1、免疫学应用实验一、E-玫瑰花环形成实验 掌握人 T 淋巴细胞形成 E-花环的实验原理和操作方法； 熟悉 T 淋巴细胞的功能检测方法。二、中性粒细胞吞噬功能测定 掌握中性粒细胞吞噬金黄色葡萄球菌实验的操作过程；瑞氏染色的基本 步骤及吞噬百分率的计算。三、抗原抗体反应及免疫学标本片的观察 掌握抗原抗体反应的特异性；熟悉凝集反应的原理、方法和分类。掌握 胶乳凝集试验的原理，熟悉试验方法，了解其应用；熟悉沉淀反应的原理；熟悉双向琼脂扩散、单向琼脂扩散的操作方法和结果分析。（1）凝集反应 类风湿因子的检测（2）观察琼脂中抗原与抗体反应的单扩和双扩的试验现象A 单向琼脂扩散试验操作方法：制备含抗 IgG
2、抗体的琼脂板:溶化的 3%琼脂、待冷至 56时吸取 1.5ml 琼脂 1与等量适当稀释的抗 IgG 抗体混合均匀。倾注于水平放置的塑料板上，制成厚薄均匀的琼脂板。凝固后用打孔器打孔二排，每排 5 孔、孔距 810mm，孔要圆整光滑。图示 单向琼脂扩散试验模式加样:用微量加样器加样。 2结果分析:标准曲线的绘制及血清标本中 IgG 含量的测定。以各稀释度标准抗原孔沉淀环直径为横座标，相应孔中 IgG 含量为纵座标在 1半对数座标纸上作图，画出标准曲线。依待检血清标本孔沉淀直径，查标准曲线，将查得的唾 G 含量乘以标本的稀 2释倍数，即为血清中 IgG 的含量。B 双向琼脂扩散试验操作方法：将 1
3、%生理盐水琼脂加热溶化。 1制备琼脂板:取洁净载片一片，放一水平台上，将溶化的 25m1 琼脂趁热用 2吸管注于玻片上，使其自然流成平面，琼脂凝固后用打孔器打孔，去掉孔中的琼脂。加样:中央孔中加入甲胎蛋白（AFP）诊断血清，1、4 孔加肝癌病人阳性血 3清，2、3、5、6 孔加待检血清。加血清至满勿外溢。不可有气泡。加样后，将掠脂板放入有一定湿度带盖容器中，置 37温箱，24 小时观察 4结果。结果分析:1、4 孔为阳性对照孔(加已知阳性标本)，与中央孔间出现乳白色沉淀线。 1其余各孔与中央孔如出现沉淀线，且一端与阳性对照沉淀线相吻合者为阳性。 2证明该份血清含有甲胎蛋白。如两条沉淀线相交，表
4、明二者抗原性不同，出现的沉淀线另一种抗原抗体反应，不能判定阳性。如待检孔与中央抗体孔间未出现沉淀线为阴性，证明待检血清中没有甲胎蛋 3白。图示 双向琼脂扩散试验结果2、6 孔：吻合沉淀线（阳性） 。5 孔：交叉沉淀线（阴性） 。3 孔：无沉淀线（阴性） 。4、巨噬细胞吞噬功能试验 掌握巨噬细胞的生物学功能；熟悉巨噬细胞吞噬功 能试验的原理和操作方法。实验原理：巨噬细胞具有吞噬大颗粒异物的特性，通常选用鸡红细胞作为吞噬颗粒，将其注入小鼠腹腔中，腹腔中巨噬细胞则将鸡红细胞吞入。取小鼠腹腔液涂片、染色后可见鸡红细胞被吞噬的现象，计数 100 个吞噬细胞中吞噬鸡红细胞的细胞数可判断其吞噬功能。操作方法
5、：1、于验前 3 天，小白鼠腹腔内注射 6%可溶性淀粉肉汤 1ml。2、试验当天于每只小鼠腹腔内注射 0.5ml 1%鸡红细胞悬液，并轻揉腹部。3、注射后 30min，将小鼠处死、取腹腔液涂片并行瑞氏染色。4、油镜观察涂片。实验现象与数据：镜下可见吞噬细胞细胞核呈蓝色，被吞噬的鸡红细胞胞浆呈红色，而核则染成蓝色（鸡红细胞有细胞核） 。计数 100 个吞噬细胞，并计算吞噬阳性细胞的百分率。五、淋巴细胞转化实验 掌握分离的原理及操作方法，熟悉其意义及应用；掌握 淋 巴细胞转化现象的试验方法和原理；熟悉淋巴母细胞形态学观察方法。实验原理：T 淋巴细胞受到特异性抗原或非特异性抗原（PHA、PWM 和
6、ConA）刺激均能使细胞发生转化。T 淋巴细胞转化率的高低可反映人体细胞免疫功能水平，常被作为细胞免疫功能指标之一。淋巴细胞转化试验可从周围血中分离出淋巴细胞，也可采用全血试验。操作方法：1、制备细胞悬液：用培养液将淋巴细胞稀释成 2l06/ml，细胞悬液。2、分装：向两个小瓶中各加 2ml，细胞悬液,一瓶加 PHA 0.1ml(100 单位)，另瓶不加作对照。3、37培养 72 小时。离心沉淀，用 Hanks 液洗两次。4、用沉淀推成血片,加姬姆萨染液染色,镜下观察计数 200 个以上淋巴细胞，算出转化率。实验现象与数据：1、成热的淋巴细胞:与外周血中小淋巴细胞形态一致、直径 68 微米，核染色质密集、无核仁、胞浆轻度嗜碱性。2、过度型淋巴细胞:直径 1020 微米，核质密，但有明显核仁。3、淋巴母细胞，细胞增大，形态不规则，直径 2030 微米，核也增大，染色质纤细，核仁 12 个，胞浆扩大，强嗜碱性可见数个空泡及颗粒。4、网状细胞样母细胞：细胞增大，形态不规则，核淡染，有 12 个大小不规则的核仁，胞浆扩大、含空泡，嗜碱性不强，有透明感。用姬姆萨染色后，计算 200 个淋巴细胞中转化为母细胞的细胞数（包括过渡型、母细胞和分裂相淋巴细胞） ，依转化的百分率判定 T 淋巴细胞的功能。
