1、化 验 室 培 训 教 材第一节：乳的概念及基础理论一概念：牛乳是乳牛为哺育幼牛而从乳腺分泌的一种白色或淡黄色不透明微有甜味的生物学液体，是一种全营养物质。二成分：乳是各种化学物质的混合物，其成分有水、蛋白质、脂肪、碳水化合物各种矿物质和维生素，还含有酶类及其他微量成分等。乳中所含有的水分大部分是以游离状态存在，成为乳的胶体体系的分散媒。碳水化合物和矿物质呈溶液状态存在，形成真溶液；脂肪以脂肪球状态呈乳浊液和悬浊液分散在乳中，成为乳浊质。蛋白质以极细的微胶粒状态呈悬浊质、乳浊质存在于乳中，成为胶体溶液。乳就是以真溶液、胶体溶液和乳浊液三种体系组成的一种均匀的生物学液体，其稳定性相当高。正常牛乳
2、中的各种成分大体上是稳定的，但受乳牛的品种、个体差异泌乳期、年龄、饲料、季节、气温、挤奶状况及健康状况等因素影响而有所不同。基中变化最大的是脂肪，其次是蛋白质，乳糖和灰分变化较小。一般将牛乳分为水分和乳固体两大部分，而乳固体又分为脂质和非脂乳固体。牛乳的主要成分如下表。成 分 含量（ %）水分：包括游离水、结合水、结晶水 8688脂肪：由一个分子的甘油和三个分子的脂肪酸组成 35蛋白质：包括酪蛋白、乳清蛋白和少量的脂肪球膜蛋白 2.83.8乳糖：可分解为葡萄糖和半乳糖 4.55.0矿 物 质 ： 按 含 量 排 列 主 要 有 钾 、 钙 、 氯 、 磷 、 钠 、 镁 、 硫 等 0.7三营
3、养：牛乳是一种全价的营养品，含有人体所需的各种成分。乳脂肪不同于一般脂肪，含有的脂肪酸种类较一般脂肪多。这是与反刍动物瘤胃中微生物的生物合成相关的。乳脂肪中水溶性、挥发性的脂肪酸含量高，这类脂肪风味好易于消化。乳中蛋白质含量较高，机体的运动便是源于蛋白质的支持。蛋白质水解的最终产物是氨基酸，氨基酸是构成细胞的基础物质。乳糖的甜度是蔗糖的 1/41/6，是哺乳动物和人类乳腺所分泌的一种特有化合物，在动、植物的组织中几乎不存在，仅存在于乳中。维生素是维持人体正常生理功能所必需的一类低分子化合物，在人体内几乎不能被合成，完成需要通过食物来摄取。牛乳中含有几乎所有已知的维生素。牛乳中还含有丰富的矿物质
4、及其他微量元素。四牛乳的物理化学性质：1 牛乳的色泽：新鲜的牛乳一般呈乳白色或淡黄色。乳白色是酪蛋白酸钙、磷酸钙及脂肪球对光的反射和折射产生的；脂溶性的胡萝卜素和叶黄素、水溶性的核黄素使牛乳呈淡黄色。2 牛乳的滋味和气味：新鲜的牛乳具有特殊的香味。牛乳的气味主要成分有低级脂肪酸、羰基化合物及挥发性成分。甲硫醚是风味的主要成分。牛乳的滋味是微甜味，微酸味、微咸味及苦味四种滋味混合在一起组成的。3 牛乳的冰点：牛乳冰点为-0.53-0.55，平均为-0.542牛乳中掺水会导致冰点回升，掺水 10%，冰点约上升 0.054。因此可根据冰点的变化来推算掺水量。4 牛乳的沸点：牛乳的沸点在 1 个大气压
5、下约为 100.55。乳在浓缩过程中沸点继续上升，浓缩到原体积的一半时，沸点约上升到 101.05。5 牛乳的密度与相对密度：乳的密度指在 20时的质量与同体积的水在 4时的质量之比。正常乳的密度平均为 1.030。相对密度是指某物质的重量与同温度同体积的水的重量之比。以 15为标准，乳的相对密度为 1.032。乳的密度随温度的变化而变化。在 1025内，温度每变化 1，乳的密度相差 0.0002。6 牛乳的粘度：牛乳的粘度在 20时为 1.52.0mPas。7 牛乳的酸度：正常牛乳的酸度为 1618。 T，pH 值为 6.46.8，pH 值低于 6.4 的酸度一般为酸败乳，pH 值高于 6.
