1、饲料中粗纤维含量的测定 过滤法Feeding stuffs-Determination of fiber content-Method with intermediate filtration1 范围本标准规定了粗纤维含量测定的过滤法，描述了手工操作和半自动操作的测定步骤。 。本方法适用于粗纤维含量大于 10g/kg的饲料。注：对粗纤维含量等于或小于 10g/kg的饲料，可用 ISO65417 描述的方法测定。本标准还适用于谷物和豆类植物。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然
2、而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法（neq ISO3696:1987）GB/T 20195 动物饲料 试样的制备（ISO6498:1998，IDT）GB/T 14699.1 饲料 采样（ISO 6497:2002，IDT）3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1粗纤维含量 crude fiber content在样品按本标准规定的分析步骤用酸和碱消煮后所获得的干燥残渣灰化所丢失的质量除以试样的质量。注：粗纤维含量以克每千克表示，也可用质量分数（%）表示。4
3、原理用固定量的酸和碱，在特定条件下消煮样品，再用醚、丙酮除去醚溶物，经高温灼烧和扣除矿物质的量，所余量称为粗纤维。 （试样用沸腾的稀释硫酸处理，过滤分离残渣，洗涤，然后用沸腾的氢氧化钾溶液处理，过滤分离残渣，洗涤，干燥，称量，然后灰化。因灰化而失去的质量相当于试料中粗纤维质量。 ）它不是一个确切的化学实体，只是在公认强制规定的条件下，测出的概略养分。其中以纤维为主，还有少量半纤维和木质素。5 试剂和材料除非另有规定，只用分析纯试剂。5.1 水至少应为 GB/T6682规定的三级水。5.2 盐酸溶液：c（HCl）=0.5mol/L。5.3 硫酸溶液：c（H 2SO4）=(0.130.005)mo
4、l/L。5.4 氢氧化钾溶液：c（KOH）=(0.230.005)mol/L。5.5 丙酮。5.6 滤器辅料：海沙，或硅藻土，或质量相当的其他材料。使用前，海沙用沸腾盐酸c（HCl）=4mol/L处理，用水洗至中性，在 50025下至少加热1h。5.7 防泡剂：如正辛醇。5.8 石油醚：沸点范围 4060。6 仪器设备实验室常用设备，特别是下列各件。6.1 粉碎设备：能将样品粉碎，使其能完全通过筛孔 1mm的筛。6.2 分析天平：感量 0.1mg。6.3 滤埚：石英的、陶瓷的或硬质玻璃的，带有烧结的滤板，滤板孔径40m100m（按 ISO7493:19831 孔隙度 P100） 。在初次使用前
5、，将新滤埚小心地逐步加温，温度不超过 525，并在 50025下保持数分钟。也可使用具有同样性能的不锈钢坩埚，其不锈钢筛板的孔径为 90m。6.4 陶瓷筛板。6.5 灰化皿。6.6 烧杯或锥形瓶：容量 500mL，带有一个适当的冷却装置，如冷凝器或一个盘。6.7 干燥箱：用电加热，能通风，能保持温度 1302。6.8 干燥器：盛有蓝色硅胶干燥剂，内有厚度为 2mm3mm 的多孔板，最好由铝或不锈钢制成。6.9 马福炉：用电加热，可以通风，温度可调控，在 475525条件下，保持滤埚周围温度准至25。马福炉的高温表读数不总是可信的，可能发生误差，因此对高温炉中的温度要定期检查。因高温炉的大小及类
6、型不同，炉内不同位置的温度可能不同。当炉门关闭时，必须有充足的空气供应。空气体积流速不宜过大，以免带走滤埚中物质。6.10 冷提取装置,附有： 一个滤埚（6.3）支架； 一个装有真空和液体排出孔旋塞的排放管；连接滤埚（6.3）的连接环。6.11 加热装置（手工操作方法）：带有一个适当的冷却装置，在沸腾时能保持体积恒定。6.12 加热装置（半自动操作方法）：用于酸和碱消煮，附有： 一个滤埚（6.3）支架； 一个装有真空和液体排出孔旋塞的排放管； 一个容积至少 270mL的量筒，供消煮用，带有回流冷凝器；将加热装置与滤埚（6.3）及消煮圆筒连接的连接环；可选择性地提供压缩空气；使用前，设备用沸水预
