1、 非特异性酯酶染色检查的标准操作程序(SOP)实验室名称 项 目 编 号 制定日期细胞室 非特异性酯酶染色检查 * *年*月*日【目的】指导非特异性酯酶染色检查。【该 SOP 变动程序】本标准操作程序的改动可由任一使用本 SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、质控主管、科主任。【染色原理】作用于短链脂肪酸的酶，称为“非特异性酯酶” 。此酶将乙酸 萘酚水解，产生萘酚，萘酚再与重氮盐偶联，形成不溶性的有色沉淀物，定位于酶活性存在处。【用途】急性白血病的鉴别，急性单核白血病阳性，亦称“单核细胞酯酶” 。【试剂配置】1）固定液，10甲醛生理盐水。2） 0.05mol/L 磷酸缓冲液
2、0.067mol/L 磷酸氢二钠 44ml0.067mol/L 磷酸二氢钾 12ml3）作用液0.05mol/L 磷酸缓冲液 40ml1%乙酸 萘酯（以丙酮做溶剂）0.4ml 振荡。溶解后加蒸馏水 0.4ml坚牢蓝 B，40mgrj 溶解，过滤4）1% 甲绿水溶液。【染色步骤】1固定：新鲜血或骨髓涂片，置 10%甲醛生理盐水中 10 分钟。2水洗：自来水冲洗 5 分钟。3孵育：放入作用液 1 小时。4水洗：自来水冲洗 5 分钟。5复染：1%甲绿染 5 分钟。6水洗：晾干，镜检。【对照标本】染色步骤同上，作用液中减去乙酸 萘酚。【结果判断】阳性反应为棕黑色片块状沉淀，定位于胞浆中。计数方法如下：0 胞浆呈原色。+ 胞浆呈棕灰色，无颗粒。+ 胞浆呈棕黑色，云絮状。+ 胞浆呈黑棕色，云絮状。+ 胞浆呈深黑色，云絮状。【临床意义】在中性 PH 值，用乙酸 萘酚做底物时，单核细胞呈阳性反应，其强度随细胞发育成熟而逐渐增加。巨噬细胞、巨核细胞、血小板与淋巴细胞也偶见，其他血细胞则呈阴性或弱阳性反应。【注意事项】1.涂片宜新鲜，不超过两天为宜。2.重氮盐的选择，以坚牢蓝 B，坚牢蓝 RR 和坚牢蓝黑 B 重氮盐为好，使酶反应产物呈颗粒状，定位清楚。操作人员 部门主管 质量负责人姓名 王烈 日期 04 年 07 月 15 日