6、8 的乳可能是乳房炎乳。第二节 生产工艺一 工艺流程：收奶 净乳 冷却（巴杀） 配料 均质 巴杀 闪蒸 贮存 UHT 无菌灌装 贴管 装箱 入库 出厂 保温试验 二 生产中应注意的问题：1 收奶中应注意的问题：不得混入过多的空气。 （微生物、脂肪）2 各工艺过程：搅拌、均质、巴杀、闪蒸、贮存、配料、UHT、无菌灌装等。3 脂肪上浮的机理：牛奶中脂肪的密度约为 930kg/m3，而牛奶的密度为 10281032930kg/m3，因此牛奶中脂肪上浮是一种自然现象。根据斯托克公式，其上浮速度为：v = dp2( 1- 2)g18 1其中：v：上浮速度dp：乳脂肪直径 1：奶的密度 2：脂肪的密度 1
7、：奶的粘度由此可见，脂肪的上浮速度和乳脂肪球直径的平方成正比，而未均质奶的乳脂肪直径平均为 34 微米，均质后直径可达 0.2 微米，大大降低了脂肪球的上浮速度，因此均质的效果将直接影响脂肪的上浮。脂肪上浮产生的原因：1 很明显，不良的均质效果将很快导致脂肪上浮，因此，保证良好的均质效果是防止脂肪上浮的必要条件，但总结近年来成品脂肪上浮的原因却并非由于均质效果不良引起的，而是由下述原因引起的。2 原料奶的细菌数或嗜冷菌过高。脂肪球外覆着一层脂肪球膜，主要由磷脂、蛋白、微量金属元素及结合水等组成，球膜内充满各种自由脂肪酸。若原料奶中的细菌数过高，成其是嗜冷菌数过高，其代谢产生产部分脂肪酶和蛋白酶
8、可存活于超高温灭菌中，分解脂肪球膜，使自由脂肪酸游离出来并聚合在一起，从而导致脂肪上浮。3 过度的机械处理。乳脂肪的熔点从-7.9至 69.3，一般情况下，经中度的机械处理不会破坏脂肪球膜。但如果在低温下经过度的机械处理，如：高速搅拌、往复循环等，由于低温下乳脂肪的可塑性差，脂肪球很容易被破坏，从而使脂肪酸游离，导致脂肪上浮。4 低温下均质。如在低温下均质，乳脂肪呈固态，在强大的机械力作用下，不易形成完整的脂肪球膜，反而加速了自由脂肪酸的结合。5 原料乳在接收和预先处理过程中混入过多空气。第三节 检验计划一 原辅料检验计划二 过程检验计划三 成品检验计划第四节 化验室的安全操作一废弃物的处理：
9、酸、碱的处理必须用大量的水冲入下水道；氰化物须单独处理；强氧化剂和强还原剂不能和有机化学药品放在一起。二意外事故的处理：出现意外事故时要沉着冷静，临危不惧，及时抢救，要勇敢，更要有科学态度。1 火灾：出现火灾时，要立即切断电源，并使用灭火器材，同时与有关部门联系，请求援助。水是较常用的灭火材料，但化验室起火时，是否用水来灭火要十分慎重，因为有些化学药品比水轻，会浮在水上流动，反而可能扩大火势；有的药品会与水反应发生燃烧甚至爆炸。2 触电：遇到触电时，首先应该使触电者迅速脱离电源，但不能徒手去拉触电者，以免抢救者遭电击，应迅速用绝缘物切断电源。将触电者抬至空气新鲜处，如情况不严重，能在短时间内自
10、行恢复知觉。若已停止呼吸，应进行人工呼吸同时给氧。3 割伤：割伤时，若有玻璃碎屑混入伤口的，必须立即取出。将伤口清理干净后，在伤口上涂抹红药水或龙胆紫药水，再用消毒纱布包扎。4 烫伤或烧伤：如皮肤只出现红痛或红肿，可涂以 95%的酒精并浸湿纱布盖于伤处或用冷水止痛；如皮肤起泡，除以上方法外，还可用 3%5%的高锰酸钾涂抹并用纱布包扎；如组织破坏，皮肤出现黑色、棕色或白色，需用消毒纱布后去医院治疗。注意不要把烫伤引起的水泡弄破，以防止感染。5 化学灼伤：化学灼伤时，应立即脱掉衣服，清除皮肤上的化学药品，并用大量干净的水冲洗，再用消除这种有害药品的特种溶剂处理。A 如被碱类灼伤，需立即用大量的水洗
11、涤，然后用醋酸溶液（20g/l）冲洗或撒硼酸粉。B 如被酸类灼伤，需立即用大量的水冲洗，然后用 NaHCO3 的饱和溶液冲洗。C 如果眼睛受到化学灼伤，最好的方法是立即用洗涤器的水流洗涤，避免水流直射眼球，也不要揉搓眼睛。用大量的细水流冲洗后，如果是碱灼伤，再用 20%硼酸溶液淋洗；如果是酸灼伤，则用3%碳酸氢钠溶液淋洗。第五节 质量保证的基础知识一 各英文缩写的意义1 QA： quality assurance 质量保证2 QC: quality control 质量控制3 GMP: good manufacturing practice 优质生产规范4 GLP: good laborato
