1、食品分析论文作业1钦 州 学 院食品分析论文ELISA 技术对农药残留的快速检测院 系 海洋学院 专 业 食品科学与工程 学 生 班 级 2009 级 1 班 姓 名 陆彦伶 学 号 200911402110 指导教师单位 海洋学院 指导教师姓名 付满 指导教师职称 讲师 2012 年 5 月陆彦伶 ELISA 技术对农药残留的快速检测2ELISA 技术对农药残留的快速检测食品科学与工程专业 2009 级 陆彦伶指导老师 付满摘 要食品安全问题越来越受到人们的关注，蔬菜水果的农药残留也是主要问题之一。快速检测是社会的迫切需要。本文介绍了一种较为广泛的 ELISA 检测技术，并比较了与其它一些检
2、测方法的区别，对保护人类健康及环境保护有深渊意义。关键词：农药残留；快速检测；ELISA 技术ELISA technology of pesticide residue fast detectionFood science and engineering level 2009 LuYanlingGuide teacher FuManAbstractFood safety problem more and more attention by people, fruits and vegetables of pesticide residue is also one of the main pro
3、blems. Fast detection is the urgent needs of the society. This paper introduces a kind of more extensive ELISA detection technology, and compares the and some other detection difference of method, to protect human health and environmental protection have deep significance. Keywords: pesticides，Fast
4、detection ，ELISA technology食品分析论文作业3前言目前国内外都在不断的研发农药产品，在一定程度上加大了农业发展。我国是农业大国，农药使用量也不容小觑。但是在发展农业的同时，滥用乱用农药现象却引起了严重的食品安全问题和环境卫生问题。虽然目前有很多方法进行农药残留分析，但样品前处理复杂、仪器设备昂贵、操作麻烦、检测时间长等问题无法满足当今快速发展的社会。ELISA 法自 1971 年 Engvall 和 Perlmann 首次建立以来，经常20 余年的发展， ELISA 检测技术操作简单、灵敏度高、样品容量大、分析成本低等优点，现已成为药物残留分析中最重要的分析技术之一。
5、1、ELISA 简介酶联免疫吸附测定技术（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA） ，是将抗原、抗体的免疫反应和酶的高效催化反应有机结合而发展起来的一种综合性技术，在农残中占到了月 90%的比例 1。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是 ELISA 双抗体夹心法及 ELISA
6、间接法。E LISA 检 测 试 剂 盒 应 用 定 性 夹 心 免 疫 检 测 技 术 ， 用 合成 的 HEV 多 肽 抗 原 包 被 微 孔 板 板 条 ， 这 些 多 肽 是 中 国 型 HEV 毒 株 核 心 氨 基 酸序 列 中 抗 原 性 很 强 的 肽 段 。 试 剂 盒 是 固 相 夹 心 法 酶 联 免 疫 吸 附 实 验 （ ELISA） 。已 知 浓 度 的 标 准 品 、 未 知 浓 度 的 样 品 加 入 微 孔 酶 标 板 内 进 行 检 测 。 先 将 生 物 素 标记 的 抗 体 同 时 温 育 。 洗 涤 后 ， 加 入 亲 和 素 标 记 过 的 HRP。
7、 再 经 过 温 育 和 洗 涤 ，去 除 未 结 合 的 酶 结 合 物 ， 然 后 加 入 底 物 A、 B， 和 酶 结 合 物 同 时 作 用 ， 产 生 颜 色 。颜 色 的 深 浅 和 样 品 中 的 浓 度 呈 比 例 关 系 。2、ELISA 的应用ELISA 法 是 免 疫 诊 断 中 的 一 项 新 技 术 ， 现 已 成 功 地 应 用 于 多 种 病 原 微 生 物 所引 起 的 传 染 病 、 寄 生 虫 病 及 非 传 染 病 等 方 面 的 免 疫 诊 断 。 也 已 应 用 于 大 分 子 抗 原和 小 分 子 抗 原 的 定 量 测 定 ， 不 仅 适 用 于
