1、三、 毛细管柱的安装（一）毛细管柱安装前的检查项目（1）检查气瓶压力以确保有足够的载气、尾吹气和燃气。载气的纯度不低于 99.995；（2）清洁进样口，必要时更换进样口密封垫圈，进样口衬管和隔垫；（3）检查检测器密封垫圈，必要时更换。如有必要，清洗或更换检测器喷嘴；（4）仔细检查柱子是否有破损或断裂。（二）毛细管柱的安装（1）从柱架上将色谱柱两端各拉出大约 0.5 m，以用于进样口和检测器安装，避免色谱柱锐折；（2）在柱两端安装柱接头和石墨密封垫圈，向下套柱接头和密封垫圈，离端口大约厘米；（3）标记和切割柱子。在柱距两端大约cm 处用标记笔标记，拇指和食指尽量靠近切割点抓牢，轻轻地拉并弯曲柱子
2、, 柱会很容易折断。如果柱子不容易折断，不要用力强行折，换个在离柱端更远的地方再刻一下，使其折断口处光滑。为确保柱两头切口截面没有聚酰亚胺和玻璃碎片, 可用放大镜检查切口；（4）在进样口安装色谱柱时，先查看仪器说明书找到正确的插入距离，并且用涂改液把这个距离标出来。将色谱柱插入检测器，用手指拧紧柱螺帽直到它固定住色谱柱，然后再拧螺帽 1/4-1/2 圈，这样当加压时色谱柱不会从接头脱出来；（5）打开载气，确定合适的流速。设定柱头压力，分流比和隔垫吹扫至合适的水平。如果使用分流和不分流进样口，检查清洗分流阀至 ON(开)状态，确认载气流过色谱柱，将色谱柱一端浸入丙酮瓶中检查是否有气泡；（6）将色
3、谱柱安装到检测器上时，查看仪器说明书所提供的正确插入距离；（7）检查有无泄漏。在未仔细检查色谱柱有无泄漏之前对柱子不能加热；（8）清洗系统中的氧气至少数 10 min，如果色谱柱被打开暴露到空气中很长时间（几天），那么需要更长时间（12h）来清洗系统以排除所有的氧气；（9）设定正确的进样器和检测器温度；（10）设定正确的尾吹气和检测器气流。点火、打开检测器至 ON 状态下；（11）注射非保留物质甲烷（FID）、乙晴(NPD)、二氯甲烷(ECD)、空气(TCD) 、.氩气（质谱）以检验进样器是否正确安装。如果出现对称峰则安装正确，如果有峰拖尾，重复进样口安装程序。（三）毛细管柱的老化（）在比最高
4、分析温度高 20或最高柱温（温度更低者）的条件下老化柱子两 h，如果在高温 10min 后背景不下降，立即将柱子降温并检查柱子是否有泄漏；（）如果用 Vespel 密封垫圈的话，老化完后重新检查密封程度；（）注射非保留物质以确定合适的平均线速度。四 毛细管柱的保护在使用毛细管柱过程中，主要是防止固定液流失，因为固定液流失会使柱效能降低。事实上色谱柱固定液流失是自然的、是热力学平衡过程。色谱柱固定液聚硅氧烷通过聚合物本身的取代基形成环状分子。聚合物碎片之间由于取代基作用也可形成一些短键聚合物碎片。当这些碎片从色谱柱流出，它们会被检测到，从而导致信号的增强。在毛细管柱使用的全过程中这种反应一直发生
5、。因此，所有的色谱柱都有不同程度的流失。氧是导致严重柱流失的主要因素，在色谱分析时尽量减少色谱仪气路系统氧的含量、使用好材料的部件以及选择正确的操作条件，可降低柱固定液的流失，延长柱子使用寿命。下面介绍几点注意事项：1、 使用高纯度的载气。氧气含量不宜高于 1 x10-6g/g；2、 利用净化器可以除去较低级别气体中的氧和碳氢化合物杂质。通常杂质含量可减少到 100 x10-6g/g 或更少；3、 聚合物材料通常不稳定。因此，调节器主体，阀盘座，密封圈和隔膜应首选金属材料；4、管线只能使用没有油或其它污染物的铜管或不锈钢管，推荐使用制冷级铜管。5、形圈或其它聚合物垫圈的阀最好用有焊接金属、波纹
6、形密封垫。6、 整个系统必须无泄露，并且确保样品中不存在非挥发性物质。因为氧和污染物对固定液的分解有催化作用，会导致柱流失增强；7、 在柱子安装后加热柱箱之前，柱子必须用干净的载气清洗 15 min。如果色谱仪是新的，或进样器和仪器管线进行维护或修理过，仪器应当再清洗 15 至 30 min；8、 各种固定液的热稳定性不一样，柱流失对背景信号的影响随固定液种类和所受温度变化而变化。当柱箱温度接近于柱温的上线时柱流失也会增加。所以应当尽量在较低的温度下工作以延长柱子的使用寿命；9、 一旦柱子损坏，由于固定液降解的程度不同，重新老化后有可能改善柱性能。（一）非极性毛细管柱100%-聚二甲基硅氧烷毛
