 12 滴洗去浮色用吸水纸吸去多余的酒精制作装片：滴 12 滴清水于材料切片上盖上盖玻片镜检鉴定：显微镜对光低倍镜观察高倍镜观察染成橘黄色的脂肪颗粒4.注意事项：干种子要浸泡 34 小时，新花生的浸泡时间可缩短
4、。因为浸泡时间短，不易切片；浸泡时间过长，组织较软，切片不易成形。切片要尽可能薄些，便于观察。染色时间不宜过长。酒精用于洗去浮色，不洗去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。同时，酒精是脂溶性溶剂，高中生物实验复习资料2可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴（装片不宜久放）。滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。、蛋白质的检测和观察1.原理：蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。2.材料：新鲜的肝脏组织研磨液（豆浆）、双缩脲试剂（A 液：质量浓度为 0.1g/mol 的 NaOH 溶液，B 液：质量浓度为 0.01g/mol 的 CuSO4 溶液)3.步骤：试管中加样液 2mL加双缩脲试剂 A 液 1
5、mL，摇匀加双缩尿试剂 B 液 4 滴，摇匀观察颜色变化(紫色)4.注意事项：A 液和 B 液也要分开配制，储存。鉴定时先加 A 液后加 B 液。用蛋清代替豆浆时，蛋清要先稀释。如果稀释不够，在实验中蛋清粘在试管壁，与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底，并且试管也不易洗干净。、淀粉的检测和观察1.原理：淀粉遇碘变蓝。2.材料：马铃薯匀浆、碘液。3.步骤：向试管内注入 2ml 待测组织样液向试管内滴加 2 滴碘液，观察颜色变化（蓝色） 。4.注意事项：碘液不能添加的太多，否则会影响反应的颜色变化。、观察 DNA 和 RNA 在细胞中的分布1.原理：甲基绿使 DNA 呈现绿色，吡
6、罗红使 RNA 呈现红色。利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示 DNA 和 RNA 在细胞中的分布。盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运输；盐酸使染色体中的 DNA 与蛋白质分离，便于 DNA 与染色剂的结合2.材料：人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞。3.用具：大小烧杯、温度计、滴管、消毒牙签、载玻片、盖玻片、铁架台、石棉网、火柴、酒精灯、吸水纸、显微镜 4.试剂：质量分数为 0.9%的 NaCl 溶液，质量分数为 8%的盐酸，吡罗红甲基绿染色剂（取 A 液20ml、B 液 80ml 配成染色剂，使用时现配。A 液：取吡罗红甲基绿粉 1g，加入 100ml 蒸馏水中溶解
7、，放入棕色瓶中备用。B 液：取乙酸钠（维持细胞原有形态）16.4g，用蒸馏水溶解至1000ml。取乙酸 12ml，用蒸馏水稀释至 1000ml。取稀释的乙酸钠溶液 30ml 和乙酸 20ml，加蒸馏水50ml，配成 PH 为 4.8 的溶液） 、蒸馏水。5.步骤：取口腔上皮细胞制片： 滴：在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为 0.9%的 NaCl 溶液；刮：用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下；涂：将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中；烘：将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。水解： 解：将烘干的载玻片放入装有 30ml 质量分数为 8%的盐酸的小烧杯中； 保：将小烧杯放入装有 30温
8、水的大烧杯中保温 5 分钟。冲洗涂片：用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片 10 秒钟；染色： 高中生物实验复习资料3 吸：用吸水纸吸去载玻片上的水分。 染：用 2 滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上，染色 5 分钟； 吸：吸去多余染色剂；盖上盖玻片。观察 低：在低倍物镜下，寻找染色均匀，色泽浅的区域，移至视野中央，将物像调节清晰； 高：转到高倍物镜，调节细准焦螺旋，观察细胞核和细胞质的染色情况。6.注意事项：取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现太多的杂质；取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞；冲洗载玻片时水的流速要尽量慢，切忌直接用水龙头冲洗；用酒精灯烘烤载玻片时，不要只集中于材