12、ry practice 优质实验室规范5 HACCP: hazard analysis and critical control point 危害分析与关键控制点6 IDF: international dairy federation 国际乳品联合会7 UHT：ultra high temperature 超高温8 AQL: accept quality level 产品可接受质量水平9 AQL 的定义：在超高温产品生产中，最重要的产品质量缺陷是由各种微生物原因引起的产品坏包。因此，产品可接受质量水平在实际生产中被定义为特定规格的产品在正常的连续生产中所得的由微生物残留引起的坏包数量和生产成
13、品总量之间的比例，即可接受的最大坏包率。二 实验室的相关理论1 药品的分级：A作为标定的基准物质，必须为优级纯，简称 GR；B分析纯试剂：简称 AR，为理化检验常用试剂；C化学纯试剂：简称 CR，可用于微生物检测中；D 实验试剂：简称 LR，由于纯度较低，一般较少采用。三标准：1国家标准：GB/T、GB2地方标准：DB3商业标准：SB4企业标准：QB第六节 牛乳的理化检验方法一几种常见的指示剂的变色范围颜色指示剂名称 变色域 pH酸性 碱性甲基橙 3.14.4 红 黄溴甲酚绿 3.85.4 黄 蓝甲基红 4.26.3 红 黄酚酞 8.09.8 无色 红二几种常用的洗涤液的配制洗涤液及其配方 使
14、用方法铬酸洗液：研细的重铬酸钾 20g 溶于 40ml 水中，慢慢加入 360ml 浓硫酸用于去除器壁残留油污。用少量洗液涮洗或浸泡一夜，洗液可重复使用。洗涤废液经处理解毒方可排放工业盐酸（浓或 1：1） 用于洗去碱性物质及大多数无机物残渣碱性洗液：氢氧化钠 10%水溶液或乙醇溶液 水溶液加热（可煮沸）使用，其去油效果较好。煮的时间不可太长。碱性高锰酸钾洗液：4g 高锰酸钾溶于水中，加入 10g氢氧化钠，用水稀释至 100ml清洗油污或其它有机物质，洗后窗口沾污处有褐色二氧锰析出，再用浓盐酸或草酸洗液、硫酸亚铁、亚硫酸钠等还原剂去除。草酸洗液：510g 草酸溶于 100ml 水中，加入少量浓盐
15、酸洗涤高锰酸钾洗液洗后产生的二氧化锰，必要时加热使用碘碘化钾溶液：1g 碘和 2g 碘化钾溶于水中，用水稀释至 100ml洗涤用过硝酸滴定液后留下的黑褐色沾污物，也可用于擦洗沾过硝酸银的白瓷水槽有机溶剂：苯、乙醚、丙酮、二氯乙烷等 可洗去油污或可溶于该溶剂的有机物质，用时要注意其毒性及可燃性。用乙醇配制的指示剂溶液的干渣可用盐酸乙醇（1：2）洗液洗涤乙醇、浓硝酸（不可事先混合） 用一般方法很难洗净的少量残留有机物可用此法：于容器内加入不多于 2ml 的乙醇，加入 10ml 浓硝酸，静置片刻，立即发生激烈反应，放出大量热及二氧，反应停止后再用水冲洗。操作应在通风柜中进行，不可塞住容器，作好防护三
16、脂肪的检测：1盖勃法：A原理：盖勃法是一种容量法。用硫酸把乳制品中以酪蛋白钙盐形态存在的酪蛋白转变为可溶性的重硫酸酪蛋白化合物与不溶性的硫酸钙，溶解脂肪球膜，把脂肪释放出来。异戊醇的加入是促进脂肪的分离。B仪器和设备：乳脂计、乳脂计胶塞、乳脂计架、10.75ml 的移液管、10ml 的刻度吸管、1ml 的刻度吸管。C试剂：1）硫酸：密度为 1.8201.825g/ml2）异戊醇：分析纯（空白试验为 0）D测定步骤：1）在乳脂计中加入 10ml 硫酸；2）移取 10.75ml 的液体乳样缓慢放入乳脂计中，使乳样浮在硫酸上面，不和硫酸发生混合；3）加入 1ml 异戊醇，旋好塞，混合时，乳脂计会变得
17、很热，为防止烫手，可用毛巾包着混合，直到没有奶块；4）将乳脂计塞朝下放入离心机中，离心 45 分钟；5）取出乳脂计，放入水浴锅中水浴 5 分钟后读数。读数时要将脂肪柱的下弯月面放在与眼同一水平面，观察时可移动胶塞使脂肪柱的下弯月面与某一大格刻度相吻合。E结果表示：脂肪的含量为乳脂计刻度管中脂肪柱上下弯月面的读数差，两次测定的结果误差不得超过最小刻度值的一半。F说明：1）在酸法盖勃法测定脂肪中，应注意硫酸浓度。其密度为 1.8201.825，浓度为 9091%。如果硫酸浓度过高会使蛋白碳化，读数困难。硫酸浓度过低，水相与脂肪相之间分离不好，脂肪就测不出来。所以硫酸的比重一定要掌握好。2）异戊醇的
