1、蛋白质的生物合成,氨基酸活化肽链的起始肽链的延伸肽链的终止新合成多肽链的折叠和加工,阶 段 1氨基酸的活化2肽链的起始3肽链的延伸4肽链的终止5折叠和加工,必 需 组 分20种氨基酸20种氨基酰-tRNA合成酶20种或更多的tRNAATP，Mg2+mRNAN-甲酰甲硫氨酰-tRNAmRNA上的起始密码子（AUG）核糖体小亚基核糖体大亚基GTP，Mg2+起始因子（IF-1，IF-2，IF-3）功能核糖体（起始复合物）AA-tRNA伸长因子GTP，Mg2+肽基转移酶GTPmRNA上的终止密码子释放因子（RF-1，RF-2，RF-3） 参与起始氨基酸的切除、修饰等加工过程的酶,蛋白质合成各阶段的主要
2、成分简表,Mg,2+,1.氨基酸的活化氨基酸必须在氨酰tRNA合成酶的作用下 生成活化氨基酸AA-tRNA20种氨基酸20种氨酰-tRNA合成酶20种或更多的tRNAATP,*同一氨酰-tRNA合成酶具有把相同氨基酸加到 两个或更多个带有不同反义密码子tRNA分子上 的功能。,真核生物起始tRNA是Met-tRNAMet， 原核生物起始tRNA是fMet-tRNAfMet 。,tRNA与相应氨基酸的结合是蛋白质合成中的关键 步骤，可确保多肽合成的准确性。,蛋白质合成的起始是指:,在模板mRNA编码区5端形成核糖体- mRNA-起始tRNA复合物,并将(甲酰)甲硫氨酸放入核糖体P位点。,2. 翻
3、译的起始,mRNA(甲酰)甲硫氨酰tRNAmRNA上的起始密码子核糖体小亚基核糖体大亚基GTP, Mg2+起始因子,翻译的起始需要, The ribosome must berecruited to the mRNA; A charged tRNA must beplaced into the P site ofthe ribosome; The ribosome must beprecisely positioned over thestart codon (This is critical).,Three events must occur for translation to be su
4、ccessfully initiated,真核生物: 40 S小亚基首先与Met-tRNAMet相结合， 再与模板mRNA结合， 最后与60S大亚基结合生成80SmRNAMet-tRNAMet起始复合物。,翻译的起始 原核生物: 30 S小亚基首先与mRNA模板相结合， 再与fMet-tRNAfMet结合， 最后与50 S大亚基结合生成70SmRNAfMet-tRNAMet起始复合物。,细菌的翻译的起始, ,30 S小亚基 模板mRNA fMet-tRNAfmet 3个翻译起始因子，IF-1, IF-2, IF-3 GTP 50 S大亚基 Mg 2+,A specialized tRNA (i
5、nitiator tRNA) chargedwith a modified methionine (f-Met) bindsdirectly to the prokaryotic small subunit,N-甲酰甲硫氨酸,A special initiator tRNA starts the,polypeptide chain,A model of initiation factor binding to,the 30S ribosomal subunit, IF1 防止tRNA结合到小亚,基未来A位点的位置上。, IF2是GTP酶,它与起始过程的3个主要成分相互作用,催化fMet-tRN
6、AifMet和小亚,基的结合，并阻止其他负载,tRNA与小亚基结合。, IF3结合于小亚基并阻止其,与大亚基结合，对新的循环 至关重要。, 30S亚基具有专一性的识别和选 择mRNA起始位点的性质, IF3协助,该亚基完成这种选择。, 几乎所有原核生物mRNA上都有 一个5-AGGAGGU-3序列 (SD序 列)，这个富嘌呤区与30S亚基上 16S rRNA 3末端的富嘧啶区5- GAUCACCUCCUUA-3相互补。,The 16S rRNA interacts with the ribosome binding site to position the AUG in the P site,
