1、定量一站式问题,汇报人：贾彦军,主要内容,1. RT-PCR基础知识,2.RNA提取要点,3.逆（反）转录注意事项,4.Qreal time PCR 分析,PCR基础知识,PCR &定量PCR&实时荧光定量PCR RT-PCR 定量PCR的原理 定量PCR的用途 定量PCR的基本流程,用途,GWAS,流程,实验设计,引物设计及合成,结果整理,数据分析,Real time-PCR,反转录cDNA,基因组DNA去除,Total RNA 提取,Total RNA提取,1.样品的保存 2.试剂的选择 3.操作的细节 4.RNA质与量的检测及保存,样品的保存,试剂的选择,广谱RNA提取试剂 小RNA提取
2、试剂 体液RNA提取试剂 体液miR-RNA提取试剂 病毒、细菌、多糖多酚植物RNA提取试剂,操作,速度&质量,全程低温（cen）,液氮使用,器械耗材准备,个人防护,实验环境,手法得当,DEPC,快、冷、准、细,细节决定一切,操作细节,细节总结,RNA,RNA质与量的验证,浓度,完整性,纯度,琼脂糖凝胶电泳（TBE） 沉降系数 紫外分光光度计、荧光光度计,反转录注意事项,加样（顺序、预混、低温、涡旋、离心） 上机（程序、位置、手法） cDNA的保存（-20、 -80 ）,Q real time-PCR,试剂选择与保存（Syber &ddH2O&Primer） 操作要点 结果分析 注意事项,试剂保存,Syber Green&/FAM:4、-20 、-80 （白色沉淀处理） ddH2O Primer(稀释、保存、顺序、量) cDNA (用量选择适当决定Ct值),结果分析-扩增无峰值,扩增有杂峰,扩增有杂峰,填充好的 Needleman-Wunsch 表格,扩增有杂峰,欧洲生物信息学研究所BLAST服务器的用户界面,扩增有杂峰,扩增有杂峰,扩增效率有异常,注意事项,不经一番寒彻骨,哪得梅花扑鼻香,天道酬勤,众志成城,衣带渐宽终不悔,为伊消得人憔悴,请提出宝贵的改进意见！,谢谢大家！,