18、作用一是促进磷脂从蛋白质中分离，二是有利于游离脂肪从水相中分离。若异戊醇中存在杂质，可能会导致结果偏高。可以蒸馏水代替牛奶来进行空白试验：在乳脂计中摇匀后，将脂肪计静止24 小时，如果在乳脂计内上部没有油层或油珠析出，证明此异戊醇可使用。3）硫酸浓度较大，使用时要注意安全。2罗兹哥特里法：这是一种基准方法，属仲裁法。A 原理：用氨水来处理牛乳，使酪蛋白钙盐成为易溶解的盐，促进脂肪球乙醚的作用，加入乙醇，使一系列的能被酒精浸出的物质留在水相中，利用乙醚将脂肪从牛乳中抽出，加入石油醚使乙醚不被水饱和。将醚层倒入收集瓶中，后使乙醚和石油醚挥发掉，就可以得出剩在脂肪收集瓶中的样品的脂肪的重量。B 仪器
19、设备：1）分析天平2）离心机：可以 500600r/min，8090 g 加速离心毛氏抽脂瓶，使毛氏瓶的外顶端的离心加速度为8090 g。3）振摇器：以 80120 下每分的频率摇混毛氏抽脂瓶中的液体。4）蒸馏或挥发设备：使脂肪收集瓶中的醚和乙醇能在低于 100的条件下挥发掉。5）烘箱：带合适温度计，箱内工作空间内温度控制在 1022。6）毛氏抽脂瓶：形状要符合要求并需配软木塞。软木塞平常要一直浸泡在蒸馏水中，所用水要每天更换。第一次使用的软木塞需用乙醚至少浸泡 60 分钟，再浸泡在水中。7）毛氏抽脂瓶架。8）吹瓶：适于使用混合醚。9）脂肪收集瓶：125250ml 锥形并或 250ml 左右、
20、直径 80100 毫米、高约为 50 毫米的平底不锈钢皿。10） 刻度吸管：2ml、5ml、10ml 、25ml。C试剂：所有试剂都应是分析纯的，所用水至少应是蒸馏水。使用新试剂测定前，应进行空白试验以检验试剂的质量。空白试验中的残留物不得大于 0.5mg。若大于 0.5mg，则需对 100ml 的乙醚和 100ml 的石油醚分别测试。分别测试中的残留物不得多于 0.5mg。1） 氨水：NH3 的质量浓度为 250g/l。2） 乙醇：体积分数不低于 94%。3） 刚果红：将 1g 刚果红溶于水，稀释到 100ml。4） 乙醚：不含过氧化物，不含抗氧化剂或含量低于 2mg/kg，满足试剂空白试验
21、的要求。5） 石油醚：沸程 3060，满足试剂空白试验的要求。6） 混合醚：等体积乙醚和石油醚混合，不可久存。D测定步骤：1）脂肪收集瓶的准备：将干净的脂肪收集瓶在烘箱中至少烘 1 小时。取出脂肪收集瓶在天平室内冷却至室温（要防止灰尘，玻璃瓶至少要冷却 1 小时，金属皿至少要冷却半小时） 。冷却时为避免不完全冷却，脂肪瓶要放在干燥器中，称取脂肪收集瓶的质量，准至 0.1mg。称量时要带手套或使用夹子。2）样品的称取和抽提准备：a. 用 10ml 或 10.75ml 吸管将样品移入置于分析天平上的毛氏抽脂瓶内，直接称取 1011g，准至0.1mg。b. 加入 2ml250g/l 或更浓的氨水，在
22、小球内混合均匀。加完氨水后，应将实验一直作完，不得停顿或延误。c. 将抽脂瓶放入 655水浴中保温 1520 分钟，不时摇晃，然后取出，用自来水冷却至室温。3）空白试验：在测定的同时进行空白试验，用 10ml 水代替样品，其他同样品测定。4）加入 10ml 乙醇，混好。允许流体在小球和大柱之间流动，只是要避免液体过于接近瓶口。加入两滴刚果红溶液，混好。 （刚果红的加入是为了使醚层和水层更易于分辨，不加也可以） 。5）加入 25ml 乙醚，塞紧塞后，以小球朝上的位置放置于振摇器上摇混 1 分钟，或两手分握抽脂瓶的两端，以相同位置和振幅摇混 1 分钟。小心地拔掉塞子，用少量混合醚淋洗塞子和瓶口，使
23、淋洗液都流入瓶内。6）加入 25ml 石油醚，塞塞，在振摇器上摇半分钟。7）把毛氏抽脂瓶带塞离心 15 分钟。如果没有离心机，则可将抽脂瓶置于支架上放置 30 分钟以上，至醚层和水层完全分开。8）小心地拔掉塞子，用混合醚淋洗塞子和瓶口，让淋洗液流入瓶内。如果醚层和水层的分界面低于小球的上接口面，需沿瓶壁缓慢地加水，使界面上升。9）拿住抽脂瓶的小球，小心并尽可能完全地将醚层倾入已称好重的脂肪收集瓶中，要避免将水层的液体倾入收集瓶中。用混合醚淋洗抽脂瓶口的外部，让淋洗液流入收集瓶中。10） 在抽脂瓶中加入 5ml 乙醇混好。用 15 ml 乙醚，ml 石油醚进行第二次抽提，加入后分别振摇分钟和半分
24、钟。然后如 7、8、9 那样分层、倾倒。11） 重复 10 的操作，只是不再加入乙醇，进行第三次抽提。脂肪含量低于 0.5%的液体样品的第三次抽提可以免去。12） 用混合醚淋洗脂肪收集瓶的瓶口和内壁后，将收集瓶内的醚和乙醇尽可能地挥发掉。13） 把脂肪收集瓶置于 1022烘箱内烘 1 小时，冷却 1 小时后称量，然后再将脂肪收集瓶置于烘箱烘中烘半小时，再取出冷却半小时后称量，重复此操作，直至两次称量的差值小于 0.5mg。14） 为验证抽提出的物质是否完全溶解，在收集瓶中加入 25ml 石油醚，稍稍加热、旋动至脂肪完全溶解。如果抽提出的物质完全溶解于石醚中，则就第 13 步获得的质量与空瓶的质
