1、兰壁！燮塑竖篓箜 型生型丝坚材料及仪器标本人翼状胬肉（武汉协和医院手术室内取材）试剂尼美舒利（），美洛昔康（）（公司）新生牛血清（公司）培养基（公司）：胰蛋白酶（公司）二甲基偶氮唑盐（订）（公司）二甲基亚砜（）（公司）碘化丙啶（）（公司）酶（公司）小鼠抗人角蛋白及波形蛋白单克隆抗体（，）小鼠抗人单克隆抗体（武汉博士德）免疫组化试剂盒（武汉博士德）显色试剂盒（武汉博士德）纯丙酮（公司）青霉索，链霉素（华北制药公司）实验耗材塑料培养瓶个（公司）；玻璃培养瓶。个孔，孔培养板各个（公司）滤膜（，取），玻璃瓶，吸管等实验仪器超净工作台（北京半导体设备厂）培养箱（公司）华中科技大学固济医学院 雇硕士毕业论
2、文倒置显微镜（）型酶联免疫检测仪流式细胞仪（，美国公司）压力蒸汽灭菌器（上海核子仪器厂）电热干燥箱（重庆银河实验仪器公司）低温冰箱（）分析天平，真空泵，离心机眼科剪、眼科镊溶液的配制（一）培养基的配制 “将干粉型培养基倒入大烧杯中，加入少量的三蒸水并不断搅拌使之成糊状，三蒸水冲洗包装袋两次倒入烧杯中；然后加入三蒸水至总量，并不断搅拌至培养基充分溶解均匀；加入抗生素：最终浓度为青霉素，链霉素；无菌条件下，将上述溶液用过滤法消毒除菌，所用的滤器采用 “和耻滤膜各一张，常规高压灭菌消毒；将除菌后的培养基分装到无菌玻璃瓶中，封口。冰箱保存；新生牛血清的灭活：。水浴箱中浸泡分钟；无菌条件下分装至无菌玻璃
3、瓶中，封口。冰箱保存备用；超诤台内，无菌条件下将灭活的新生牛血清按：加入到培养基中，轻轻摇匀；冰箱保存。（二） 液的配制 准确称取：，：，：，：，：，酚红：；将已称好的各成分置于烧杯中，缓慢的加入适量的三蒸水并不停搅拌第页，共负华中科技大学固济医学院 鑫硕士毕业论文至完全溶解，溶液澄清；将烧杯内的搭液转移全的量筒内，用三蒸水将烧杯洗三遍，洗液倒入量筒内；量筒内添加三蒸水至，同时不断搅拌至均匀；将 液分装到的玻璃瓶中，磅分钟高压蒸汽灭菌；分装封口， 冰箱保存备用。（三）胰蛋白酶溶液的配制 配平分析天平的两端；称取：胰蛋白酶粉末，置于量筒中；加入少量的 液并快速的搅动，使胰蛋白酶基本溶解加入 至总
4、量，继续搅动使胰蛋白酶充分溶解超净台内，无菌条件下，将胰蛋白酶液过滤除菌；分装，冰箱储存备用。实验方法一翼状胬肉成纤维细胞的原代培养手术室无菌条件下取翼状胬肉标本浸泡于 液中；用 液漂洗标本三遍，将其剪碎成左右的组织块。在剪切过程中，可以适当向组织上滴加滴培养液，以保持湿润；将剪好的组织小块，用眼科弯镊送入培养瓶内，并使其在瓶壁上均匀摆置，每小块间距左右；轻轻翻转培养瓶，让瓶底朝上，向瓶内注入适量的含新生牛血清的培养液，盖好瓶盖，将培养瓶倾斜放置在恒温培养箱内；放置 待组织块贴壁后，将培养瓶慢慢翻转平放，静置培养。也可以在摆放组织块后，向培养瓶内加入少量的培养液，保持组织块湿润即可；盖好瓶盖，
5、放入恒温培养箱培养小时后再补加培养液。二翼状胬肉成纤维细胞的传代培养笫页，共页华中科技大学两济医学院 强硕士毕业论文待原代翼状胬肉成纤维细胞基本汇满瓶底时，无菌条件下，吸除原有的培养液；加入胰蛋白酶消化液，使消化液流遍所有细胞表面，倒置显微镜下观察细胞形态变化，以便及时的终止消化；显微镜下见细胞收缩成圆形，细胞间隙增大时，吸除消化液，加入含新生牛血清的培养液终止消化；用弯头吸管，吸取瓶中培养液，反复轻轻吹打使细胞脱离瓶壁，从而成为细胞悬液；细胞悬液吹打均匀后，按：分别接种在新的培养瓶中继续培养。三细胞爬片的制各将盖玻片裁成为大小，清洗，泡酸后高压消毒，备用；无菌条件下，将已消毒的盖玻片放入孔培