7、热 5min。7 采样采样按 GB/T14699.1（ISO6497:2002，IDT） 6 进行。重要的是实验室收到一份真正有代表性的样品并在运输和保存过程中不受到破坏或不发生变化。8 试样制备试样按 GB/T20195 制备。用粉碎装置（6.1）将实验室风干样粉碎，使其能通过筛孔为 1mm的筛，充分混合。如手工操作方法，按第 9章处理。如用半自动操作方法，则按第 10章处理。9 手工操作法分析步骤9.1 试料称取约 1g制备的试样（第 8章） ，准确至 0.1mg（m 1） 。如果试样脂肪含量超过 100g/kg，或试样中脂肪不能用石油醚（5.8）直接提取，则将试样装移至一滤埚（6.3）
8、，并按 9.2处理。如果试样脂肪含量不超过 100g/kg，则将试样装移至一烧杯（6.6） 。如果其碳酸盐（碳酸钙形式）超过 50g/kg，按 9.3处理；如果碳酸盐不超过 50g/kg，则按 9.4处理。9.2 预先脱脂在冷提取装置（6.10）中，在真空条件下，试样用石油醚（5.8）脱脂 3次，每次用石油醚 30mL，每次洗涤后抽吸干燥残渣，将残渣装移至一烧杯（6.6） 。9.3 除去碳酸盐将 100mL盐酸（5.2）倾注在试样上，连续振摇 5min，小心将此混合物倾注以滤埚，滤埚底部覆盖一薄层滤器辅料（5.6） 。用水洗涤两次，每次用水 100mL，细心操作最终使尽可能少的物质留在滤器上。
9、将滤埚内容物转移至原来的烧杯中并按 9.4处理。9.4 酸消煮将 150mL硫酸（5.3）倾注在试样上。尽快使其沸腾，并保持沸腾状态30min1min。在沸腾开始时，转动烧杯一段时间。如果产生泡沫，则加数滴防泡剂（5.7） 。在沸腾期间使用一个适当的冷却装置保持体积恒定（见 6.6和 6.11） 。9.5 第一次过滤在滤埚中（6.3）铺一层滤器辅料（5.6） ，其厚度约为滤埚高度的五分之一，滤器辅料上可盖一筛板（6.4）以防溅起。当消煮结束时，将液体通过一个搅拌棒滤至坩埚中，用弱真空抽滤，使 150mL几乎全部通过。如果滤器堵塞，则用一个搅拌棒小心地移去覆盖在滤器辅料上的粗纤维。残渣用热水洗洗
10、 5次，每次约 10mL水，要注意使滤埚的过滤板始终有滤器辅料覆盖，使粗纤维不接触滤板。停止抽真空，加一定体积的丙酮（5.5） ，刚好能覆盖残渣，静置数分钟后，慢慢抽滤排出丙酮，继续抽真空，使空气通过残渣，使之干燥。9.6 脱脂在冷提取装置（6.10）中，在真空条件下，试样用石油醚（5.8）脱脂 3次，每次用石油醚 30mL，每次洗涤后抽吸干燥。9.7 碱消煮将残渣定量转移至酸消煮用的同一烧杯中。加 150mL氢氧化钾溶液（5.4） ，尽快使其沸腾，保持沸腾状态 30min1min，在沸腾期间用同一适当的冷却装置（6.6 和 6.11）使溶液体积保持恒定。9.8 第二次过滤将杯内容物通过滤埚（
11、6.3）过滤，滤埚内铺有一层滤器辅料（5.6） ，其厚度约为滤埚高度的五分之一，上盖一筛板（6.4）以防溅起。残渣用热水洗至中性。残渣在真空条件下用丙酮（5.5）洗涤 3次，每次用丙酮 30mL，每次洗涤后抽吸干燥残渣。9.9 干燥将滤埚置于灰化皿（6.5）中，灰化皿及内容物在 130干燥箱中（6.7）中至少干燥 2h。在灰化或冷却或冷却过程中，滤埚的烧结滤板可能有些部分变得松散，从而可能导致分析结果错误，因此将滤埚置于灰化皿中。滤埚和灰化皿在干燥器（6.8）中冷却，从干燥器中取出后，立即对滤埚和灰化皿进行称量（m 2） ，准确至 0.1mg。9.10 灰化将滤埚和灰化皿置于马福炉（6.9）中
12、，其内容物在 50025下灰化，直至冷却后连续两次称量的差值不超过 2mg。每次灰化后，让滤埚和灰化皿初步冷却，在尚温热时置于干燥器中，使其完全冷却，然后称量（m 3） ，准确至 0.1mg。9.11 空白测定用大约相同数量的滤器辅料（5.6） ，按 9.4至 9.10进行空白测定，但不加试样。灰化（9.10）引起的质量损失不应超过 2mg。按第 11章处理。10 半自动操作方法的分析步骤10.1试料称取约 1g制备的试样（第 8章） ，准确至 0.1mg，转移至一带有约 2g滤器辅料（5.6）的滤埚（6.3）中。如果试样脂肪含量超过 100g/kg，或样品所含脂肪不能用石油醚（5.8）直接提