25、量差作为抽提出的脂肪的质量。如果抽提出的物质不能完全溶于石油醚中，或怀疑不溶于石油醚中，需用石油醚将收集瓶中的脂肪完全抽提出来，共抽提三次，每次待石油醚分层后，倾出醚层，保留不溶物，用石油醚淋洗瓶口。最后一次，还要用混合醚淋洗瓶口外部。挥发瓶中残余的醚，再将收集瓶在 1022烘箱内烘 1 小时，冷却称重。E结果的表示：脂肪的含量以质量分数表示为：w = (m1 - m2) - (m3 - m4)m0式中：w：样品脂肪的质量分数，%m0：称取的样品量，gm1：脂肪收集瓶和抽提出的物质的量，gm2：空脂肪收集瓶的重量，或第 15 步测得的瓶加不溶物的重量，gm3：空白试验中收集瓶和抽提出的物质的量
26、，gm4：空白试验中收集瓶的重量，或第 15 步测得的瓶加不溶物的重量，g结果准至 0.01%。重复性：同一分析人员在短时间内对同一样品进行的两次测定结果差不得超过 0.02%。注意事项：1提纯用乙醚和石油醚是影响结果的关键因素，应对每一瓶试剂进行纯度检验，或干脆对所有乙醚和石油醚用封闭的旋转蒸发器进行提纯。2抽脂瓶用塞子一定要用软木塞。软木塞要软硬合适，大小合适。每次使用完后一定要浸泡在蒸馏水中，浸泡塞子用水要每天更换。3水浴保温时，每隔 35 分钟要摇混一次，以保证充分反应。4下列情况下无法得到真实的脂肪含量结果：1）液体已出现了脂肪分离；2）能闻到游离脂肪酸味；3）样品准备过程中或准备以
27、后，瓶壁上有白色颗粒或油滴浮在液体样品表面。四蛋白质的检测：(凯氏定氮法，此法为标准分析方法 )1.原理：牛乳中加入浓硫酸加热消化，硫酸分解为亚硫酸、水和氧，有机物质被氧氧化为二氧化碳和水，初生氧将氧化蛋白质，最后生成硫酸铵。 （具体如下：样品中含氮有机物经浓硫酸加热消化，硫酸使有机物脱水，然后，有机物炭化生碳；碳将硫酸还原为 SO2，本身则变成 CO2；SO 2使氮还原为 NH3，本身则氧化为 SO3，而消化过程中生成的氢，又加速了的 NH3形成。在反应过程中，生成物水和 SO3逸去，而NH3则与硫酸结合成硫酸铵，留在溶液中）硫酸铵在碱性条件下，释放出氨，用硼酸吸收。用标准酸液滴定，计算出总
28、氮量，进而计算出蛋白质。2仪器： a.通风橱b. 凯式定氮瓶c. 凯氏定氮蒸馏装置 3试剂： a.硫酸铜硫酸钾（1：15）：分析纯b.2%硼酸溶液c.0.1%甲基红乙醇溶液d.0.5%溴甲酚绿乙醇溶液e.40%氢氧化钠溶液f.0.05N 盐酸溶液4操作步骤：消化：精密吸取 10ml 液体样品称重，移入干燥的 500ml 定氮瓶中，加入 3.2g 硫酸铜硫酸钾（1：15）混合催化剂及 25ml 硫酸使样品全部浸泡在消化液中，防止样品粘附瓶颈上部。稍摇匀后，将瓶以 45 度角斜支在电炉上，微火加热，小心瓶内泡沫冲出影响结果。当样品炭化变黑产生泡沫时要减小火力，勿使黑色物质上升到凯氏定氮瓶颈部，当泡
29、沫完全停止，消化液均匀沸腾后，加大火力，直至瓶内容物的颜色逐渐成透明的淡绿色后继续消化 0.5-1hr，若凯氏烧瓶壁上粘有炭化粒时进行摇动，或待瓶内容物冷却数分钟后，用过氧化氢溶液冲下继续消化 0.5hr 直至完全透明为止，放冷，加蒸馏水约 10ml 放冷后，移 100ml 容量瓶中加水至刻度，混匀备用，同时作空白试验（除不加样品外其余消化步骤一致）蒸馏：检查定氮装置各连接部分不漏气，在水蒸汽发生瓶内装水约 2/3 加硫酸使水呈酸性目的使水中的 NH3不致蒸出，加数粒玻璃珠以防爆沸，加热煮沸定氮蒸汽蒸馏瓶的水。吸取 10ml 样液于定氮蒸气蒸馏瓶中，用洗瓶冲洗管壁将塞用水封好，在冷凝器的下端入
30、置一个盛有 10ml 硼酸、2 滴混合指示剂的250ml 锥形瓶。使冷凝器下端的玻璃管正好在液面下，一切准备好后将约 10ml140%氢氧化钠慢慢加入蒸馏瓶，一切准备好后，通入蒸气进行蒸馏，蒸馏至锥形瓶内液体内液体在约 100-125ml 时即用蒸馏水冲洗冷凝管下端，将洗液一并收集于锥形瓶内，蒸馏途中不得停火断气，否则发生倒吸。滴定：使用微量滴定管以 0.05N 的盐酸溶液滴定锥形瓶中的溶液，使之由蓝绿色滴定至紫色为止，同时做空白试验。5计算：X=（V-V 0）*M*0.014/（m*10/100）*F*100X-样品中蛋白质的含量V-滴定时样品消耗盐酸标准溶液的体积 mlV0-滴定时试剂空白