6、养板中，每孔一片；超净台内，取第三或四代翼状胬肉成纤维细胞，用胰蛋白酶液消化制备细胞悬液；将细胞均匀的转移到孔培养板内， 恒温培养箱继续培养；培养至细胞汇满玻片后，冰丙酮和无水乙醇：混合液固定分钟后观察。四翼状胬肉成纤维细胞的鉴定细胞观察每天在倒置相差显微镜下观察翼状胬肉从纤维细胞形态和生长情况，翼状胬肉组织块贴壁后可见有少量的细胞从组织块周围爬出，呈梭形。制备细胞爬片后对细胞进行瑞氏染色。用法进行抗波形蛋白免疫细胞化学染色进行细胞鉴定（参照试剂盒和显色试剂盒说明进行）（）取出第二代汇合的细胞爬片；（）小时后取出玻片， 液冲洗遍，每次分钟；第页共负华中科技大学同济医学院 屠硕士毕业论文（）冷丙
7、酮和无水乙醇等体积混合液固定细胞约分钟， 液冲洗遍，每次分钟（干燥后可冰冻保存）；（）纯甲醇加制成，室温浸泡细胞爬片，以灭活内源性过氧化物酶，蒸馏水洗涤遍；（）抗原修复液处理，蒸馏水洗遍；（）滴加正常血清封闭液，室温放置，甩去多余液体，不洗；（）滴加适当稀释的一抗 小鼠抗波形蛋白抗体，。作用，洗遍，每次分钟；（）滴加生物素化羊抗鼠抗体；（）滴加，。作用，洗遍，每次分钟；（）显色剂显色。取蒸馏水，加试剂盒中，试剂各一滴，混匀后加至玻片上。室温显色，镜下控制反应时间，一般 之间，蒸馏水洗涤；（）常规脱水，透明后封片，光学显微镜下观察结果。阴性对照以代替一抗。五药物对翼状胬肉成纤维细胞增殖的检测（一
8、）尼美舒利和美洛昔康溶液的制各两种药物均用溶解后再用培养液稀释，以为储存浓度，置于冰箱备用。注：稀释后最高用药浓度即弘药物溶液中的含量（二）观察尼美舒利及美洛昔康作用后细胞形态学变化在翼状胬肉成纤维细胞传代至第或第代后，分别加入尼美舒利和美洛昔康，其终浓度分别为，毗，培养、及后在相差显微镜下观察细胞分布及形态学变化。（三）检测法检测尼美舒利和美洛昔康对增殖的影响华中科技大学同济医学皖 届硕士毕业论文取第或第代翼状胬肉成纤维细胞，胰蛋白酶消化制备细胞悬液；调整细胞浓度为，分别转移到两个孔板内，每板设六组；每组设个复孔，每孔加入叽细胞悬液；培养小时，细胞贴壁后，吸出上清，各组加入不同浓度的尼美舒利
9、及美洛昔康，使各组药物浓度分别达到瓤，同时设只含的阴性对照组，另一组为空白对照用于调零，分别于、后，每孔加入 陬（终浓度为），继续培养；培养小时后，弃原有培养液，每孔加入 吮，振荡分钟，摇匀后酶联免疫检测仪检测各孔吸光度值（），检测波长；以下列公式计算细胞抑制率：（ ，）（阴性对照组平均值一处理组平均值）阴性对照组平均值 。（四）流式细胞仪检测细胞周期分布及调亡隋况待翼状胬肉成纤维细胞传代至第或第代，取尼美舒利和美洛昔康分别处理后的实验组及对照组（不加药）细胞悬液，每组各瓶标本，洗涤次后离心，弃上清，加入冷乙醇，吹打成单细胞悬液后加入冷乙醇固定过夜，离心后弃上清，洗涤次，加入犁 酶，放入。恒温