7、细菌翻译的起始,翻译起始复合物的形成:,1. 30S小亚基与翻译起始因子IF-1， IF-3结合，通过SD序列与mRNA模,板相结合。,2. fMet-tRNAfMet在IF-2的协同 下进入小亚基的P位，tRNA上的反密 码子与mRNA上的起始密码子配对。3. 带有tRNA、mRNA、三个翻译 起始因子的小亚基复合物与50S大亚,基结合，释放翻译起始因子。,Met-tRNA,Met不甲酰化，,40S亚基对mRNA起始密码子的识别经过扫描 (Scanning)。,真核生物蛋白质生物合成的起始真核生物蛋白质生物合成的起始有其特点： 核糖体较大， 有较多的起始因子， mRNA具有m7GpppNp帽
8、子结构， mRNA分子5 端的“帽子”和3 端的多聚A都 参与形成翻译起始复合物，,The 5 end of eukaryotic mRNA is capped,真核mRNA通过帽子结构recruit核糖体(eIF-4E能专 一地识别帽子结构)，起始反应.,帽子在mRNA与40 S小亚基结合过程中起稳定作用. 带帽子的mRNA 5端与18 S rRNA的3端序列之间 存在不同于SD序列的碱基配对型相互作用.,真核细胞内蛋白质 合成的起始需要起 始因子及一个特殊,的起始tRNA,解开mRNA末端的二级结构,43S起始前复合体对mRNA的识别是从对5帽结构的识别开始的。该过程由eIF4F介导。eI
9、F3与eIF4F相互作用募集43S起始前复合体到mRNA上,Kozak的“扫描模型”,真核生物核糖体从 mRNA的5端（帽子) 向包括AUG起始密码 子的核糖体结合位点滑 动。依赖于ATP。G(A)及AUG后面的G可 十倍地影响翻译效率,起始密码子的识别是通过起始tRNA 的反密码子和起始密码子之间的碱,真核细胞小亚基对起始AUG的识别由eIF4F的RNA 解旋酶所驱动eIF2和eIF3的脱,离使得大亚基结 合到小亚基上,基配对作用大亚基的结合刺激了eIF5B-GTP的水解，导致剩余起始因子释放,Translation initiation factors hold,eukaryotic mR
10、NAs in circles,一旦核糖体完成了通过poly-A尾而环化的mRNA的 翻译，新释放的核糖体被理想地置于同一mRNA的起 始翻译位点上，提高mRNA的翻译效率。, 生成起始复合物，第一个氨基酸 （fMet/Met-tRNA）与核糖体结合以后，,肽链开始伸长。, 按照mRNA模板密码子的排列，氨基酸通,过新生肽键的方式被有序地结合上去。, 肽链延伸中的每个循环都包括:,AA-tRNA与核糖体结合; 肽键的生成;,移位。,3. 肽链的延伸,肽链的延伸需要, ,功能核糖体（起始复合物） AAtRNA伸长因子 GTP, Mg2+肽基转移酶,细菌中肽链延伸的第一步反应：新,的氨酰-tRNA结
11、合到A位。,该 氨 酰 -tRNA 首 先 与 EF- Tu GTP形成复合物，进入核糖 体的A位，水解产生GDP并在EF- Ts的作用下释放GDP并使EF-Tu 结合另一分子GTP，进入新一轮循,环。,1) 后续AA-tRNA,与核糖体结合, 由于EF-Tu只能与fMet-tRNA以外的 其他AA-tRNA起反应，所以起始tRNA 不会被结合到A位上，,mRNA内部的AUG不会被起始tRNA读,出，肽链中间不会出现甲酰甲硫氨酸。,2) 肽键的生成, 在核糖体mRNAAA-tRNA复合 物中，AA-tRNA占据A位，fMet- tRNAfMet占据P位。, 生长肽链的C端与P位的tRNA分离,
12、与新的氨基酸之间形成肽键。, 构象的变化导致大亚基的移动，使 两个tRNA的N端移到大亚基的E和P位 ，而在小亚基中它们仍位于P和A位。,多肽链上肽键的形成缩合反应,Peptide bonds are,formed by transfer of,the growing peptide chain from peptidyl-tRNA to aminoacyl-tRNA.,Protein is synthesized in a N- to C- terminal direction,核糖体是核酶,RNA环绕着大亚基的肽转移酶中心,肽键的形成是由23S rRNA组分催化的： 23S rRNA与处于
