1、大肠杆菌转化实验（热击法）大肠杆菌转化可以：（1）将重组 DNA 分子导入大肠杆菌受体细胞进行复制，增殖和表达，以获得目的基因；（2）验证大肠杆菌感受态细胞效果；（ 3）用于分子生物学其他研究。1原理：质粒 DNA 粘附在细菌细胞表面，经过 42C 短时间的热击处理，促进吸收 DNA.然后在非选择培养基中培养一代，待质粒上所带的抗菌素基因表达，就可以在含抗菌素的培养基中生长。2器材：旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml 微量离心管，双面微量离心管架，干式恒温气浴（或恒温水浴锅），制冰机，恒温摇床，培养皿（已铺好固体 LB-Amp），超净工作台，酒精灯，玻璃涂棒，恒温培养箱。3材料
2、和试剂：质粒 DNA，重组 DNA，培养基（不加抗菌素），LB 培养基（加抗菌素），无菌ddH2O，IPTG，X-gal。4实验准备：无菌 ddH2O， 1.5ml 离心管装入铝制饭盒（灭菌）、移液器吸头装入相应的吸头盒（灭菌），20%IPTG（M/V ），2% X-gal（M/V ，用 N,N-二甲基甲酰胺配）。5操作步骤：（1）事先将恒温水浴的温度调到 42。（2）从 -70 超低温冰柜中取出一管（100l ）感受态菌，立即用手指加温融化后插入冰上，冰浴 510min。（3） 加入 10l 连接产物（一般是全部连接产物）（ DNA 含量不超过 100ng），轻轻震荡后放置冰上 20min。
3、（4） 轻轻摇匀后插入 42水浴中 90 秒进行热休克，然后迅速放回冰中，静置35min。（5） 在超净工作台中向上述各管中分别加入 900l LB 培养基（不含抗菌素）轻轻混匀，然后固定到摇床的弹簧架上 37震荡 30min 到 50min（6） 在超净工作台中取上述转化混合液 100300l，分别滴到含合适抗菌素的固体 LB平板培养皿中，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀（注意：玻璃涂布棒上的酒精熄灭后稍等片刻，待其冷却后再涂）。（7） 如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话，滴完菌液后再在平板上滴加 40l 2% X-gal，8l 20% IPTG，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。（8） 在涂好的培养皿上做上标记，先放置在 37恒温培养箱中 30-60min 直到表面的液体都渗透到培养基里后，再倒置过来放入 37恒温培养箱过夜。（9） 在被细菌污染的桌面上喷洒 70%乙醇，擦干桌面，写实验报告。（10 ）观察平板上长出的菌落克隆，以菌落之间能互相分开为好。注意白色菌斑。