10、箱半小时，碘化丙锭（染色，小时内用流式细胞仪（美国公司产品）检测，选用激发波长测定样本。附：染液的配制： ，枸橼酸钠， ，加蒸馏水至， 避光保存。（五）增殖细胞核抗原（ ，）的检测：待翼状胬肉成纤维细胞传代至第或第代后，将细胞悬液接种于铺有盖玻片（已消毒）的孔板中，孵育后分别加入含不同浓度的尼美舒利及美洛昔康的培养液，使其终浓度为一，第页，共页华中科技大学同济医学皖 届硕士毕业论文，对照组不加药，孵育后取出长有细胞的盖玻片，经免疫组织化学法染色检测的表达（实验步骤同角蛋白染色法）。结果分析采用比较标记指数（ ，），即平均每个细胞的阳性细胞数。计数个视野（放大倍率）的全部阳性细胞及阴性细胞并列表
11、。细胞阳性表达显示为棕黄色、黄色或浅黄色细小均匀颗粒，分布于整个细胞核；细胞核无着色、胞浆呈淡黄色者为阴性。测定条件为：随机测定个细胞分别求出阳性细胞反应的细胞数。六统计学方法本实验数据均以均值 标准差（）表示，均数之间的比较采用两样本比较的检验，用软件包处理数据。实验结果一、体外培养的的生物学特性（一）的原代培养将剪碎的翼状胬肉组织块置于的玻璃培养瓶中培养，小时即可见少量细胞游离出贴壁的组织片，组织片的边缘可见 “毛刷状 ”缘，靠近组织片的周围，细胞密集，轮廓欠清，胞体透亮，远离组织片的细胞相对稀疏，细胞呈火焰状或放射状延展，轮廓清晰，胞体透亮，游离出的细胞呈长梭形、三角形、扇形或不规则形态
12、，体积大小不一，胞核呈椭圆形，位于细胞中央。培养至周后，成纤维细胞逐渐增多，呈瀑布状、放射状及螺旋状或编织状排列，至汇合时，细胞排列密集，细胞界限不清，部分胞体交叉重叠，并随着时间的延长，其增殖活性增强，组织片边缘呈 “毛刷状 ”，表明细胞仍有旺盛的生长和游离。（图）（二）翼状胬肉成纤维细胞的传代培养翼状胬肉成纤维细胞传代后，小时即可见细胞贴壁，第二代成纤第页，共负届硕 毕业论文维细胞生长更为旺盛，细胞形态与原代比较没有改变，瑞氏染色可见细胞轮廓清晰，呈屙半多边状的上皮形态，胞浆内为淡红色，胞核边界清晰，有的可见 “双核 ”，表明此期细胞增殖旺盛（图）。第二代细胞约天即达到融合状态。第三代细胞
13、生长速度，细胞形态与第二代细胞基本相同。传至第代时，细胞生长速度明显减缓，细胞形态发生转化，纽变长而不规则，细胞粗糙，胞质内可见大小不一的颗粒；细胞融合的膜状区域内可见有的细胞相互分离卷曲而呈网孔状结构，即所谓的 “拉网结构 ”（），说明此期的细胞已经开始向其他细胞类型发生转化。二翼状胬肉成纤维细胞免疫组织化学鉴定体外培养的翼状胬肉细胞经法染色可见波形蛋白表达呈阳性，阳性表达位于胞浆，呈现与成纤维细胞长轴方向一致的棕黄色柬状或网状结构；细胞角蛋白表达呈阴性。（图）三尼美舒利及美洛昔康作用后细胞形态学变化相差显微镜下见：对照组：存活生长增殖旺盛、密集，束状排列，连接成片，胞晕清，形态规则，梭形为
14、主，胞体饱满，扁平而长突。用药组：随着药物浓度的增加，活细胞数量渐减少，胞体缩小，形态不规则，胞间隔宽，失去贴壁细胞特性，甚至收缩，悬浮成团块状。药物作用后无显著变化；后大部分细胞收缩，但未变圆及脱壁；后几乎全部细胞变圆，部分脱壁、崩解，细胞数明显减少。四检测两种药物对翼状胬肉成纤维细胞增殖生长的影响结果显示尼美舒利即，美洛昔康陬作用后均能显著抑制的增殖，两种药物同浓度同时间组间均有统计学意义上的差异（表）。尼美舒利和美洛昔康对增殖的抑制作用均呈剂量和时间依赖性（），尼美舒利的抑制作用明显强于美洛昔康。届硕士毕业论文图 原代细胞组织片的边缘可见 “毛刷状 ”缘，细胞呈火焰状或放射状延展，轮廓清