13、A和P位点的tRNA的 CCA末端之间的碱基配对，帮助氨基,酰tRNA的氨基基团攻击结合于肽酰-,tRNA的多肽的碳基团。,核糖体通过EF-G介导的GTP水 解所提供的能量向mRNA模板3,末端移动一个密码子，使两个,tRNA完全进入E位和P位(去氨 酰tRNA被挤入E位; 肽基- tRNA进入P位)，mRNA上的第 三位密码子对应于A位准备开始,新一轮肽链延伸。,3)移位,用嘌呤霉素(AA-tRNA的结构类似物)作为抑制 剂做实验表明,核糖体沿mRNA移动与肽基- tRNA的移位这两个过程是耦联的。,肽链延伸是由许多个这样的反应组成的：,原核生物中每次反应共需3个延伸因子，EF- Tu、EF
14、-Ts及EF-G，,真核生物细胞需EF-1及EF-2，消耗2个GTP,，向生长中的肽链加上一个氨基酸。,4. 肽链的终止需要, GTP, mRNA上的终止密码子 释放因子, 当终止密码子UAA、UAG或 UGA出现在核糖体的A位时，没 有相应的AA-tRNA能与之结合. 释放因子能识别这些密码子并 与之结合，水解P位上多肽链与 tRNA之间的二酯键，释放新生的 肽链和tRNA., 核糖体大、小亚基解体，蛋白,质合成结束。, 释放因子RF具有GTP酶活性， 它催化GTP水解，使肽链与核糖,体解离。,4. 肽链的终止,I类释放因子：, 识别终止密码子，, 能催化新合成的多肽链从P位点的tRNA中,
15、水解释放出来；,II类释放因子：, 在多肽链释放后刺激I类释放因子从核糖体,中解离出来。,释放因子(终止因子),细菌细胞:, RF1 (I类) 能识别UAG和UAA， RF2 (I类)识别UGA和UAA。,一旦RF与终止密码相结合，它们就能诱,导肽基转移酶把一个水分子而不是氨基 酸加到延伸中的肽链上。, RF3 (II类)与核糖体的解体有关。,真核细胞：, eRF1 (I类) 能识别三个终止密码子， eRF3 (II类),Termination,Elongation,Overview of the events of translationInitiation,Differences betw
16、een bacteria and eukaryotes,Eukaryotes Ribosome: 40S+60S- 80S Many initiation factors, eIF1, eIF1A, eIF2, eIF2B, eIF3,eIF4A, eIF4B, eIF4E, eIF4F,eIF4G, eIF4H, eIF5, eIF5B, eIF6 Elongation factors eEF1, eEF2, Release factors eRF1, eRF3 Most mRNA is capped at 5 end andpolyadenylated at 3 end 40S parti
17、cle is recruited to 5 capstructure or poly(A) tail or aninternal ribosome entry site (IRES) Translation is always (?) incytoplasm apart from transcription, Bacteria Ribosome: 30S+50S - 70S Few initiation factors:, IF-1(eIF1A), IF-2(eIF5B), IF-3 (?)Elongation factors EF1A (EF-Tu), EF1B (EF-Ts),EF2 (E
18、F-G),Release factors RF-1, RF2, RF3mRNA is not cappedDirect binding of 30S particle next to initiation codon (AUG) at Shine-Dalgarno sequence, 5-AGGAGGU-3Translation coupled to transcription,新生的多肽链大多数没有功能，必须经 过加工修饰才能转变为活性蛋白质。,蛋白质前体的加工,蛋白质 的 前 体 加 工 包 括： N端fMet或Met的切除 二硫键的形成, 特定氨基酸的修饰, 切除新生肽链中的非功能片段,
