1、硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证方案文件编码：项 目 姓 名 签 名 日 期起 草审 核审 核批 准生效日期年 份硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证方案目录1、 硫 乙 醇 酸 盐 流 体 培 养 基 配 制 和 灭 菌 方 法 验 证 计 划2、 硫 乙 醇 酸 盐 流 体 培 养 基 配 制 和 灭 菌 方 法 验 证 小 组 名 单3、 硫 乙 醇 酸 盐 流 体 培 养 基 配 制 和 灭 菌 方 法 验 证 方 案4、 硫 乙 醇 酸 盐 流 体 培 养 基 配 制 和 灭 菌 方 法 验 证 培 训 记 录5、 硫 乙 醇 酸 盐 流 体 培 养 基 配 制 和 灭 菌
2、方 法 验 证 附 属 记 录6、 硫 乙 醇 酸 盐 流 体 培 养 基 配 制 和 灭 菌 方 法 验 证 报 告7、 硫 乙 醇 酸 盐 流 体 培 养 基 配 制 和 灭 菌 方 法 验 证 合 格 证 书硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证计划根据我公司认证领导小组的要求及验证委员会的安排，对硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法进行验证，具体安排如下：一、年月日年月日，制定验证方案，由硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证小组组长负责起草。二、年月日年月日，验证方案讨论、修改、审批和培训。三、年月日年月日，验证工作实施。 四、年月日年月日，根据验证情况与记录，书写验证报告。五、年月日
3、年月日，验证报告审核批准，合格证发放。硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证小组名单组 长 ： 成 员 ： 硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证方案 页码： 0 / 51、 目的通过验证验证所采用的硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法，适合于我公司硫乙醇酸盐流体培养基的制备，为质量控制试验提供优质培养基。并培养基配制和灭菌的操作方法，为培养基配制和灭菌人员提供正确的操作方法，使培养基配制和灭菌标准化、程序化。2、 适用范围本方案适用于本公司硫乙醇酸盐流体培养基的配制和灭菌方法的验证。3、 内容1. 概述 培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制
4、试验是提供优质培养基的保证。使用商品化脱水合成培养基制备培养基时，应严格按照培养基厂商提供的使用说明配制，如质量/体积、PH 、制备条件、灭菌条件和操作步骤等。培养基若采用不适当的加热和灭菌条件，有可能引起颜色变化、透明度降低、PH 的改变。因此，培养基应采用验证的灭菌程序灭菌，培养基灭菌方法和条件，应通过适用性检查试验进行验证。此外，对高压灭菌器的蒸汽循环系统也要加以验证，以保证在一定的装载方式下的正常热分布。温度缓慢上升的高压灭菌器可能导致培养基的过热，过度灭菌可能会破坏绝大多数的细菌和真菌培养基促生长的质量。灭菌器中的培养基的容积和装载方式也将影响加热的速度。因此，应根据灭菌培养基的特性
5、，进行全面的灭菌程序验证。根据培养基的特性，按制定的方法进行配制和灭菌，根据验证结果判断是否符合验证标准。若符合，按验证的方法和条件进行培养基的配制和灭菌，若不符合，重新制定方案，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。2. 验证项目及认可标准验证内容 验证项目 验证标准配制 灭菌前的 pH 7.2-7.4灭菌温度 121灭菌时间 15 分钟灭菌效果（ F0 值） 12灭菌后 pH 值 6.9-7.3灭菌灭菌后外观性状 符合规定硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证方案 页码： 1 / 5灵敏度检查 符合规定适用性检查无菌性检查 符合规定外观性状 符合规定灵敏度检查 符合规定有效期验证保存
6、三周无菌性检查 符合规定连续验证 3 次配制的硫乙醇酸盐流体培养基。3. 验证依据3.1. SN/T1538.1-2005 培养基制定指南3.2. 药品生产验证指南（2003 版）（国家食品药品监督管理局）3.3. 药品生产质量管理指南（2010 版）3.4. 中华人民共和国药典（2010 年版二部）3.5. 中国药品检验标准操作规程（2010 年版）4. 验证方法与内容4.1. 实验准备4.1.1. 器具：电磁炉（最大功率 2000W）、大烧杯（2000ml）、不锈钢锅、玻璃棒、25250ml 试管、硅胶塞、细绳、牛皮纸、分析天平、药匙、量筒（100ml、1000ml）等。4.1.2. 设备
7、4.1.3. 培养基及试剂名称 生产厂家 批号纯化水名称 生产厂家 型号 校验情况生化培养箱电热恒温培养箱自动台式灭菌器电子天平数字酸度计生物安全柜超净工作台硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证方案 页码： 2 / 5硫乙醇酸盐流体培养基营养肉汤培养基营养琼脂培养基氢氧化钠稀盐酸嗜热脂肪芽胞菌（F012）4.1.4. 验证用菌株 来源于贵州省药品检验所4.2. 验证内容4.2.1. 执行标准a. 配制容器及配套器具的清洗严格按照玻璃器皿清洗操作规程执行。b. 培养基的配制严格按照培养基管理规程执行。c. 自动台式灭菌器严格按照TMQ.R-3870 型台式灭菌器使用维护保养操作规程 执行.d.