15、晰，胞体透亮图传代细胞染色细胞轮廓清晰，呈扁平多边状的上皮形态，胞浆内为淡红色，胞核边界清晰，有的可见 “双核 ”图细胞鉴定法染色见波形蛋白表达阳性，阳性表达位于胞浆，呈现与成纤维细胞长轴方向一致棕黄色束状或网状结构第页，共页牮中科技大学同济医学院 届硕士毕业论文药物浓度 尼美 美洛，加药物浓度，药物浓度，值尼美值尼美值抑制率抑制率抑制率值值值美洛美洛抑制率抑制率抑制率注：与对照组比， ￥ ，料，与临近低浓度组比， 美洛与尼美相同浓度相同时间比，踌碗士毕韭论文图不同浓度尼美舒利和美洛昔康对的抑制作用四流式细胞仪分析尼美舒利和美洛昔康对细胞周期的影响流式细胞仪的结果见表，两种药物作用后，均出现典
16、型的亚二倍体凋亡峰，均可见，期细胞可分数增加，期细胞百分数减少，说明细胞阻滞十期，进入合成期的细胞减少。（图）表 分析 尼美和荚洛作用对细胞周期的影响与对照组比，聿，美洛与尼美比，）五尼美舒利和美洛昔康对细胞表达的影响细胞阳性表达显示为棕黄色、黄色或浅黄色细小均匀颗粒。分布于整个细胞核：细胞核无着色，胞浆呈淡黄色者为阴性（附图）。当尼美舒利浓度 岬，美洛昔康浓度，即能浓度依赖性的抑制表达（），两组药之间有显著荠异，且尼美舒利的作用强于美洛昔康（表）。第页，共页强硕士毕业论文流式细胞仪检测结果：图 阴性对照组图 尼美舒利组期细胞百分数增加，期细胞百分数减少图 美洛昔康组期细胞百分数增加，期细胞百
17、分数减少图均出现典型的亚二倍体凋亡峰第页，共页届硕士毕业论文图阴性对照组细胞的表达（ ）图美洛昔康组细胞的表达（ ）图尼美舒利组细胞的表达（ ）第页，共页华中科技大学固济医学皖 蕊硕士毕、韭论文表 尼美舒利和美洛昔康对表达的影响药物浓 表达细胞数， （一）尼美 （十） （一） 美洛 （）尼美 美洛值注：与对照组相比，尼美卵，美洛，尼美和美洛相同浓度比，尼美与临近低浓度比口，美洛与临近低浓度比 讨论翼状胬肉是局部球结膜纤维血管组织呈三角形膜样增生而侵犯角膜的一种眼表疾病，单眼或双眼受累。不仅直接影响美观，还可由于牵拉而引起眼部不适及角膜散光，严重者影响视力及不同程度地影响眼球运动。有文献报道，翼
18、状胬肉组织中有大量的新生血管、纤维母细胞和纤维的增生，并可见大量的淋巴、浆细胞浸润和肥大细胞反应。，此外，该病与环境因素，尤其是阳光、沙尘、干燥气候等慢性刺激有关，紫外线可能是主要病原因素，而慢性炎症刺激是胬肉发病的必要条件。，因此，国内外研究者普遍认为免疫因素在翼状胬肉的发病中起重要作用，并且大量的组织学和实验研究也证实成纤维细胞和细胞因子与翼状胬肉的发病机制密切相关。 “等人通过病理研究发现翼状胬肉的主要成分是成纤维细胞，它具有转化细胞的的生长特征。由于各种原因引起的成纤维细胞增生是翼状胬肉发病机制中的首发改变，并由此引发一系列的变性改变，成纤维细胞在翼状胬肉发病机理中起免疫原始靶细胞的作