19、左:新生蛋白质在去掉N端一部分残基后变成有功能的蛋白质 右:某些病毒或细菌可合成无活性的多聚蛋白质，经蛋白酶切,割后成为有功能成熟蛋白。,新生蛋白质经蛋白酶切割后变成有功能的成熟蛋白质,1、N端fMet或Met的切除,无论原核生物还是真核生物，N端的甲 硫氨酸往往在多肽链合成完毕前就被一 种氨肽酶切除。,蛋白质前体的加工,2、二硫键的形成, 蛋白质的二硫键是蛋白质合成后通过 两个半胱氨酸的氧化作用生成的。, 二硫键的正确形成对稳定蛋白质的天 然构象具有重要的作用。,蛋白质前体的加工,氨基酸侧链的修饰作用包括：磷酸化（如核糖体蛋白质）糖基化（如各种糖蛋白）甲基化（如组蛋白）乙酰化（如组蛋白）泛素
20、化,羟基化（如胶原蛋白）羧基化等,蛋白质前体的加工3、特定氨基酸的修饰,磷酸化(Phosphorylation),主要由多种蛋白激酶催化，,发生在丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸等三种 氨基酸的侧链。,PKs (protein kinases) and PPs (protein phosphatases) mediate phosphorylation and dephosphorylation of proteins respectively.,糖基化, 糖蛋白主要是蛋白质侧链上的天冬氨酸、丝氨酸、苏氨酸残基加上糖基形成的；, 内质网可能是蛋白质N-糖基化的主要,场所。, 所有的分泌蛋白和膜蛋白几乎都
21、是糖,基化蛋白质。,前胰岛素原蛋白翻译后 成熟过程,4、切除新生肽链中非功能片段,蛋白质的折叠, 蛋白质折叠是翻译后形成功能蛋白质的必经,阶段 。, 是一个复杂的过程:,首先折叠成二级结构，然后再进一步折叠盘 绕成三级结构。,对于单链多肽蛋白质，三级结构就已具有蛋,白质的功能；,对于寡聚蛋白质，仍需进一步组装成更为复杂的四级结构，才能表现出天然蛋白的活性 或功能。,分子伴侣,（molecular chaperone）,分子伴侣是一类序列上没有相关性但有共同功能的保守性蛋白质，它们在细胞 内能帮助其它多肽进行正确的折叠、组 装、运转和降解。,蛋白质暴露的疏水区 域能相互作用,分子伴侣控制蛋白 质
22、折叠时的相互作 用,伴侣蛋白在其内部对 底物蛋白质进行折叠,分子伴侣的分类,(1) 热休克蛋白（heat shock protein）它是一类应激反应性蛋白，包括HSP70、,HSP40和GrpE三族，广泛存在于原核及真核细胞,中。三者协同作用，促使某些能自发折叠的蛋白 质正确折叠形成天然空间构象。,(2) 伴侣素（chaperonin）,包括HSP60和HSP10（原核细胞中的同源物分 别为GroEL和GroES），它主要是为非自发性折,叠蛋白提供能折叠形成天然结构的微环境。,分子伴侣的作用,伴侣分子在新生肽链折叠中的作用： 防止或消除肽链的错误折叠，, 增加功能性蛋白质折叠产率来发挥作用，
23、,而非加快折叠反应速度，, 分子伴侣本身并不参与最终产物的形成。,蛋白质生物合成的抑制剂主要是一些抗生 素，如嘌呤霉素、链霉素、四环素、氯霉素、 红霉素等。,此外，5-甲基色氨酸、环已亚胺、白喉毒 素、蓖麻蛋白和其他核糖体灭活蛋白都能抑 制蛋白质的合成。,蛋白质合成 抑 制 剂,蛋白质生物合成的抑制剂,的作用原理, 阻止mRNA与核糖体的结合； 阻止AA-tRNA与核糖体的结合；, 干扰AA-tRNA与核糖体结合而产生错读； 作为竞争性抑制剂抑制蛋白质的合成.,链霉素是一种碱性三糖,可以多种,方式抑制原核生物核糖体 ：, 能干扰fMet-tRNA与核糖体的结合， 从而阻止蛋白质合成的正确起始，
24、, 也会导致mRNA的错读。若以多聚(U) 作模板，则除苯丙氨酸（UUU）外，异 亮氨酸（AUU）也会被掺入。, 链霉素的作用位点在30 S亚基上。,通过提前释放肽链来抑,制蛋白质合成的, 不需要延伸因子就可以 结合在核糖体的A位上， 抑制AA-tRNA的进入。 它所带的氨基也能与生 长中的肽链上的羧基反应 生成肽键，反应的产物是 一条3羧基端挂了一个嘌 呤霉素残基的小肽,肽酰嘌 呤霉素随后从核糖体上解 离出来。,嘌呤霉素是AA-tRNA的结构类似物, 氯霉素阻止mRNA与核糖体的结合；, 四环素类阻止AA-tRNA与核糖体的结合； 链霉素、新霉素、卡那霉素干扰AA-,tRNA与核糖体结合而产