8、 取同一批硫乙醇酸盐流体干粉培养基配制三批进行以下验证。4.2.2. 配制灭菌过程a. 称量 取硫乙醇酸盐流体干粉培养基 29.25 克 ,加纯化水 1000ml,加热煮沸使其完全溶解。每次按照此处方量配制 8547ml。b. 灭菌前的 pH 值测定 取已配制好的硫乙醇酸盐流体培养基 100ml，放冷至25调节 PH 值至 7.2-7.4 范围内。以此比例来调节剩下的培养基的 pH 值。c. 分装 将已调节好 PH 值的硫乙醇酸盐流体培养基分装至 25250ml 试管中，分装的管数为 190200 管范围，用牛皮纸按 40 管/捆的方式包扎结实。其中一管只装约20ml，以备灭菌后最终 pH 值
9、测定。验证菌株 菌株代数 培养基 培养温度培养时间（小时）大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉菌硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证方案 页码： 3 / 5d. 灭菌器中的培养基的数量及装载方式（满载） 将分装好的 5 捆（40 管/捆）培养基试管置于灭菌器中，按下图A、B、 C、D、E 5 点放置。A B C 灭菌器柜门 D E 指示菌的放置：将指示剂嗜热脂肪芽孢菌（菌浓度： 1.69106cfu/支）5 支各放入5 捆培养基中间的其中一支试管，同时将已编号的 5 支校正好的留点温度计插入 6 支待灭菌培养基试管内，开始灭菌。 将已装载好的硫乙醇酸盐流体培养基在 121条件
10、下灭菌 15 分钟。灭菌结束后记录各留点温度计点温度。同时取出 5 支已灭菌嗜热脂肪芽孢菌，直接置 5660培养2448 小时，另取一支未经灭菌的嗜热脂肪芽孢菌指示剂一起培养，作为阳性对照。 根据颜色判断灭菌效果，培养后全部保持紫色灭菌合格。若由紫色变为黄色为不合格。对照管应由紫色变为黄色为该指示剂有效。e. 灭菌后的 pH 值的测定 取 20ml 管已灭菌的硫乙醇酸盐流体培养基，放冷至25测定 pH 值，应在 6.9-7.3 范围内。f. 外观性状 灭菌后培养基应对其外观性状仔细检查，如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。 贮存中培养基发生颜色变化、浑浊；固体培养
11、基表面产生裂缝或涟漪等异常现象，不符合使用规定时，应停止使用，重新进行配制和灭菌程序验证。4.2.3. 硫乙醇酸盐流体培养基的适用性检查无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证方案 页码： 4 / 5a. 无菌性检查 每批培养基随机取 5 支（瓶），培养 14 天，应无菌生长。b. 灵敏度检查 菌液制备 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上，接种生孢梭菌的的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，3035 培
12、养 1824 小时；上述培养物用 0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含菌数小于 100cfu（菌落形成单位） 的菌悬液。菌液制备后若在室温下放置，应在 2 小时内使用，若保存在 28，可在 24 小时内使用。 培养基接种 取每管装量为 12ml 的硫乙醇酸盐流体培养基 9 支，分别接种小于100cfu 的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各 2 支，另 1 支不接种作为空白对照，培养三天，逐日观察结果。 结果判断 空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。5. 组织实施5.1. 验证机构的组成5.2. 公司验证委员会，负责所有验证工作
13、的领导和组织、审批验证方案和验证报告、发放验证证书。5.3. 硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证工作小组，负责该验证项目的验证方案起草、实施、组织与协调实施，负责验证样品检测，完成各项记录，根据检验和验证结果进行评定、完成验证报告。部门 部门职责 责任人 工作划分质量部 方案起草、实施、书写报告 操作实施质量部 取样、检验、出报告 操作实施方案审核验证委员会方案审定、批准、实施、发放验证合格证方案批准4、 附件及相关表格文件硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证报告文件编码：项 目 姓 名 签 名 日 期起 草审 核审 核批 准生效日期年 份硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证报告 页码
14、：0/61、 验证概述 培养基是微生物试验的基础，直接影响微生物试验结果。适宜的培养基制备方法、贮藏条件和质量控制试验是提供优质培养基的保证。中华人民共和国药典2010 年版二部规定：在实验室中，若采用已验证的配置和灭菌程序制备培养基且过程受控，那么同一批脱水培养基的适用性检查试验可只进行一次。本公司采用的培养基均是北京三药科技开发公司生产的市售脱水培养基。为规范生测实验人员在配制培养基时标准化、程序化并符合中华人民共和国药典2010 年版二部规定，特对培养基的配制程序进行验证。1. 验证组织与实施1.1. 验证小组成员及职责分工部 门 部 门 职 责 责 任 人 工 作 划 分质 量 部 方
