1、琼脂糖凝胶电泳加样的注意事项DNA 分子带负电,从琼脂糖凝胶的负极向正极泳动,速度依赖于其分子质量。小的紧密的 DNA 分子的较大伸展片断容易穿过琼脂糖介质。依据所要分离的 DNA 分子的大小来选择琼脂糖的浓度,例如质量浓度 3mg/ml 的琼脂糖用来做 DNA 大片段电泳(20 000 碱基)而 0.8%只能电泳小的片断。要注意以下几点:1、 用移液抢将样品加至点样孔。每孔点样的体积一般少于25ul,因此吸取每一个样品时,操作要稳当且细心。2、 常加一定量的蔗糖来增加样品的浓度,以使每个样品停留在各自的点样孔中。3、 在样品中加入水溶性的阴离子追踪染料(如溴酚蓝),用以看出样品移动的距离。4
2、、 在一个或几个孔中加入标准分子质量样品,电泳结束后,根据已知分子质量的带的相应位置可用来做出标准曲线。5、 电泳一般是在追踪染料泳动到胶的 80%部位时停止。注意电泳期间,电泳槽盖要安全盖好,以防止液体蒸发,又可以降低电击的可能性。6、 电泳结束后,将胶浸没在 1mg/L 的溴化乙锭( EB)中,5min 后即可看到 DNA 带,EB 通过插入在双螺旋的配对核苷酸之间同 NDA 结合。另一种方法是电泳时,在胶中加入 EB。7、 在紫外灯下,由于 EB 发出强烈的橘红色的荧光,所以可以看到 DNA 带。利用这种方法检测的界限是每条带约 10ng DNA。带上塑料安全眼镜可防止紫外光对眼睛的伤害。可用尺子来测量每条带至点样孔的距离。同样,利用特制的照相机和调焦器,也可以对凝胶拍照。8、 如果要对某一条带(如质粒)进一步分析,可用小刀将含该带的凝胶切割下来,从带中回收 DNA。