25、生错读。,青霉素、四环素和红霉素只与原核细胞核糖 体发生作用，从而阻遏原核生物蛋白质的合 成，抑制细菌生长。,氯霉素和嘌呤霉素既能与原核细胞核糖体结 合，又能与真核生物核糖体结合，妨碍细胞 内蛋白质合成，影响细胞生长。,干扰素是真核细胞感染病毒后产生的一类有 抗病毒作用的蛋白质。它可抑制病毒繁殖， 保护宿主。,由于细胞各部分都有特定的蛋白质组分，,因此合成的蛋白质必须准确无误地定向运 送才能保证生命活动的正常进行。,蛋白质运转机制,蛋白质在两种场所内合成, 大部分蛋白质是由细胞质中的核糖体合成的 小部分蛋白质是由某些器官，如线粒体、叶,绿体中的核糖体合成的,在细胞质中合成的蛋白质根据其位置又分
26、为： 1、与膜结合的；,2、不与膜结合的。, 蛋白质怎样从合成的部位运送至功能部位的？ 它们又是如何跨膜运送的？, 跨膜之后又是依靠什么信息到达各自“岗位”？,两种运转机 制 ：, 翻译运转同步机制(co-translational)某个蛋白质的合成和运转是同时发生的, 翻译后运转机制(post-translational),蛋白质从核糖体上释放后才发生的运转,这两种运转方式都涉及到蛋白质分子内 特定区域与细胞膜结构的相互关系。,蛋白质合成和运转示意图进行翻译时运转的蛋白质:,在合成过程中与内质网膜结合，,核糖体是“膜结合”的。合成后，蛋白质进入内质网， 经高尔基体后穿出细胞质膜。,如果这些蛋
27、白质具有某种信号，,则可能驻留在运输途径中的某 一环节，也可直接定位于其它 细胞器(溶酶体等)。进行翻译后运转的蛋白质:在细胞质中游离核糖体上合成 之后释放入细胞质，其中一些具有线粒体定位信号 或核定位信号。,几类主要蛋白质的运转机制,蛋白 性质,运 转 机 制,主 要 类 型,分泌,蛋白质在结合核糖体上 合成，以翻译运转同步机,制运输,细胞因子、生长因子、免疫球蛋白、 卵蛋白、水解酶、激素等,细胞器发育膜的形成,蛋白质在游离核糖体上 合成，以翻译后运转机制 运输两种机制兼有,核、叶绿体、线粒体、乙醛酸循环 体、过氧化物酶体等细胞器中的蛋 白质质膜、内质网、类囊体中的蛋白质,翻译-运转同步机制
28、蛋白质定位信息存在于自身结构中，并 通过与膜上特殊受体的相互作用得以表 达, 即蛋白质通过其信号序列与膜或其 它任何结构结合-信号肽假说的基础。,蛋白质跨膜运转信号也是由mRNA编码的。,信号序列：在起始密码子后，有一段 编码疏水性氨基酸序列的RNA区域， 这个氨基酸序列就被称为信号序列。,信号序列在结合核糖体上合成后便与膜上 特定受体相互作用，产生通道，允许这段 多肽在延长的同时穿过膜结构。,信号序列启动蛋白的运转,边翻译边跨膜运转,蛋白质通过其N-端的信号肽在内质网中,运转到不同的细胞器,绝大部分被运入内质网内腔的蛋白质都带有一个信号肽(signal peptide)，位于蛋白质的氨基末端
29、（13-36个残基）：（1）一般带有10-15个疏水氨基酸；,（2）在靠近该序列N-端常常有1个或数个带正电荷的氨基酸；（3）在其C-末端靠近蛋白酶切割位点处常常带有数个极性氨 基酸，离切割位点最近的那个氨基酸往往带有很短的侧链（丙 氨酸或甘氨酸）。, 信号肽能够形成包括两个-螺旋的,发夹结构。, 这一结构在信号识别颗粒(signalrecognition particle ,简称SRP)的帮助下插入到粗面内质网的膜中。,signal recognition particle ( SRP), SRP是一个小的RNA-蛋白质复合体,由约300个核苷酸的7S RNA和6种紧密结合的蛋白质(分子量从
30、972KDa)所组成。, 在翻译过程中它能够识别信号序列，指导核,糖体到转运通道。,SRP可以分为两个结构域：,（）信号识别结构域:由7S RNA的大约第100至第25 个核苷酸部分与19KDa、54KDa、68KDa和72KDa蛋白 质所构成。,（）延伸作用制动结构域: 7S RNA的其余部分(相当 于Alu序列)与9KDa和14KDa蛋白质所构成,其功能是使 肽链的延伸暂停。,SRP（信号识别蛋白）能同时识别需要通过 内质网膜进行运转的新生肽和自由核糖体， 并导致该多肽合成的暂时终止（此时新生肽 一般长约70个残基左右）。,SRP-信号肽-多核糖体复合物即被引向内质网 膜并与SRP的受体D
31、ocking Protein（停 靠蛋白，又称SRP受体蛋白）相结合。,SRP和DP蛋白介导了蛋白质的跨膜运转过程, 只有当SRP与DP相结合时，多肽合成才恢 复进行，信号肽部分通过膜上的核糖体受体 及蛋白运转复合物跨膜进入内质网内腔，新 生肽链重新开始延伸。, SRP与DP的结合很可能导致受体聚集而形 成膜孔道，使信号肽及与其相连的新生肽得 以通过。,SRP和DP蛋白介导了蛋白质的跨膜运转过程,蛋白质跨膜运转的信号肽假说及其运输过程,信号肽在蛋白质运输过程中的作用, 完整的信号肽是保证蛋白质运转的必要条件。 仅有信号肽还不足以保证蛋白质运转的发生。还要求运转蛋白质在信号序列以外的部分有相应的
