1、TCA 沉淀法培养基上清直接电泳跑出来的条带经常很难看，可以 TCA 沉淀浓缩后跑电泳，一般表达量大于 1mg/ml 可以看到明显条带，这是我用的 TCA 沉淀方法，效果很好：1.菌液 10000g,离心 5 分钟，收集表达上清。2.取 500-1000ul 上清于 EP 管中，加入 1/9 体积的 100TCA，颠倒 10 次混匀。3.样品置于冰浴中大于 0.5 小时，过夜效果更好。4.15000g,离心 1020 分钟,可见有棕黑色沉淀，倒掉上清，将 EP 管倒扣在吸水纸上轻轻控几下，除去残余在管口的液体。5.将 EP 管倒置于吸水纸长，37 度烘箱 1020 分钟，待管底无明显液体残留，
2、如果管壁还残留有液体，可以吸水纸吸掉。可以改成室温或用电吹风，关键是除去管底和管壁残余液体。6.15000g,离心 1020 分钟,用 20ul 枪头尽量吸去管底残余的液体，此步骤要快，不然沉淀容易散开，降低蛋白回收率，一般最多几 ul 或者没有，注意不要吸到沉淀。7.EP 管倒置于吸水纸长，37 度烘箱 5 分钟，确认管壁和管底没有液体残留。8.加入 2050ul Loading buffer，95 度加热 10nim，一般沉淀会自动溶解，如果不溶，用手指轻弹管壁或用 20ul 枪头轻轻吸打，注意整个操作尽量不要碰到管壁，因为管壁可能沾有残余 TCA。如果蓝色的 Loading buffer
3、 不变成黄色，说明残余 TCA 吸弃了干净，如果变黄，一般不影响电泳。此方法连丙酮洗这一步都省了，而且不影响电泳效果。或者第 5 步和第 6 步改为丙酮洗:5.加入 200ul 冰冷的丙酮，用手指轻弹 EP 管，洗去管底和管壁残余的 TCA。6.15000g,离心 1020 分钟,倒掉上清，将 EP 管倒扣在吸水纸上轻轻控几下，除去残余在管口的液体。TCA 沉淀法定量 DNA1. Dilute radioactive sample to a 100 ml volume2. Spot 5 ml of the sample onto the center of a 2.4 cm Whatman G
4、F/C glass-fiber disc.3. Mix 5 ml of the sample with 100 ml Salmon sperm DNA (50 mg in 20 mM EDTA).4. Add 5 mL ice cold 10% Trichloroacetic acid (TCA). Mix well and incubate on ice for 15 min.5. Filter the solution through a separate GF/C glass-fiber disc. 6. Wash the filter 6 times with 5 mL ice-col
5、d 10% TCA.7. Wash filter once with 5 mL 95% Ethanol.8. Dry both filter under a heat lamp.9. When dry, count each in a scintillation counter.10. The first filter measures total radioactivity. The second filter measures radioactivity incorporated into DNA fragments greater than 20 nucleotides in length.