13、取，则按 10.2进行。如果试样脂肪含量不超过 100g/kg，其碳酸盐（碳酸钙形式）超过 50g/kg，按10.3进行，如果碳酸盐不超过 50g/kg，则按 10.4进行。10.2 预先脱脂将滤埚与冷提取装置（6.10）连接，试样在真空条件用石油醚（5.8）脱脂 3次，每次用石油醚 30mL，每次洗涤后抽吸干燥残渣。10.3 除去碳酸盐将滤埚与加热装置（6.12）连接，试样用盐酸（5.2）洗涤 3次，每次用盐酸30mL，在每次加盐酸后在过滤之前停留约 1min。约用 30mL水洗涤一次，按 10.4进行。10.4 酸消煮将消煮圆筒与滤埚连接，将 150mL沸硫酸（5.3）转移至带有滤埚的圆筒
14、中，如果出现气泡，则加数滴防泡剂（5.7） ，使硫酸尽快沸腾，并保持剧烈沸腾30min1min。10.5 第一次过滤停止加热，打开排放管旋塞，在真空条件下通过滤埚将硫酸滤出，残渣用热水至少洗涤 3次，每次用水 30mL，洗涤至中性，每次洗涤后抽吸干燥残渣。如果过滤发生问题，建议小心吹起排出滤器堵塞。如果样品所含脂肪不能直接用石油醚（5.8）提取，按 10.6进行；否则，按 10.7进行。10.6 脱脂将滤埚与冷提取装置（6.10）连接，残渣在真空条件下用丙酮洗涤 3次，每次用丙酮（5.5）30mL，然后，残渣在真空条件下用石油醚（5.8）洗涤 3次，每次用石油醚 30mL。每次洗涤后抽吸干燥残
15、渣。10.7 碱消煮关闭排出孔旋塞，将 150mL沸腾的氢氧化钾溶液转移至带有滤埚的圆筒，加数滴防泡剂（5.7）使溶液尽快沸腾，并保持沸腾状态 30min1min。10.8 第二次过滤停止加热，打开排放管旋塞，在真空条件下通过滤埚将氢氧化钾溶液滤去，用热水至少洗涤 3次，每次用水约 30mL，洗至中性，每次洗涤后抽吸干燥残渣。如果过滤发生问题，建议小心吹气排出滤器堵塞。将滤埚与冷提取装置（6.10）连接，残渣在真空条件下用丙酮洗涤 3次，每次用丙酮（5.5）30mL，每次洗涤后抽吸干燥残渣。10.9 干燥将滤埚置于灰化皿（6.5）中，灰化皿及内容物在 130干燥箱中（6.7）中至少干燥 2h。
16、在灰化或冷却过程中，滤埚的烧结滤板可能有些部分变得松散，从而可能导致分析结果错误，因此将滤埚置于灰化皿中。滤埚和灰化皿在干燥器（6.8）中冷却，从干燥器中取出后，立即对滤埚和灰化皿进行称量（m 2） ，准确至 0.1mg。10.10 灰化将滤埚和灰化皿置于马福炉中，其内容物在 50025下灰化，直至冷却后连续两次称量的差值不超过 2mg。每次灰化后，让滤埚和灰化皿初步冷却，在尚温热时置于干燥器中，使其完全冷却，然后称量（m 3） ，准确至 0.1mg。10.11 空白测定用大约相同数量的滤器辅料（5.6） ，按 10.4至 10.10进行空白测定，但不加试样。灰化（10.10）引起的质量损失不
17、应超过 2mg。11 计算试样中粗纤维的含量（X）以克每千克（g/kg）表示，按式（1）计算：式中：m1试料（9.1 或 10.1）的质量，单位为克（g） ；m2灰化盘、滤埚以及在 130干燥后获得的残渣（9.9 或 10.9）的质量，单位为毫克（mg） ； m3灰化盘、滤埚以及在 50025获得的残渣（9.10 或 10.10）的质量，单位为毫克（mg） 。结果四舍五入，准确至 1g/kg。注：结果亦可用质量分数（%）表示。12 精密度12.1 实验室间试验附录 A详细列出了本方法精密度的实验室间的试验结果，从该试验得出的数值可能不适用于附录中列出以外的浓度范围及基质的样本。12.2 重复性
18、用同一方法，对相同的试验材料，在同一实验室内，由同一操作人员使用同一设备，在短时间内获得的两个独立试验结果之间的绝对差值超过表 1中列出的或由表 1得出的重复性限 r的情况不大于 5%。表 1 重复性限（r）和再现性限（R）样品 粗纤维含量/(g/kg) 重复性限（r）/(g/kg)再现性限（R）/（g/kg）向日葵粕粉 223.3 8.4 16.1棕榈仁饼粉 190.3 19.4 42.5牛颗粒饲料 115.8 5.3 13.8玉米谷蛋白饲料 73.3 5.8 9.1木薯 60.2 5.6 8.8狗粮 30.0 3.2 8.9猫粮 22.8 2.7 6.412.2 再现性使用同一方法，对相同的试验材料，在不同实验室内，由不同操作人员使用不同设备获得的两个独立试验结果之间的绝对差值超过表 1中列出的或由表 1得出的再性限 R的情况不大于 5%。)1(132 mX参考文献GB/T 64342006 饲料中粗纤维测定方