32、结构变化。, 信号序列的切除并不是运转所必需的。, 并非所有的运转蛋白质都有可降解的信号肽。,“信号肽”：,能启动蛋白质运转的任何一段多肽,新生蛋白质通过同步转运途径进入内质网内腔 的主要过程。,翻译后运转机制,1、线粒体蛋白质跨膜运转2、前导肽的作用和性质,3、叶绿体蛋白质的跨膜运转,线粒体蛋白质的跨膜运转,被运转蛋白质大多数以前体形,式存在：,由成熟蛋白质和位于N端的前 导肽（leader peptide）组成,是一种需能过程；,来自线粒体Hsp70引发的ATP 水解和膜电位差,运转时，首先由外膜上的Tom受体复合蛋白识别与Hsp70或MSF等分子伴侣相结合为待运转多肽，通过Tom和Tim
33、组成的膜通道进入线粒体内腔。,带正电荷的碱性氨基酸（特别是精氨酸）含量较为 丰富，分散于不带电荷的氨基酸序列之间；缺少带负电荷的酸性氨基酸；羟基氨基酸(Ser等)含量较高；,有形成两亲(既有亲水又有疏水部分)-螺旋结构的能,力。,前导肽的作用与性质,前导肽的不同区域可能在蛋白质跨膜运转,过程中起不同的作用,“止运入”肽段,叶绿体多肽在胞质中的游离核糖体上合成后 脱离核糖体并折叠成具有三级结构的蛋白质分 子，,多肽上某些特定位点结合于只有叶绿体膜上 才有的特异受体位点。,叶绿体蛋白质的跨膜运转,叶绿体定位信号肽一般有两个部分：, 第一部分决定该蛋白质能否进入叶绿体基质， 第二部分决定该蛋白能否进
34、入类囊体。,叶绿体蛋白质跨膜运转,可溶性的活性蛋白水解酶位 于叶绿体基质内，这是鉴别 翻译后运转的指标之一。,叶绿体膜上有识别叶绿体蛋 白的特异性受体，能够特异 地与叶绿体蛋白的前体结合。,叶绿体蛋白质前体内可降解 序列因植物和蛋白质种类不 同而表现出差异。,核定位蛋白的运转机制,在细胞质中合成的蛋白质,核孔,细胞核,Nuclear pores are used for import and export,Nuclear pores are large symmetrical structures,Nuclear pores appear as annular structures (环状八重
35、对称结构,A carrier protein binds to a,substrate, moves,with it through the nuclear pore, is released on the other side, and,must be returned for reuse.,Transport,receptors carry cargo proteins,through the pore,SHRIKESH SACHDEV, et al., MOLECULARAND CELLULAR BIOLOGY, 1998, 2524-2534.,NES：疏水性氨基酸尤其是亮氨酸和异亮氨
36、酸富集区域,CRM1依赖型：被CRM1 (chromosome region maintenance-1)识别并结合，从而携带蛋白出核。此种出核能被Leptomycine-B（LMB）抑制。,出核信号序列NES,(nuclear export sequences),为了核蛋白的重复定位，这些蛋白质中的信号肽被称为核定位序列 (NLS)一般都不被切除。,NLS可以位于核蛋白的任何部位。,蛋白质向核内运输过程需要核运转因子,（Importin）、和一个低分子量GTP酶,（Ran）参与。,核定位序列,(NLS-Nuclear Localization Sequence),经典NLS,单分型：由48个
37、aa组成的富含碱性氨基酸的短肽，,K(K/R)X(K/R)，被入核因子识别并携带入核。如SV40-NLS (126PKKKRKV132) 。,双分型：由两簇碱性氨基酸组成，两簇序列之间被1012,个非保守氨基酸残基间隔，R/K(X)10-12RRKK。如,Nucleoplasmin: KR-10aa-KKKL171，P53: KR-12aa-KKK321。 非经典NLS1：,如IB，包含于第二锚蛋白重复序列上，疏水性氨基酸。,核定位信号序列NLS,核定位蛋白跨细胞核 膜运转过程示意图,和组成的异源二聚体是,核定位蛋白的可溶性受体，,与核定位序列相结合的是,亚基。,这些蛋白组成的复合物停靠 在核
