1、分子发光分析法定义：某些物质的分子吸收一定能量后，电子从基态跃迁到激发态，以光辐射的形式从激发态回到基态，这种现象称为分子发光，在此基础上建立起来的分析方法为分子发光分析法,分子在退激过程中以光辐射形式释放能量,根据分子受激时所吸收能源及辐射光的机理不同分为以下几类： 光致发光：以光源来激发而发光 电致发光：以电能来激发而发光原子发射光谱法 生物发光：以生物体释放的能量激发而发光 化学发光：以化学反应能激发而发光化学发光分析法,荧光荧光分析法 磷光磷光分析法,第一节 荧光分析法 第二节 磷光分析法第三节 化学发光分析法,第一节 荧光分析法,分子发射光谱与分子能级结构,振动弛豫,内部转换,荧光量
2、子产率（荧光效率）,发荧光的两个必要条件分子能吸收光子而跃迁至激发态激发态分子能以光的形式释放能量,荧光效率（f）=,发出光子数 吸收光子数,如果一个分子将吸收的光子全部释放，则其量子产率为100%。,单色器,液槽,检测器,记录器,单色器,I0,If,光源,荧光分析的仪器,荧光分析的特点,1、灵敏度高：荧光强度随激发光强度增强而增强（提高激发光强度，可提高荧光强度2、选择性好：1）、 不同的物质用不同的光进行激发，选择不同的激发光波长。2） 、不同的物质发射的荧光不同，选择不同的检测荧光波长3）、比较容易排除其它物质的干扰，选择性好3、仪器简单 4、应用范围广：具发光强度可定量测定许多痕量的无
3、机物和有机物，广泛应用在生物化学、分子生物学、免疫学及农牧产品分析、卫生检疫等领域。,第二节 磷光分析法,低温磷光分析固体基质室温磷光分析保护流体室温磷光分析无保护流体室温磷光分析,磷光分析法分类,磷光分析的缺点仪器复杂，需要固体基质或保护,磷光分析的仪器,光源,检测器,贝克勒耳圆盘,磷光分析法应用,1、能产生磷光的物质数量很少，磷光分析不及荧光分析普遍，但磷光分析法已在药物分析、临床及环境分析领域得到一定的应用。 2、低温磷光分析已应用在萘、蒽、菲、芘、苯并芘等多环芳烃及含O、S、N的杂环化合物分析 3、固体表面室温磷光分析法已成为多环芳烃和杂环化合物的快速、灵敏的分析手段。,定义：化学反应
4、中，产物分子吸收了反应过程中释放的化学能而被激发，在返回基态时发出光辐射称为化学发光，根据化学发光强度或化学反应产生的总发光强度来确定物质含量的方法称为化学发光分析法。,第三节 化学发光分析法,化学发光分析的主要类型,(一)液相化学发光 1.鲁米诺(Luminol) 体系 2.光泽精（lucigenin）体系 3.过氧草酰（peroxyoxalate）体系 (二)气相化学发光,1、灵敏度高例：荧光素酶和磷酸三腺甙(ATP)的化学发光分析，可测定2 10-17 Mol/L的ATP，即可检测出一个细菌中的ATP含量 2、线性范围宽一般有56个数量级 3、仪器设备简单，成本低廉 4、分析速度快，易实现自动化 5、局限性：可供发光用的试剂有限发光机理有待进一步研究,化学发光分析的特点,化学发光效率 发光分子数 化学发光总量子产率CL = - = CE EM参加反应分子数化学激发效率 激发态分子发光效率,记录器,化学发光分析的仪器,
