1、miRNA 及其 inhibitor 转染方法1 对 mimics、mimics control、inhibitor、inhibitor control 进行稀释和分装（终浓度为 100 nmol/l） 。（1）Mimics 加入 250 l DEPC 处理的水；（2）Mimics control 加入 125 l DEPC 处理的水；（3）inhibitor 加入 250 l DEPC 处理的水；（4）inhibitor control 加入 125 l DEPC 处理的水；对以上进行分装：mimics 20 l 每管，mimics control 10 l 每管，inhibitor 20
2、l 每管，inhibitor control 10 l 每管。分装后于80 保存。2 经过调整，细胞状态较好。晚上铺细胞，4 个 60 mm 培养皿，每皿 7.0105细胞。做好标记， （1）为 mimics（2）为 mimics control（3）为 inhibitor（4）为 inhibitor control。3 上午八点对昨天晚上的细胞进行转染。（1）a 用 500 l opti-MEM 稀释 20 l mimics，作用 5 minb 用 500 l opti-MEM 稀释 20 l mimics control，作用 5 minc 用 500 l opti-MEM 稀释 20 l
3、 inhibitor，作用 5 mind 用 500 l opti-MEM 稀释 20 l inhibitor control，作用 5 min（2）a 用 500 l opti-MEM 稀释 10 l lip 2000，作用 5 minb 用 500 l opti-MEM 稀释 10 l lip 2000，作用 5 minc 用 500 l opti-MEM 稀释 10 l lip 2000，作用 5 mind 用 500 l opti-MEM 稀释 10 l lip 2000，作用 5 min（3）分别将（1） 、 （2）对应的 a、b、c 、d 混合，轻轻吹打均匀后室温作用 20 min。（4）用无血清的 DMEM 将培养皿中的细胞清晰干净，至少 2 次（5）向培养皿中加入 3 ml 无血清 DMEM（6）向培养皿中加入 a 和 b 的混合液（成点状均匀加入）（7）放入细胞培养箱作用 6 h。4 下午三点对转染细胞进行换液：弃去无血清 DMEM 后每个 60 mm 培养皿加入 4 ml 含 10%血清的 DMEM，18 h 后接毒。