8、 临 床 标 本 的 检 查 ， 也 适 合 于 血 清 流 行 病 学调 查 。 本 法 不 仅 可 以 用 来 测 定 抗 体 ， 而 且 也 可 用 于 测 定 体 液 中 的 循 环 抗 原 ， 所 以陆彦伶 ELISA 技术对农药残留的快速检测4也 是 一 种 早 期 诊 断 的 良 好 方 法 。 因 此 ELISA 法 在 生 物 医 学 各 领 域 的 应 用 范 围 日益 扩 大 。 而 对 于 分析农药残留 方 面 ， ELISA 已成为许多国际权威分析机构（如AOAC）的首选方法。迄今为止，应用 ELISA 检测食品中残留农药主要为除草剂、杀虫剂和杀菌剂。草甘膦的 ELI
9、SA 检出下限为 0.07g/ml。其他残留农药（Metolsulan，Fluroxypyr，Triclopyr 和 Benalaxyl 等）的检测结果均与色谱法测定的结果一致。刘廷凤等用活泼酯法将氯菊酯半抗原（Py）于卵白蛋白（OVA）偶联，制备合成抗原 Py-OVA，并在此基础上建立了农药间接酶联免疫吸附测定法，用以测定环境样品中的氯菊酯农药残留，该法在 10800g/L 浓度范围内呈良好的线性关系，回收率打渔 97%2。Zhang 等合成 2 种收其它农药干扰较小的倍硫磷抗原，并用加标回收法检测 4 种水果（葡萄、桃、梨和西红柿）中得倍硫磷含量，回收率均在 79.8%106.0%3.3、
10、ELISA 与其它检测方法的比较农药残留是指残存在环境及生物体内的微量农药，包括农药原体、有毒代谢物、降解物和杂质。农药残留分析方法有气相色谱法、高效液相色谱法、薄层色谱法、酶抑制法和 ELISA 等。ELISA 和其它免疫方法一样，都是以抗体和抗原的特异性结合为基础，其差别在于酶联免疫方法以酶或者辅酶作为标记物来标记抗体和抗原，用酶促反应的放大作用来显示初级免疫血反应。ELISA 也不例外，但其最大特点是利用聚苯乙烯微量反应板（或球）吸附抗原或者抗体使之固相化，在其中进行免疫反应和酶促反应。ELISA 具有高特异性、高灵敏性、准确度高、重现型好、一次性可处理大量样品，适合于做成试剂盒利于现场
11、筛选等优点，可在蔬菜产区、蔬菜批发市场和海关配备，工商人员可随身携带或建立固定的农药残留测点，能够随时检测蔬菜水果等食品，有利于保证食品的卫生安全。但存在抗体制备不易、不能同时完成多种农药残留检测的缺点，目前的检测限度还不能完全达到国外发达国家技术法规和限量标准的要求。4、ELISA 的发展前景ELISA 临床测定技术的发展主要在于方法学的发展，而方法学的发展依托于试剂生产技术不断进步更新和型标记物的应用。目前，分子生物学正在并最终肯定会让我们对整个生命科学有一个全面而彻底的认识，其对免疫测定技术发展的影响也食品分析论文作业5是直接而又有效的，它使我们对以前一些难以检测的生物活性物质的测定变得
12、轻而易举，并且大大提高了检测的灵敏度和特异性。在食品安全问题备受重视的今天，酶工程无论在食品的解毒还是食品安全检测方面都具有重要的地位。食品安全检测的发展方向是快速、灵敏、简单。随着新 ELISA 法的不断出现及免疫试剂盒的商业化，ELISA 分析在食品安全检测领域中一定会得到进一步的应用和推广。参考文献1 Morozova V S, Levashova A I, Eremin S A. Determination of pesticides by enzyme immunoassay J.J Anal Chem, 2005, 60:202-217.2 刘廷凤，刘亚子，孙成.氯菊酯农药间接酶联免疫吸附测定法的建立J. 环境科学，2006，27:347-350.3 Zhang Q, Sun Q, Hu B S, etal. Development of a sensitive ELISA for the ananlys of the organophosphorous insecticide fenthion in fruit samplesJ. Food Chem, 2008, 106:1278-1284.
