1、19-7-19 Page 1 of 5AKTApurifier 层析系统操作入门为使用户在较短时间内尽快了解 AKTA 系列层析系统的功能和基本操作,特编写此操作入门。若需进一步了解详细内容,可参阅相应的组件、系统和软件说明书。一 系统组件及系统功能介绍 1 系统组件(1) 泵 Pump系统泵:(system pump)双泵(A、B 泵),缓冲液及大体积样品输送。(2) 阀 Valve三通阀:(SV-903)两个。分别位于两个系统泵前,用于缓冲液输送管道(A1/A2, B1/B2)切换。七通阀:(INV-907)两个。1. 上样阀(sample valve),用于上样环切换 (load/inj
2、ect) 和系统泵清洗时废液管 (waste) 切换; 2. 流向切换阀(flow direction valve),用于层析柱流向切换 (downflow/upflow)。八通阀:1. 出口阀(outlet valve),选择收集出口。(3) 收集器 Fraction分段收集。(4) 其它组件梯度混合器(mixer)、柱前过滤器(on line filter)、紫外检测仪(UV-900) 、pH 电导仪 (pH/C-900 内含温度计)等。2 系统功能系统功能由上述各组件相互配合,协同工作。(1) 缓冲液 pH 及梯度配制(a)梯度制备 (Gradient)A、B 泵分别放置 A、B 液,由
3、 A、B 泵的流速变化产生梯度。(b)自动缓冲液 pH 及梯度制备 (BufferPrep)根据所用缓冲液配方,分别将 A1、A2、B1、B2 放入相应的溶液,由 A 泵及其三通阀调配缓冲 pH,由 B 泵及其三通阀调配梯度。(2) 上样上样阀上样:将样品经进样阀 3 号口注入储存在样品环(Sample loop)内,再由阀门切换将样品带入层析柱;系统泵上样:由三通阀选择进样管道,由系统泵将样品泵入层析柱。19-7-19 Page 2 of 5(4) 收集收集器收集:设置收集体积(Frac size),可自动按条件收集。出口阀收集:按需要选择不同出口管收集。二 开机程序1 开启电脑;2 打开
4、AKTApurifier 电源;3 启动 UNICORN 软件,输入用户名( User name) 和密码(Password),默认用户(default) 密码为 default,待 AKTA 自检结束后,在 system control 窗口中显示系统准备就绪 (Instruments are ready) 。三 UUNICORN 软件简介Unicorn 软件启动后共有四个窗口,其主要功能分别如下:Main: 1. 系统关闭(Quit Program)和退出、登陆(Log on/off);2. 系统管理的设定,如用户名、密码、文件和使用权限等设定,系统日志等;3. 文件管理,如文件拷贝、移动
5、、删除及压缩拷贝到磁盘等;4. 方法组编辑(MethodQueues),将几个方法组合在一起,依次运行。Method Editor: 1.方法编辑;2.缓冲液配方设置(如配方修改或新增配方等)System Control: 1. 系统控制,可以手动控制(Manual)或运行方法(Run Method);2. 系统设置,包括 Alarms/Special/Monitors/Curves;3. 运行监测,有四个窗口:Run data/Curves/Flow scheme/Logbook。Evaluation: 结果处理,如积分(intergrate)、移动(shift)、 计算 (Subtract
6、/Add/Multiply/Divide )、 平滑(Smooth)、截取(Cut Curve)、绘制(Creat Curve)、打印(Print)等在每个窗口中均有专家建议(Adviser)和帮助信息(Help)。四 系统控制 (System Contral)1 手动操作 (Manual)1.1 手动操作命令简介(1) Pump 泵Flow: 设定系统泵流速Gradient: 梯度设定BufferPrep_pH: 使用缓冲液配制功能时,设定 pH 值SampleFlow: 设定样品泵流速PumpWashpurfier: 系统泵清洗(2) Flowpath 流路19-7-19 Page 3 o
7、f 5PumpAInlet: A 泵入口三通阀切换PumpBInlet: B 泵入口三通阀切换InjectionValve: 上样阀切换OutletValve: 收集出口阀切换InjectionMark: 插入记号(3) Alarm & Mon 报警、检测WaveLength: 选择监测波长(1-3 个)AutoZeroUV: 紫外吸收校零AveragingTime: 计算紫外吸收平均值的间隔时间SetCondScale 0%: 输入 0%B 时的电导 SetCondScale 100%: 输入 100%B 时的电导Alarm: 设置压力、紫外、电导、pH 等报警限Watch: 监测参数设置,
8、配合方法编辑中的 watch 功能(4) Frac 收集:Peak_Frac_Parameters: 计峰收集参数设定FracCollect_900: 分布收集每管体积Frac_Stop_900: 停止分别收集FeedTube: 换管收集Peak_Fraction: 计峰收集每管体积Peak_FracStop: 停止计峰收集OutletFraction: 出口阀每风分段收集每段体积等设置ResetFracNumber: 将当前分布收集的管号计为第一管(5) Others 其它Block: 调用程序块(只在方法运行时可用)Next_breakpoint: 跳到下一程序块(只在方法运行时可用)Bu
9、fferPrepRecipe: 选择缓冲液配方Set_Mark: 插入提示语End_Timer: 设定结束运行时间Record on/off: 手动运行时开始或结束数据记录1.2 手动操作示例(1) 梯度洗脱设定流速、梯度、柱位、收集方法后即可运行。各命令无先后次序要求。(2) 自动配制缓冲 pH 及梯度必须最先设定缓冲液配方,然后设定其它参数如流速、pH、梯度等。(3) 记录图谱运行“Record on” 命令,开始记录图谱,停止记录则运行“Record off”命令。1.3 运行监测 (Monitoring a run)在系统运行过程中,系统控制窗口同步显示系统检测的数据及各部件当前状态,