7、细管柱 相似固定相：AT-1, ON-1, CP-SIL-5, DB-1, DC-200, HP-1, MTX-1, 007-1, MDN-1, OV-17, OV-101, Rtx-1, RSL-150, SE-30, SP-2100, SF-96 温度范围: 等温/程升-60-325/350（0.53mm柱内径），-60-300/320, 膜厚2.0m, -60-260/280应用：胺类、烃类、酚类、杀虫剂、聚氯联苯、硫化物、香精和香料5%-二苯基-95%-二甲基硅氧烷毛细管柱相似固定相： AT-5, ON-5, BP-5,DB-5ht，CP-SIL BCB, DB-5, GC-5, HP
8、-5, MTX-5, 007-2, MDN-5, OV-5, PTE-5, Rtx-5, RSL-150, SPB-5, SE-52, SE-54 温度范围: 等温/程升 -60-325/350, 0.53mm内径柱，-60-300/320, 膜厚2.0m, -60-260/280应用：生物碱、脂肪酸甲酯、卤代化合物、芳香化合物、药品（二）中等极性毛细管柱6%-氰丙基苯基-94%- 二甲基硅氧烷共聚物毛细管柱相似固定相： AT-1301, ON-1301, DB-624, DB-1301, HP-1301, Rtx-1301, Rtx-624, 007-502温度范围: 等温/程升 -20-2
9、80/300, 0.53mm内径柱， -20-260/280 应用：杀虫剂、醇类、氧化剂、亚老哥尔类(Aroclors)气相色谱柱的安装色谱柱的正确安装才能保证发挥其最佳的性能和延长使用寿命。 正确的安装请参考以下步骤：步骤 1.检查气体过滤器、载气、进样垫和衬管等检查气体过滤器和进样垫，保证辅助气和检测器的用气畅通有效。如果以前做过较脏样品或活性较高的化合物，需要将进样口的衬管清洗或更换。步骤 2.将螺母和密封垫装在色谱柱上，并将色谱柱两端要小心切平步骤 3.将色谱柱连接于进样口上色谱柱在进样口中插入深度根据所使用的 GC 仪器不同而定。正确合适的插入能最大可能地保证试验结果的重现性。通常来
10、说，色谱柱的入口应保持在进样口的中下部，当进样针穿过隔垫完全插入进样口后如果针尖与色谱柱入口相差 1-2cm，这就是较为理想的状态。(具体的插入程度和方法参见所使用 GC 的随机手册)避免用力弯曲挤压毛细管柱，并小心不要让标记牌等有锋利边缘的物品与毛细柱接触摩擦，以防柱身断裂受损。将色谱柱正确插入进样口后，用手把连接螺母拧上，拧紧后(用手拧不动了)用扳手再多拧 1/4-1/2 圈，保证安装的密封程度。因为不紧密的安装，不仅会引起装置的泄漏，而且有可能对色谱柱造成永久损坏。步骤 4.接通载气当色谱柱与进样口接好后，通载气, 调节柱前压以得到合适的载气流速(见下表 )。柱前压设置为 Psi15m
11、25m 30m 50m 100m0.20mm 10-15 20-30 18-30 40-60 80-1200.25mm 8-12 13-22 15-25 28-45 55-900.32mm 5-10 8-15 10-20 16-30 32-600.53mm 1-2 2-3 2-4 4-8 6-14(以上仅为建议的起始设置，具体数值要依据实际的载气流速。)将色谱柱的出口端插入装有己烷的样品瓶中，正常情况下，我们可以看见瓶中稳定持续的气泡。如果没有气泡，就要重新检查一下载气装置和流量控制器等是否正确设置，并检查一下整个气路有无泄漏。等所有问题解决后，将色谱柱出口从瓶中取出，保证柱端口无溶剂残留，再
12、进行下一步的安装。步骤 5.将色谱柱连接于检测器上其安装和所需注意的事项与色谱柱与进样口连接大致相同。如果在应用中系统所使用的是 ECD 或 NPD 等，那么在老化色谱柱时，应该将柱子与检测器断开，这样检测器可能会更快达到稳定。步骤 6.确定载气流量，再对色谱柱的安装进行检查注意：如果不通入载气就对色谱柱进行加热，会快速且永久性的损坏色谱柱。步骤 7.色谱柱的老化色谱柱安装和系统检漏工作完成后，就可以对色谱柱进行老化了。对色谱柱升至一恒定温度，通常为其温度上限。特殊情况下，可加热至高于最高使用温度 10-20左右，但是一定不能超过色谱柱的温度上限，那样极易损坏色谱柱。当到达老化温度后，记录并观
