,实验三 酶促转氨反应,一 实验原理,氨基酸分子上的氨基转移到-酮酸分子上的反应称转氨反应。由转氨酶催化的转氨反应是氨基酸代谢的重要反应之一。经转氨后，原来的氨基酸变成了酮酸，而原来的酮酸则变成新的氨基酸。,生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成腙，在碱性环境下呈红色，红色的深浅与丙酮酸生成量成正比。,1. 称取0.5g叶片用剪刀将叶片剪碎放于研钵中。 2. 量取5ml磷酸缓冲液，分三次加入研钵中（2，1，1），转速5000，时间10min,离心完后上清液即为酶粗提液。,二 实验步骤,3. 取4支试管编号按下表要求加样:,4.加样完毕摇匀用橡皮筋将4支试管扎牢置于40水浴中加热30min。,5.取出冷却每支试管各加0.5ml 2，4-二硝基苯肼反应5min再每支试管各加5ml 0.4N的 NaOH溶液摇匀静止8min在=530nm下，测量吸光度OD值。,三、计算：,按下式计算丙酮酸生成量：,Cx=样品中丙酮酸含量Cs=标准丙酮酸溶液含量(0.002mM/m1)V=标准丙酮酸溶液毫升数Dl=样液OD530D2=标准液OD530D3=对照管OD530,