9、料处，而应将载玻片在火焰上来回移动，使载玻片均匀受热，以免破裂；烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中，最好先自然冷却 1 分钟。：用高倍镜观察叶绿体和线粒体1.原理：叶肉细胞中的叶绿体，呈绿色、扁平的椭球形或球形，散布于细胞质中，可以在高倍显微镜下观察它的形态。健那绿染液是将活细胞中线粒体染色的专一染料可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色。通过染色，可以在高倍显微镜下观察到处于生活状态的线粒体的形态有短棒状、圆球状、线形、哑铃形等。2.材料：新鲜的藓类的叶、人的口腔上皮细胞。3.试剂：新配 制 的 质 量 分 数 为 1%的 健 那 绿 染 液 （ 将 0.5g 健 那 绿 溶 解 于 5
10、0mL 生 理 盐 水 中 ,加温到 30-40 摄 氏 度 ,使 其 充 分 溶 解 ）4.用 具 ： 显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、消毒牙签。5.步骤：观察叶绿体：制作藓类叶片临时装片：在洁净的载玻片中央滴一滴清水。用镊子取一片藓类的小叶，或者取菠菜叶稍带些叶肉的下表皮，放入水滴中，盖上盖玻片 观 察 叶 绿 体 ： 将 制 作 好 的 叶 片 临 时 装 片 放 在 低 倍 镜 下 观 察 ， 找 到 叶 片 细 胞 后 ， 换 用 高倍 显 微 镜 ， 仔 细 观 察 叶 片 细 胞 内 叶 绿 体 的 形 态 和 分 布 情 况 . 观 察 线 粒 体 ： 制 作 人 的 口
11、腔 上 皮 细 胞 临 时 装 片 ： 在 洁 净 的 载 玻 片 中 央 滴 一 滴 健 那 绿 染 液 。 用 消 毒 牙签 在 自 己 漱 净 的 口 腔 内 侧 壁 上 轻 轻 地 刮 几 下 ， 把 牙 签 上 附 有 碎 屑 的 一 端 ， 放 在 染 液 中涂 抹 几 下 ， 盖 上 盖 玻 片 。 观 察 线 粒 体 ： 在 高 倍 镜 下 观 察 经 过 染 色 的 人 的 口 腔 上 皮 细 胞 的 临 时 装 片 ， 可 以 看 到 蓝绿 色 的 线 粒 体 ， 细 胞 质 接 近 无 色 。6.注 意 事 项 ： 藓 类 叶 为 单 层 细 胞 ， 不 需 处 理 ，
12、选 取 菠 菜 作 材 料 时 ， 选 取 带 少 许 叶 肉 细 胞 的 下 表 皮 ，因 为 下 表 皮 的 叶 肉 细 胞 时 海 绵 组 织 ， 细 胞 排 列 疏 松 ， 分 散 易 撕 取 。 观 察 线 粒 体 不 选 取 植 物 细 胞 的 原 因 是 经 健 那 绿 染 色 的 线 粒 体 与 叶 绿 体 颜 色 相 近 ， 会 掩盖 并 影 响 对 线 粒 体 的 观 察 。高中生物实验复习资料4 临 时 装 片 应 保 持 有 水 状 态 ， 以 免 影 响 细 胞 活 性 。 取 口 腔 上 皮 细 胞 前 应 漱 口 ， 防 止 杂 质 对 观 察 物 像 的 干 扰
13、 。 ： 观 察 根 尖 分 身 组 织 细 胞 的 有 丝 分 裂细胞核内的染色体易被碱性染料（如龙胆紫）染成深色。2.材料：洋葱（可用葱，蒜代替） 、洋葱根尖细胞有丝分裂固定装片3.用具：显微镜，载玻片，盖玻片，玻璃皿，剪子，镊子，滴管。4.试剂：质量分数为 15%的盐酸，体积分数为 95%的酒精，质量浓度为 0.01g/ml 或 0.02g/ml 的龙胆紫溶液（将龙胆紫溶解在质量分数 2%的醋酸溶液中配制而成）或醋酸洋红液。5.步骤：洋葱根尖的培养。装片的制作：解离漂洗染色制片 解离: 药液: 质量分数为 15%的盐酸,体积分数为 95%的酒精(1 : 1 混合液)。时间: 35min。
14、 目的: 使组织中的细胞相互分离开来。漂洗: 用清水漂洗约 10min。 目的: 洗去药液,防止解离过度,并有利于染色。染色: 用质量浓度为 0.01g / mL 或 0.02g / mL 的龙胆紫溶液(或醋酸洋红液)染色 3 5min 目的：龙胆紫溶液或醋酸洋红溶液能使染色体着色。制片: 将根尖放在载玻片上,加一滴清水,并用镊子把根尖弄碎,盖上盖玻片,在盖玻片上再加一片载玻片. 然后用拇指轻轻地按压载玻片。 目的: 使细胞分散开来,有利于观察。洋葱根尖细胞有丝分裂的观察先在低倍镜下找到根尖分生区细胞：细胞呈正方形，排列紧密,有的细胞正在分裂。 换高倍镜下观察：分裂中期分裂前、后、末期分裂间期
15、。 （注意各时期细胞内染色体形态和分布的特点） 。其中，处于分裂间期的细胞数目最多。3、提取和分离实验：叶绿素的提取和分离1.原理：绿叶中的色素能够溶解在有机溶剂无水乙醇中，所以用无水乙醇提取绿叶中的色素。绿叶中的色素不只一种，它们都能溶解在层析液中；它们在层析液中的溶解度不同；溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快；反之则慢。2.材料：新鲜的绿叶（菠菜叶）3.用具：干燥的定性滤纸，试管，棉塞，试管架，研钵，玻璃漏斗，尼龙布，毛细吸管，剪刀，药勺，量筒（10ml），天平。4.试剂：无水乙醇，层析液（由 20 份在 6090下分馏出来的石油醚、2 份乙醇和 1 份苯混合而成。93 号汽油也可代用），二氧化硅和碳酸钙。5.步骤：1.原 理 ： 高等植物的分生组织有丝分裂较旺盛。有丝分裂各个时期细胞内染色体的形态和行为变化不同，可用高倍显微镜根据各个时期内染色体的变化情况，识别该细胞处于那个时期。高中生物实验复习资料5