31、消耗盐酸标准溶液体积 mlM-盐酸标准溶液的当量浓度F-氮换算为蛋白质的系数 牛乳：6.38清洗：蒸馏前，要将蒸馏装置清先至少 3 次，实验完毕后也要清洗 3-4 次五.蔗糖含量的测定（参照 GB5413-85）1原理：根据糖的还原性的测定法，叫做还原糖法。此法可用来测定葡萄糖、果糖、麦芽糖和乳糖等还原糖。蔗糖是非还原糖，须经过盐酸水解后用还原糖法测定。常用的试剂是费林试液，用此试剂测定糖的方法称莱茵埃农氏法。此法为标准分析法。乳糖是还原糖，它与费林氏甲乙液混合溶液中的酒石酸钾钠铜反应，以次甲基蓝作指示剂，最终生成乳糖降解物（还原糖降解物）和红色的氧化亚铜沉淀。稍过量的还原糖将蓝色的次甲基蓝还
32、原为无色的隐色体。为了避免隐色体被空气中的氧所氧化，而又显示蓝色，必须使整个过程在沸腾着的溶液中进行，以便驱除液体中的空气。2仪器：1）250ml 三角瓶（蒸馏水洗净烘干）2）酸式滴定管（0-50ml、0.1ml 精确度）3）250ml、100ml 容量瓶4）5ml、50ml 移液管3试剂3） 20%的乙酸铅溶液，取 20g 乙酸铅溶解于 100ml 水中4） 草酸钾-磷酸氢二钠溶液，取草酸钾 3g，磷酸氢二钠 7g 溶解于 100ml 的水中5） 费林试液（甲液及乙液）：a）甲液，取 34.639g 硫酸铜溶于水中，加入 0.5ml 浓硫酸加水至 500ml；b）乙液，取 173g 洒石酸钾
33、钠及 50g 氢氧化钠溶解于水中，稀释到 500ml，静止两天后过滤6） 1%次甲基蓝溶液7） 1：1 盐酸8） 30%氢氧化钠溶液9） 0.2%甲基红-乙醇溶液：取 0.2g 甲基红溶于 100ml20%乙醇溶液中4费林试液的标定1）用乳糖标定称取预先在 95烘箱干燥 2hr 的纯乳糖约 0.75g（准确至 0.2mg）用水溶解稀释至 250ml，用10ml 费林试液甲液、乙液各 5ml）按 5.2)和 5.3)操作,最后用乳糖液滴定至终点按式 8 和 9 求出测乳糖时费林试液的校正值(fl)Al=V1*gl*1000/250=4*V1*gl8Fl=4*V1*gl/Al1.9式中:A1-实测
34、乳糖数 mgV1-滴定时消耗配制乳糖液量 mlgl-称取乳糖重 gAl1-由乳糖液滴定毫升数,查表 4 所得的乳糖数 mg2)用蔗糖标定称取 105烘箱中干燥 2hr 的蔗糖约 0.2g(准确到 0.2mg)用 50ml 溶解并洗入 100ml 容量瓶中,按10.4.2)操作,得出滴定 10ml 费林试液(甲、乙液各 5ml)所消耗的转化糖量，按式 10 和 11 求出测蔗糖时费林试液的校正值（f2）A2=V2*g2*100/（100*0.95）=10.5263*V2*G210F2=10.5263*V2*g2/Al2.11式中:A1-实测转化糖数 mgV2-滴定消耗转化糖量 mlG2-称取蔗糖
35、重 gAl2-蔗糖液滴定毫升数,查表 4 所得的转化糖数 mg5乳糖的测定方法1）样品处理取 20g 样品（准确至 0.01g）用 100ml 水分数次溶解并洗入 250ml 容量瓶中，加入 4ml 乙酸铅溶液，4ml 草酸钾-磷酸氢二钠溶液，每次加入试剂是都要途徐徐加入，并摇动容量瓶，用水稀释至刻度，摇匀，静置 30 分钟，用于干燥滤纸过滤弃去最初 25ml，所得样液作滴定用2）预备滴定在 50ml 滴定管中注入上述待测液至刻度，取费林试液 10ml（用甲、乙液各 5ml）于 250ml三角烧瓶中，置电炉上加热，使其在 2min 内沸腾，沸腾后关小火焰，保持沸腾状态 15S，加入次甲基蓝 3
36、 滴，徐徐滴入样液。样液至蓝色完全褪尽为止，读取所用样液的亳升数。3）精密滴定取 10ml 费林试液（甲、乙液各 5ml） ，一次加入比预备滴定量少 0.5-1.0ml 的样液,置于电炉上,使其在 2min 内沸腾,沸腾后关小火焰,维持沸腾状态 2min,加入 3 滴次甲基蓝液,一滴一滴地滴入样液,待蓝色褪尽即为终点,以滴定定量作为计算的依据(在同时测定蔗糖时,此即为转化前滴定量)计算: F1*fl*250*100乳糖（%）=V1*W 12式中:V1-滴定消耗样液是 mlW-样品重 mgF1-由消耗样液的毫升数查表 4 所得乳糖数 mgfl-费林试液乳糖校正值6蔗糖测定方法1)转化前转化糖量的