10、共有四个窗口,显示不同内容,可同时打开:Rundata: 运行参数19-7-19 Page 4 of 5Curves: 数据曲线Flow scheme: 系统流路图Logbook: 运行记录2 方法运行( Run Method)启动方式方法一:从主菜单(main)窗口方法(method)栏中,双击所选方法。方法二:从系统(system control)窗口中,依次点击 File、 Run,选择运行方法。方法三:从系统(system control)窗口中,点击运行(Run)键,选择运行方法。五 方法编辑1 按照模板编辑新方法(1) 点击方法编辑窗口中 FileNew,或点击工具栏中”New M
11、ethod”按钮, 打开新方法编辑窗口;(2)(2) 在“For system”栏中选择运行方法的系统,选择“No Template”则可自行编辑方法;(3) 在“Technique”栏中选择层析技术,可选内容有:Anion Exchange: 阴离子交换Cation Exchange: 阳离子交换RPC: 反相层析HIC: 疏水层析Size Exclusion: 分子排阻(凝胶层析)Affinity: 亲和层析Any: 通用模板(4) 在“Template”栏中选择模板类别,以离子交换及凝胶过滤为例,有如下选择IEX Templates(离子交换模板):CIP (在位清洗)Manual In
12、jection FP BufferPrepManual Injection FP SegmentedManual Injection V BufferPrepManual Injection V SegmentedGF Templates (凝胶过滤模板):Manual Injection FP IsocraticManual Injection V Isocratic模板解释: Manual Injection: 样品由手工(用注射器等)储存在样品环中,再由进样阀将样品注入层析柱F: 用收集器(Fraction-900)分布收集P: 使用计峰收集(Peak Fraction)功能V: 用出口
13、阀(Outlet Valve)分段收集BufferPrep: 使用自动缓冲液配置Segmented: 不用自动缓冲液配置,可使用梯度Isocratic: 单一流动相19-7-19 Page 5 of 5(5) 在“For column”栏中,选择所用层析柱型号,若在列单中没有,则选择“Any” (6) 点击“OK”键(7) 若各参数符合要求,则选择“FileSave”,即可完成新方法编辑。2 方法编辑若按模板编辑的方法不能满足要求,或对已使用过的方法进行调整,可在“Method Edit”窗口中对方法进行编辑。编辑可分两类:1 运行参数编辑;2 程序编辑。(1) 运行参数编辑 (Run set
14、up)在菜单中选择“ViewRun setup”,则进入运行参数编辑窗口,各编辑窗口的内容为:Variables: 控制程序可变参数编辑Scouting: 筛选条件设定Question: 开始运行的提问内容设定Notes: 输入实验记录或提示Gradient: 显示梯度曲线BufferPrep: 开启或关闭自动缓冲液配置功能及选择缓冲液配方Column: 显示层析柱参数Reference Curves: 输入对照曲线Evaluation Procedures:数据处理步骤Method information: 方法信息,含运行体积、时间等Result name: 结果保存文件名格式、路径设定S
15、tart protocol: 开始运行方案选择(2) 程序编辑 (Text instruction)在菜单中选择“ViewText instruction” 则进入程序编辑窗口。方法控制程序由数个程序块(Block)组成,程序块则由操作命令(instruction)及可变参数(Var.)组成。所以,根据需要,可分别增加或删除可变参数、操作命令、程序块等。六 数据处理 (Evaluation)1 数据浏览Evaluation 窗口中可查看层析结果(Chromatogram_Layout)和程序档案(Documentation)等。2 数据加工最常用有曲线的积分、移动、计算(加减乘除)等:2.1
16、积分 (integrate)(1)选择 IntegratePeak integrate 或点击 Peak integrate 按钮,打开积分窗口;(2)在积分窗口中选择曲线、基线和积分表后,点 OK 键即可;(3)如果想优化积分结果,则可在积分窗口中选择基线设定、积分范围和参数。2.2 移动 (Shift)多条曲线重叠比较时,可用移动功能,使每条曲线错开适当距离,便于分析。19-7-19 Page 6 of 5移动可以左右移动,也可上下移动。2.3 相除计算 (Divide)将两条 UV 曲线相除,可判定吸收峰的纯度:如果一个峰的组分是单一的,则整个峰的相除结果应是恒定值。根据峰的相除值,还可
17、判定峰的成分,因为不同物质的两个波长相除值应是不同的。(1)选择 OperationDivide,打开 Divide (相除)窗口;(2)选择两条相除的曲线,点 OK 键,即可;(3)若需优化计算结果,可设定极限范围(Threshold),也可在计算前用相减(Subtract)功能,消除基线漂移的影响,还可用平滑(Smooth)功能,减小计算结果的波动。2.4 输出报告 (Report and Print)(1)打印当前窗口显示的内容,选择 FilePrint,出现打印窗口,选择打印格式(Print format),点 OK 键,即可。(2)按报告形式打印,选择 FileReport,再选择报告格式(Format),点 OK 键,即可。七 系统管理(1) 用户设置在主窗口中,可设置用户、密码、路径及使用权限等。(2) 系统设置在系统控制窗口中,可设置系统报警、检测、曲线记录等参数。(3) 缓冲体系设定在方法编辑窗口中,可更改缓冲液配方参数或增加新的缓冲液配方。(4) 报告格式在数据处理窗口中,可编辑数据浏览格式、打印报告格式等。