38、孔处，依靠Ran GTP酶 水解GTP提供的能量进入细 胞核。,和亚基解离，核蛋白与 亚基解离，和分别通过核,孔复合体回到细胞质中，起 始新一轮蛋白质运转。,Bacterial proteins may be exported either post-,translationally or co-translationally, and may be located within either membrane or the periplasmic space, or may be secreted.,Bacteria use both co-translational and post-tr
39、anslational translocation,细菌中蛋白质的跨膜运转,细胞膜运转复合物,SecA-SecYEG,分子伴侣,蛋白质的降解,蛋白质降解是一个有序的过程。,2004年诺贝尔化学奖：,阿龙切哈诺夫（以色列） 阿夫拉姆赫尔什科（以色列) 欧文罗斯（美）,找到了人体细胞控制和调节某种人体蛋白质数量多少的方法。他们发现， 人体细胞通过给无用蛋白质“贴标签”的方法，帮助人体将那些被贴上 标记的蛋白质进行“废物处理”， 使它们自行破裂、自动消亡。,泛素调控的蛋白质降解具有重要的生理意义,它不仅能够清除错误蛋白质, 对细胞生长周期、DNA复制以及染色体结构都有重要的调控作用，而且对 于理解细
40、胞的许多生理过程和新药的开发具有重要的意义。, 在大肠杆菌中，许多蛋白质的降解是通过一个依赖于ATP的蛋白酶(称为Lon)来实现的。, 当细胞中存在有错误或半衰期很短的蛋,白质时，该蛋白酶就被激活。, 每切除一个肽键要消耗两个分子ATP。, 真核蛋白的降解依赖于一个 只有76个氨基酸残基、其序列 高度保守的泛素(Ubiquitin)。, 细胞内即将被降解的蛋白首 先在ATP的作用下与泛素相连 （需要E1(连接泛素), E2(负责 将泛素从E1转移到底物), E3( 结合底物蛋白)三个降解因子 的参与），并将该复合体运送 到特定的蛋白降解体系(蛋白 酶体)中直到完全降解。, 成熟蛋白N-端的第一
41、个氨基酸（除已被切除的N 端甲硫氨酸之外，但包括翻译后修饰产物）在蛋白 的降解中有着举足轻重的影响。, 当某个蛋白质的N端是甲硫氨酸、苷氨酸、丙氨酸 、丝氨酸、苏氨酸和缬氨酸时，表现稳定。, 其N端为赖氨酸、精氨酸时，表现最不稳定，平均 2-3分钟就被降解了。,蛋白质的半衰期与N-端氨基酸残基的关系,N-端残基稳定型残基甲硫氨酸、苷氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、缬氨酸不稳定型残基异亮氨酸、谷氨酰胺酪氨酸、谷氨酸脯氨酸亮氨酸、苯丙氨酸、天门冬酰胺、赖氨酸精氨酸,半衰期20h30min10min7min3min2min,从DNA到蛋白质,泛素化,Ubiquitylation, Ubiquityla
42、tion is the covalent attachment ofubiquitin to the -amino group of lysines viaisopeptide bonds(异肽键)., Polymeric ubiquitin chains usually target proteins,for proteasomal degradation, whereas,monoubiquitylation can control various functions. A hierarchical cascade connecting an activatingenzyme (E1) w
43、ith several conjugating enzymes (E2)and protein ligases (E3) mediates ubiquitintransfer to a protein.,Enzymes and reactions of theubiquitin/proteasome system.,The E1 catalyzes the formation of a ubiquitin thiol ester in an ATP- dependent reaction.,The thiol-linked ubiquitin can then be transferred t