19、用。临床上目前治疗翼状胬肉的方法中，胬肉切除联合角膜缘干细胞移植加羊膜移植已经成为日趋成熟的手术方式，虽能有效降低复发率，但也不能彻底解决该问题。现常采用一些辅助疗法，如用氩激光、准分子激光、华中科技大学葡济医学皖 属硕士毕业论文放射线、冷冻疗法、皮质类固醇及免疫抑制剂（一氟尿嘧啶、丝裂霉素、噻替派）等试图降低翼状胬冈术后的复发翠，对于本病的治疗及复发的防治取得了一定效果，但并不十分理想，有时还会出现严重的并发症。所以，寻找安全有效的药物来抑制的增殖是许多学者所面临的研究课题。环氧合酶（，）又名前列腺素内过氧化物合成酶，是前列腺素合成的限速酶，它能将花生四烯酸催化合成各种前列腺素产物，后者参与
20、维持机体各种生理和病理过程。环氧合酶有两种同工酶：一和一。是一种持续表达的结构型酶，被喻为 “管家酶 ”，在大多数正常组织中稳定表达，参与机体正常生理过程和保护功能。而是诱导型酶，在生理状态下一在多数组织中处于静息状态或低表达，当细胞接受相应的刺激时，如生长因子、细胞因子（、）、血清脂多糖（）、促肿瘤剂（如佛波酯等）、内皮素、高渗状态等。，一的和蛋白很快增加，活性增高，参与炎症、损伤、修复、新生血管的生成及肿瘤的生长和转移。一般认为，一具有两种酶的活性：一是环氧化物酶的作用，将花生四烯酸转化为。二、是过氧化物酶的活性，将转化为。细胞膜上的磷脂在外界刺激如炎症介质等作用下，经磷脂酶催化，生成花生
21、四烯酸。花生四烯酸在的作用下生成、进而生成一系列的产物：、。、 ”等。花生四烯酸在炎症发生过程中起着十分重要的作用。近年来，一在眼部疾病发生发展中的作用被越来越多的学者所重视。眼部疾病中，角膜炎，虹膜炎，青光眼，白内障，糖尿病视网膜病变，早产儿视网膜病变中均可见蛋白的异常表达。可能参与眼部炎症和新生血管的形成。 “。本实验选用的尼美舒利和美洛昔康均为选择性一抑制剂，这类药物在抑制致炎前列腺素合成的同时并不抑制生理性前列腺素的合成 “，因华中科技大学同济医学皖 属硕士毕业论文此用于治疗时不良反应很少，近年来被广泛的应用于临床，治疗疼痛和炎症。有多篇国肉外艾献报道选择性一抑制剂能抑制多种体外培养的
22、肿瘤细胞（包括胃癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、胆囊癌、肝癌等）的增殖并诱导其调亡，一有可能作为肿瘤化学预防和治疗的新的靶点。在跟科领域， “通过角膜清创术制造基质层水肿模型，结果发现在给予抑制剂后，角膜基质层水肿与对照组相比明显减轻。 “”通过研究表明在热灼伤的角膜新生血管模型中，主要来自于。途径，而应用选择性一抑制剂一可以通过阻断的生成从而抑制新生血管。儿 “应用大鼠模型证明选择性抑制？可以抑制视网膜新生血管的生成。 “”在小鼠模型中用同样的方法证明了这一点。本实验结果显示尼美舒利和美洛昔康均能显著抑制的增殖，而且呈剂量和时间依赖性。这两种选择性一抑制剂，因其化学结构不同，对一的选择性也有所不同
23、。有文献报道尼美舒利对选择性抑制的强度是美洛昔康的倍 “，对一的选择性更高。本实验结果显示尼美舒利对的抑制作用是强于美洛昔康的，这表明抑制剂对生长的抑制作用主要是通过抑制一而实现的。一抑制剂可能是通过下列途径抑制细胞的增殖： （）通过抑审一的活性，导致的生成减少，削弱其对细胞、自然杀伤细胞活性的抑制，启动细胞免疫监视作用，帮助清除新生细胞 “，（）还可以通过一受体信号传导系统激活细胞内的蛋白激酶。 ，导致、等一系列细胞因子分泌增加，引起细胞的增殖，而一抑制剂通过抑南可以逆转上述改变。（）降低（）的活性 “，从而阻断细胞外信号向细胞内传递，达到抑制细胞增殖的作用。实验中流式细胞仪检测到两种药物作