37、计算利用测乳糖时的滴定量,自表 4 中查出相对应的化糖量按式 13 计算F2*f2*250*100转化前转化糖量(%)= V1*W*1000 13式中:F2-由测定有乳糖时消耗样液的毫升数查表 4 所得转化糖的毫克数f2-费林试液蔗糖校正值V1,W 同式 122)样液的转化及滴定取 50ml 样液于 100ml 容量瓶中加 10ml 水,再加入 10ml1:1 的盐酸,置于 75水浴锅中,时时摇动,在2min30S 至 2min45S 之间使瓶内升温至 67后，直达到 67后继续在水浴中保持 5min，于该期间使温度升至 69.5，取出,用冷水冷却,瓶内温度冷却至 20时，加酚酞指示剂 2 滴
38、,用 30%氢氧化钠中和呈中性，用水稀释至刻度,摇匀并在此温度下保温半小时后再滴定。F3*f3*500*100转化后转化糖量(%)=V2+W 14式中:F3-由 V2 查得转化糖的数 mgV2-转化后消耗样液量 mlf3,W 同式 13蔗糖量计算:蔗糖(%)=(L1-L2)*0.9515式中:L1-转化后转化糖的含量(%)L2-转化前转化糖的含量(%)乳糖和转化糖因数表（费林氏液）滴定量 ml 乳糖 mg 转化糖 mg 滴定量 ml 乳糖 mg 转化糖 mg15 68.3 50.5 33 67.8 51.716 68.2 50.6 34 67.9 51.717 68.2 50.7 35 67.
39、9 51.818 68.1 50.8 36 67.9 51.819 68.1 50.8 37 67.9 51.920 68.0 50.9 38 67.9 51.921 68.0 51.0 39 67.9 52.022 68.0 51.0 40 67.9 52.023 67.9 51.1 41 68.0 52.124 67.9 51.2 42 68.0 52.125 67.9 51.2 43 68.0 52.226 67.9 51.3 44 68.0 52.227 67.8 51.4 45 68.1 52.328 68.8 51.4 46 68.1 52.329 67.8 51.5 47 68.
40、2 52.430 67.8 51.5 48 68.2 52.431 67.8 51.6 49 68.2 52.532 67.8 51.6 50 68.3 52.5溶液中乳糖,蔗糖共存时,测定乳糖时应在滴定量中加上的校正数见表 5表 5 (用 10ml 费林试液)蔗糖对乳糖比滴定终点时所用的糖液量 ml3:1 6:115 0.15 0.3020 0.25 0.5025 0.30 0.6030 0.35 0.7035 0.40 0.8040 0.45 0.9045 0.50 0.9550 0.55 1.05六酸度的检测：滴定酸度指乳由当时的 pH 值增至 pH 8.4 时所需加入的碱量多少。1牛乳
41、的滴定酸度有下列几种表示方法：1）吉尔涅尔度（ 。 T）：以酚酞为指示剂，中和 100ml 牛乳所消耗的 0.1N 氢氧化钠的溶液的毫升数，通常使用此法表示。2）乳酸度（%）：以酚酞为指示剂，中和 100ml 牛乳，用去 0.1N 氢氧化钠溶液 18ml，此牛乳的酸度为0.16%，即 1ml0.1NnaOH=0.009g 乳酸。乳酸的分子量为 90，0.1N 时，1000ml 牛乳中为 9g，即 1ml 牛乳中含有 0.009g，此数相当于 0.1NNaOH1ml。4）索氏列特格恩克尔度（ 。 SH）：以酚酞为指示剂，中和 100ml 牛乳所消耗的 0.25N 氢氧化钠的溶液的毫升数 。 SH
42、 与 。 T 相同，只是 NaOH 浓度不同， 。 SH 所用的 NaOH 溶液浓度为 0.025mol/l，即 。T 滴定法时每消耗 1ml0.25mol/l，为 1 度，新鲜牛乳的 。 SH 通常为 58。 SH。2换算关系： 。 T = 乳酸度% / 0.009 =。 SH*10 / 4乳酸% = 。 SH*0.02253吉尔涅尔度的测定方法：A 样品制备：在三角烧杯中移入 10ml 奶样，加入 21ml20的蒸馏水，混匀。B 滴定终点标准色的制备：硫酸钴溶液：称取 3g 硫酸钴，定溶至 100ml，最长使用 3 个月。测定酸度时取与滴定酸度相度的乳样加入相同的水，加入 2ml3%的硫酸