15、 案 起 草 、 实 施 、 书 写 报 告 操 作 实 施质 量 部 取 样 、 检 验 、 出 报 告 操 作 实 施方 案 审 核验 证委 员 会方案审定、批准、实施、发放验证合格证 方 案 批 准1.2. 本验证由质量部负责并由相关人员根据硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证方案所规定的方法与步骤实施。2. 实施时间为：年月日年月日。2、 各项目验证结论1. 灭菌前后 pH 值 日期： 年 月 日配制批号 灭菌前 pH 值 灭菌后 pH 值 结果判定2. 外观性状日期 年 月 日 年 月 日配制批号 灭菌后 保存三周后结果判定硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证报告 页码：1/63
16、. 留点温度计温度记录 日期： 年 月 日配制批号 灭菌后温度 结果判定A B C D EA B C D EA B C D E4. 指示剂培养结果 日期： 年 月 日配制批号 灭菌后指示剂颜色 结果判定A B C D EA B C D EA B C D E阳性对照5. 灭菌后培养基无菌性检查 5.1. 配制批号： 日期： 年 月 日天数编号第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天结果判定5.2. 配制批号： 日期： 年 月 日天数编号第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天结果判定5.3
17、. 配制批号： 日期： 年 月 日天数 第 1 第 2 第 3 第 4 第 5 第 6 第 7 第 8 第 9 第10 第11 第12 第13 第14 结果判定硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证报告 页码：2/6编号 天 天 天 天 天 天 天 天 天 天 天 天 天 天6. 灭菌后培养基灵敏度检查6.1. 菌液计数结果 日期： 年 月 日菌液浓度（cfu/ml ）指示菌名称标准浓度 平板 1 平板 2 平均菌落 数金 黄 色 葡 萄 球 菌 CMCC(B) 26 003铜 绿 假 单 胞 菌 CMCC(B) 10 104生 孢 梭 菌 CMCC(B) 64 941枯 草 芽 孢 杆 菌
18、CMCC(B) 63 5011006.2. 培养基灵敏度检查结果 日期： 年 月 日配制批号 检查项目 第一天 第二天 第三天阴性对照管 结果判定金黄色葡萄球菌管铜绿假单胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢杆菌管6.3. 培养基灵敏度检查结果 日期： 年 月 日配制批号 检查项目 第一天 第二天 第三天阴性对照管 结果判定金黄色葡萄球菌管铜绿假单胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢杆菌管6.4. 培养基灵敏度检查结果 日期： 年 月 日配制批号 检查项目 第一天 第二天 第三天 结果判定硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证报告 页码：3/6阴性对照管金黄色葡萄球菌管铜绿假单胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢杆菌管7. 保存三
19、周后培养基无菌性检查 7.1. 培养基无菌性检查结果 配制批号： 日期： 年 月 日天数编号第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天结果判定7.2. 培养基无菌性检查结果 配制批号： 日期： 年 月 日天数编号第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天结果判定7.3. 培养基无菌性检查结果 配制批号： 日期： 年 月 日天数编号第1天第2天第3天第4天第5天第6天第7天第8天第9天第10天第11天第12天第13天第14天结果判定8. 保存三周后培养基灵敏度检查硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌
20、方法验证报告 页码：4/68.1. 菌液计数结果 日期： 年 月 日菌液浓度（cfu/ml）指示菌名称标准浓度 平板 1 平板 2 平均菌落数金 黄 色 葡 萄 球 菌 CMCC(B) 26 003铜 绿 假 单 胞 菌 CMCC(B) 10 104生 孢 梭 菌 CMCC(B) 64 941枯 草 芽 孢 杆 菌 CMCC(B) 63 5011008.2. 保存三周后培养基灵敏度检查结果 日期： 年 月 日配制批号 检查项目 第一天 第二天 第三天阴性对照管 结果判定金黄色葡萄球菌管铜绿假单胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢杆菌管8.3. 保存三周后培养基灵敏度检查结果 日期： 年 月 日配制批号 检
21、查项目 第一天 第二天 第三天阴性对照管 结果判定金黄色葡萄球菌管铜绿假单胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢杆菌管8.4. 保存三周后培养基灵敏度检查结果 日期： 年 月 日配制批号 检查项目 第一天 第二天 第三天阴性对照管 结果判定金黄色葡萄球菌管铜绿假单胞菌管生孢梭菌管枯草芽孢杆菌管3、 建议、结果分析和验证总结硫乙醇酸盐流体培养基配制和灭菌方法验证报告 页码：5/61. 建议 1.1. 加强生测室检验人员的操作技能培训，使培养基配制和灭菌过程标准化，程序化。1.2. 当硫乙醇酸盐流体培养基在日常无菌检测时，应对其外观性状进行检查，不符合要求时严禁使用，并对其重新配制和灭菌。2. 结果分析及验证总结2.1. 根据上述验证过程及结果分析，本公司生测实验室对硫乙醇酸盐流体培养基的配制和灭菌程序进行验证，其验证结果符合中华人民共和国药典（2010 年版二部）的要求，其使用期限定为三周。日常硫乙醇酸盐流体培养基的配制和灭菌采用此验证程序进行。2.2. 再验证周期 根据中华人民共和国药典（2010 年版二部）的要求，当重新购进一个批号的硫乙醇酸盐流体培养基或更换培养基厂家或配制和灭菌程序改变时，应重新进行培养基的配制和灭菌程序验证。