24、用后，药物作用组均出现典型的亚二倍体凋亡峰，期细胞百分数增加，合成减少，从而引起细胞的调亡。选择性抑制剂诱导凋亡的可能机制包括：抑铝！的生成，下调一蛋白。 “，抑制突变的，的水平，通过细胞色素途径上调第页，共页华中秘技火学固济医学院 届硕士毕业论文的活性。 “，抑制（ 的磷酸化，抑制的激活，促进 诱导的细胞凋亡 “。是一种酸性细胞周期蛋白，是聚合的辅助因子，细胞内外的增殖信号必须经过参与才能引发的合成。 。因此，主要反映了细胞的增殖能力，已被认为是一种准确，直观，简便的衡量细胞增生状况的指标。经两种选择性一抑制剂作用，的表达下降，表明增殖减慢，生长受到抑制，高选择 陛抑制尼美舒利对细胞表达的抑
25、制作用明显一些，与着流式细胞仪结果一致。由此可见，选择性抑制剂在治疗翼状胬肉方面有适用前景。但是也不能忽略可能在炎症转归和损伤修复中存在着正性的作用，所以在治疗翼状胬肉时，如何把握好一方面一在炎症发生发展中所起的作用，一方面利的分子网络促进修复，在两者之间寻找平衡点是有待解决的问题。第页，共页华中科技大学同济医学皖 矗硕士毕业论文参考文献 】 司徒镇强，吴军正等。细胞培养。第一版。西安：世界图书出版社，【 柳林，杨德望，年龙贤等。翼状胬肉的免疫病理学研究。中华眼科杂志，：刘家琦，李凤鸣等。实用眼科学。第版。北京：人民卫生出版社， ， ，： ， ，：【 ， ， 一 ，（）： 【 ， ： ？ ，（
26、）： 【 ， ， 一 ，（）： 【 】 ， ， ， 一 ，（）： ， ， ， 一 ，（）： 孔玮，张劲松，张雪岩。环氧合酶一在诱导的人晶体上皮细胞增殖中的表达。中华实用眼科杂志，（）：【】 ， ， ， ，（）： 第： 【 ，共页华中科技大学同济医学院 商硬士毕业论文【 】 ， ， ， 一 ，（）： 李晓东，第二代一抑制剂。世界临床药物。，（）：【 ， ，（）： 】 ， 一 ，（）： ， 】 ， ， ， 一 ，（）： 【 】 傅得兴，何笑蓉，选择性环氧合酶一抑制剂尼美舒利的药理及临床应用。中国药学杂志，（）： ， ，（）： ， ， ，一 一一 ： ，（）： 【 ， ， ， （） ，： 】 ， ，
27、 ， 一（一） 一 ，（）： 】 李杰，陈孝平，时昌文等，美洛昔康对肝癌细胞系的生抑制作用。中华实验外科杂志，（）：华中科技大学两济医学院 属碗士毕业论文 ， ， ， ，： 】 ， ，：第负，共页华中科技大学同济医学院 商硕士毕业论文综述环氧合酶一与眼部疾病的关系华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科高媛综述张明晶审校摘要：环氧合酶一因参与机体的多种病理生理过程而日益受到重视。它在眼部炎症，角膜和视网膜新生血管，青光眼，白内障，增殖性玻璃体视网膜病变等许多疾病的发生发展中起着重要的介质作用。本文就环氧合酶一的生物学特性以及在眼部疾病中的表达情况进行了综述。关键词：环氧合酶一；眼部疾病环氧合酶（