13、察基线。初始阶段基线应持续上升，在到达老化温度后 5-10 分钟开始下降，并且会持续 30-90 分钟。当到达一个固定的值后就会稳定下来。如果在 2-3 小时后基线仍无法稳定或在 15-20 分钟后仍无明显的下降趋势，那么有可能系统装置有泄漏或者污染。遇到这样的情况，应立即将柱温降到 40以下，尽快的检查系统并解决相关的问题。如果还是继续的老化，不仅对色谱柱有损坏而且始终得不到正常稳定的基线。一般来说，涂有极性固定相和较厚涂层的色谱柱老化时间长，而弱极性固定相和较薄涂层的色谱柱所需时间较短。而 PLOT 色谱柱的老化方法有各不相同。PLOT 柱的老化步骤 :HLZ Pora 系列 250， 8
14、 小时以上 Molesieve(分子筛) 300 12 小时 Alumina(氧化铝 ) 200 8 小时以上由于水在氧化铝和分子筛PLOT 柱中的不可逆吸附，使得这两种色谱柱容易发生保留行为漂移。当柱子分离过含有高水分样品后，需要将色谱柱重新老化，以除去固定相中吸附的水分。步骤 8.设置确认载气流速对于毛细管色谱柱，载气的种类首选高纯度氮气或氢气。载气的纯度最好大于 99.995%，而其中的含氧量越少越好。如果您使用的是毛细管色谱柱，那么依照载气的平均线速度(cm/sec), 而不是利用载气流量(ml/min)来对载气做出评价。因为柱效的计算采用的是载气的平均线速度。推荐平均线速度值：氮气：
15、10-12cm/sec 氢气：20-25cm/sec 载气杂质过滤器在载气的管线中加入气体过滤装置不仅可以延长色谱柱寿命，而且很大程度的降低了背景噪音。建议最好安装一个高容量脱氧管和一个载气净化器。使用 ECD 系统时，最好能在其辅助气路中也安装一个脱氧管。步骤 9.柱流失检测在色谱柱老化过程结束后，利用程序升温作一次空白试验(不进样)。一般是以 10/min 从 50升至最高使用温度，达到最高使用温度后保持 10min。这样我们就会的到一张流失图。这些数值可能对今后作对比试验和实验问题的解决有帮助。在空白试验的色谱图中，不应该有色谱峰出现。如果出现了色谱峰，通常可能是从进样口带来的污染物。如
16、果在正常的使用状态下，色谱柱的性能开始下降，基线的信号值会增高。另外，如果在很低的温度下，基线信号值明显的大于初始值，那么有可能是色谱柱和 GC 系统有污染。其他：色谱柱的保存用进样垫将色谱柱的两端封住，并放回原包装。在安装时要将色谱柱的两端截去一部分，保证没有进样垫的碎屑残留于柱中。注意：当空气中氢气的含量在 4-10%时，就有爆炸的危险。所以一定要保证实验室有良好的通风系统善于运用毛细管色谱柱的老化怀化市药品检验所中药室 周春菊2009 年 10 月 29 日我们在药品检验中，虽然色谱填充柱的老化过程会耗费一定时间,但是能得到长的柱寿命，好的稳定性和小的拖尾,因此是十分必要的和值得的。如果
17、柱子使用后放置了一段时间,更不要忘了对色谱柱进行“再老化”处理,否则将得不到好的分析结果。总结如下几点：一、老化目的除去管柱内剩余的溶剂、固定液的低沸程馏分及易挥发的杂质,同时使固定液更均匀、牢固地分布于载体或管壁上。二、老化作用1.降低由于柱子流失 (溶剂、轻馏分 )而引起的本底噪声。 这对于使用高灵敏度的检测分析是很重要的,如用氢火焰离子化检测器 ,一般认为流失能引起噪声和不稳定的基线。真正的柱流失常常有如同噪声状的正向漂移。2.提高定量的准确度 这一点一般易被忽视 ,假若要求分析结果的相对偏差等于或低于 3%时,应在固定液的最高使用温度下历时 648h(视固定液的性质决定 )。三、老化原
18、则1.设置老化温度时,决不允许超过固定液的最高使用温度。2.根据涂渍固定液的百分数合理设置老化温度,低含量固定液的柱子,老化温度相对要低些。3.老化时间与所用检测器的灵敏度和类型有关,灵敏度越高,要求老化的时间相对越长。4.老化时间的长短也取决于固定液的特性,“气相色谱纯的”要少于“工业纯的”。例如,OV 固定液老化时间要少于 SE-60,QF-1(工业纯)。5.样品的极性越强,要求填充柱老化的时间相对越长。四、老化方法由文献可知,老化的方法多采用气体流动法,将柱入口与进样室相连 ,出口勿接检测器,通小流量(一般为 510ml/min)的载气,以(24)/min 程序升温至低于固定液最高使用温度 2030,老化 1224h,获得平稳基线,则表明老化已合格。在老化柱子时，一定不要将毛细管接在检测器上，另一端放空，同时将检测器用闷头堵上。如果是 FID，容许接在上面，但应该将检测器温度升上去。