44、o an E2 in the conjugation reaction.,The ligation reaction is promoted by ubiquitin ligases, or E3 proteins. Ubiquitination may be reversed by de-ubiquitinases (DUBs).,The crystal structures of E3 ligase and thecomplex of E3 ligase with its substrate,DDB1CUL4AROC1泛素连接酶与猴病毒 5的V蛋白复合物的晶体结构. Angers, et
45、al., Nature, 2006, 443:590.,SCFSkp2E2复合物的结构. Zheng, et al., Nature, 2002, 416:708.),A Diverse Array of Ubiquitin Chain Linkages CanLead to Different Outcomes for the Substrate Protein and Result in Different Cellular Responses,The regulation of p53 by the ubiquitin system illustrates thecomplex inte
46、rplay between DUBs and E3 ligases,By regulating p53 levels through their deubiquitinating activities, USP7 and USP2a may contribute to cancer pathogenesis. Therapeutic strategies that target these p53-specific DUBs are becoming important as cancer treatments.,TNF-receptor-1and TLR4IL-1-receptor-indu
47、ced signaling pathways,towards NF-kB,activation,小泛素相关修饰物修饰,（Sumoylation）, SUMO (small ubiquitin-like modifier) modification is the covalentattachment of SUMO to lysine residues usually located within ornear the consensus sequence -K-x-E (where , hydrophobic; x,any amino acid residue; K, lysine; E, g
48、lutamic acid)., Although analogous to ubiquitin in biochemistry, the molecularrole of SUMO conjugation is usually not the induction of proteindegradation., Sumoylation rather alters protein interactions, protein,localization and transport., Four different SUMO proteins have been discovered to datewhich are referred to as SUMO14. A hierarchical cascadeconnects the E1 activating enzyme AOS1-UBA2 with the E2SUMO conjugase Ubc9, which catalyses the transfer of SUMOto a protein. E3 ligases enhance sumoylation in a more or lesssubstrate-specific manner.,