28、，）又名前列腺素内过氧化物合成酶，是前列腺素合成的限速酶，它能将花生四烯酸催化合成各种前列腺素产物，后者参与维持机体各种生理和病理过程。自年代初国外就发现环氧合酶有两种同工酶和一，参与机体正常的生理功能，而则参与多种病理生理过程，包括炎症、损伤、修复、新生血管的生成及肿瘤的生长和转移。近几年来的大量研究表明在许多眼部疾病中表达增高。本文就与眼部疾病的关系作一综述。 概述 的生物学特性一基因最初是通过分子差异筛选从 ￥ 成纤维细胞基因库中分离出来，之后又从其他组织中克隆基因。人类一基因长，有个外显子个内含子，位于第号染色体的。基因编码或个氨基酸，含有个氨基酸残基的信号肽，虽然与基因屠碗士毕业论文
29、矛末端的序列不同，但剩下的核心序列有相同，全部序列上有的同源性。一是一种持续表达的结构型酶，被喻为 “管家酶 ”，在大多数正常组织中稳定表达，目前可在人体的血小板、内皮细胞、消化道上皮细胞和肾脏等几乎所有器官、组织中检测到一，它催化产生的前列腺素参与机体正常生理过程和保护功能。而一是诱导型酶，在生理状态下一在多数组织中处于静息状态或低表达，而在病理情况下，当细胞接受相应的刺激时，一的和蛋白很快增加，活性增高。因此，一被称为 “立早基因 ”（ ）。目前已知胃上皮壁细胞、肠粘膜细胞、单核一巨噬细胞、平滑肌细胞、血管内皮细胞、滑膜细胞和成纤维细胞可表达一 。 的分布、生理作用和诱导调控不同于分布于内
30、质网，主要定位于核膜和核周区域。一般认为，一具有两种酶的活性：一是环氧化物酶的作用，将花生四烯酸转化为。二、是过氧化物酶的活性，将转化为。细胞膜上的磷脂在外界刺激如炎症介质等作用下，经磷脂酶催化，生成花生四烯酸。花生四烯酸在一的作用下生成、进而生成一系列的产物：、。、 “等。花生四烯酸在炎症发生过程中起着十分重要的作用。研究发现，还具有其他功能，水平上调时伴一激活，进而激发一系列的变化。在炎症介质或相关细胞因子作用下，该酶的活性可迅速提高，促进炎症反应的发生。至于在肿瘤、在维持正常生理功能方面， 缺乏具有更深远的影响 “。许多刺激因素诱导基因表达，这些刺激因素包括生长因子、细胞因子（、）、血清
31、脂多糖（）、促肿瘤剂（如佛波酯等）、内皮素、高渗状态等。各种刺激通过蛋白偶联机制、活化的蛋白激酶介导的通路及生长因子受体、癌基因产物、 活化的酪氨酸激酶介导的通路而刺激一基因表达 “。华中秘技大学同济医学皖 届颧士毕、监论文 与眼部疾病的关系在许多眼部疾病中，都能发现的表达异常增焉，这说明一在眼部疾病的发生，发展，甚至转归中都起着重要的作用。 一与角膜疾病 “”发现在正常狗角膜无一的表达，而在狗角膜炎中可见角膜全层（包括角膜上皮层，基质层和内皮层）有的异常表达，同时在虹膜上皮和基质细胞以及小梁网细胞中均可见的表达增高。一直以来，在许多器官中缺氧损伤被认为是一种炎性刺激， 和 “利用缺氧诱导模型发现角膜中来源的花生四烯酸类物质显著增加，参与角膜炎性反应过程，利用选择一一抑制剂发现缺氧状态下的活性主要来自于。，一活性显著增加并呈时间依赖性而一的表达相对稳定。同样， “”通过 免疫印迹法检测到正常角膜一全层表达而一仅在基质层表达，而在创伤后，一在全层表达明显增加特别在上皮层占主要地位。在早期愈合中一更多的表达于靠近损伤的上皮细胞，并且这些细胞有向损伤区移行并覆盖的趋势。这些研究均说日一的高表达参与了角膜炎症发生发展的病理过程。创伤后，早期可有角膜基质层水肿而晚期可促进新生血管的生成。 “。通过角膜清创术制造基质层水肿模型，结果发现在给予抑制剂后，角膜基质层水肿与