43、钴溶液混匀，制得终点色标准溶液。C 在样品中加入 0.5ml 酚酞指示剂，混匀。D 用氢氧化钠溶液滴定样品瓶，边滴定边摇混，直到出现与标准色相同的颜色。整个滴定过程要在 45S内完成。4影响滴定酸度测定结果的因素：A 指示剂浓度和用量：酚酞用量太大会影响测定结果。B 稀释时加水量：加水后影响结果的原因是当牛乳中加入水后，碱性的磷酸三钙的溶解度增加，因此乳的滴定酸度显得略为降低。因此部颁标准规定了要加 20ml 水就应该执行，以免发生误差。C 碱液浓度不同：要执行规定的标准，同时所配的氢氧化钠溶液不应含有碳酸钠，所用蒸馏水应先煮沸，冷却后立即使用。D 终点确定：酸滴定时，正确的终点应该是 PH8
44、.4，必须使用标准色。E 测定时的温度：温度对乳的 pH 是有影响的，因为在不同温度时，乳中微酸性的物质，其离解程度不同，因此也影响乳的滴定酸度。冷的乳，滴定酸度较低，因此温度不宜过高或过低，应在 202时为宜。F 滴定速度：根据经验，滴定很慢时，往往消耗较多碱液。全部滴定时间最好在 45 秒内完成。G 滴定管的读数：所用碱液越少，滴定管的读数影响越大。H 避免二氧化碳的影响：若加入乳中的蒸馏水含有二氧化碳，使滴定酸度增高，所以要避免二氧化碳的影响。七酒精试验的检测：1原理：蛋白质沉淀是有条件的，一是除去蛋白质胶粒所带的电荷，二是破坏胶粒表面的水化作用，前者使胶粒在水中沉淀出。在一般情况下，蛋
45、白质带有相同的电荷。当乳酸化 pH 值达 4.6（即等电点）时，蛋白质胶粒形成数量相等的正负电荷再没有相斥力量，于是胶粒极易聚合成大胶粒从胶液中分离出。当加入强烈的亲水性物质，可以破坏蛋白质胶粒的水化作用，从而满足胶体沉絮的一个条件。酒精、丙酮等都是强烈的亲水性物质，它比蛋白质胶体的水合能力更强，加入后能夺去原来胶粒的水化水分子，使胶粒脱水，从胶粒溶液中沉降出来。2牛乳中蛋白质的等电点：酪蛋白等电点：PH4.64.7；乳白蛋白等电点：PH4.72；乳球蛋白等电点：PH5.19。3检测方法：取等量的牛乳与酒精混合，如出现絮片判定呈阳性。4注意事项：A 酒精至少为医用酒精，不得使用工业酒精及饮用酒
46、。工业酒精与饮用酒含有使蛋白质凝固的杂质，在很低浓度时能使牛乳凝固，造成错误的结论。B 配制酒精时不可使用酸性或碱性的水。C 牛乳与酒精应等量混合。5牛乳具有很强的缓冲作用，因此 pH 值与酸度并非呈直线关系，滴定酸度与 pH 值之间的关系见下表：滴定酸度 滴定酸度乳酸度 % 。 T PH 值 乳酸度 % 。 T PH 值0.50 55.6 6.0 0.145 16.1 6.70.43 47.8 6.1 0.125 14.0 6.80.36 40.0 6.2 0.115 12.8 6.90.30 33.3 6.3 0.105 11.7 7.00.25 27.8 6.4 0.095 10.6 7
47、.10.205 22.3 6.5 0.090 10.0 7.20.165 18.3 6.6 0.085 9.4 7.3八杂质度的检测：1定义：根据 GB/T5413.301997 标准中规定测得的 500ml 液体乳样或 62.5g 乳粉样品中，不溶于约60热水残留于过滤板上的可见带色杂质的数量。2测定方法：取液体乳样 500ml，加热至 60。于过滤装置上的棉质过滤板上过滤，用水冲洗附于过滤板上的牛乳。将过滤板置于烘箱中烘干后，在非直接但均匀的光亮处与杂质度标准板比较，即可得出过滤板上的杂质量。当过滤板上杂质的含量介于两个级别之间时，判定为杂质含量较多的级别。3注意事项：本法所测的同一样品所
48、作的两次重复测定，其结果应一致，否则应重复再测定两次。九干物质的检测：1.干燥器中的干燥剂：无水硫酸钙、无水过氯酸镁、无水过氯酸钙、刚灼烧过的氧化钙、无水五氧化二磷、无水浓硫酸以及变色硅，都是较有效的干燥剂。常见的浓硫酸、颗粒状氯化钙等干燥剂，干燥效能较差。通常采用变色硅胶做为干燥器中的干燥剂。变色硅胶无水时为蓝色，吸水后为白色泛微粉色。2干物质（水分）的检测：A仪器设备：分析天平、干燥器、烘箱（工作空间的温度恒温控制在 1022） 、沸水浴、平底皿盒（高 2025mm 的带盖不锈钢、铝皿盒或玻璃称量皿） 、短玻璃棒（长于皿盒的直径，可斜放在皿盒内，不影响盖盖） 、石英砂或海砂。B石英砂或海砂必须通过以下适用性的测试：1）将约 20g 的海砂同短玻璃一起放于一皿盒中，然后敞盖在 1022的烘箱中至少烘 2 小时。把皿盒盖盖好后放入干燥器中冷却至室温后称量，准至 0.1mg。2）用 5ml 水将海砂润湿，用短玻棒混合海砂和水，将它们再次放入烘箱中烘 4 小时。把皿盒盖盖后放入干燥器中冷却至室温后称量，准至 0.1mg。两次称量的差不应超过 0.5
