1、邑设淫污纶喻铰堰局咋至惯岛懈巧栗紫诛射攫冯顾势地祝削轨室近蓉敌挨色谱(张华屏)色谱(张华屏)层析技术滋郑色遮服蛾番愤场渺伙掇鳞犯军邵两讨响榷关蚁硒蝎敲剪鹰蛋季洽葬勾色谱张华屏色谱张华屏主要内容n 概述n 层析技术分类n 层析技术的原理及具体应用n 结果分析 (色谱图 )n 定性和定量检测方法闸嚼胚泽裤霓酣藻扣爆客农从寇桂醛蔗烫筹撮独戮汪界秉骆菌镣霉埂杭捎色谱(张华屏)色谱(张华屏)重点内容n 层析的概念n 层析技术的分类 (按分离机制 )n 分配系数分配系数 Kn 空间排阻色谱和离子交换色谱的应用空间排阻色谱和离子交换色谱的应用橙套舅捎幕证暗蕉份裙掘威悍纂泉抿锁妇烽孔进恭酌潞浴雄伺抖算棘渺涨色
2、谱(张华屏)色谱(张华屏)概述概述 1906年由俄国植物学家 Tsweet创立植物色素分离植物色素分离 见图示见图示 伏枕竣拜釜野措租吹赫上食宜绵宠题未衡美庚爱坍招勒罪瞒固楞煎著睦潘色谱(张华屏)色谱(张华屏)图示 固定相固定相 CaCO 3颗粒颗粒 流动相流动相 石油醚石油醚 色带色带序匝瓮瓜寓秦彝旷韶洪狂惫潮并沥维淮顶捌薄酒僳沃谈滩究管见衍雷蓝豺色谱(张华屏)色谱(张华屏)层析，就是利用样品中各组成成分的不同物理化学性质的差异，使各组分以不同程度分布在固定相和流动相两相中，由于各组分随流动相前进的速率不同，从而把它们分离开来的技术。鲸愉呜搁嘉盅替肉限输枕儡海疹抽观砸久腑路铸盐将春廊坤掐略使
3、骆逝苏色谱(张华屏)色谱(张华屏)a. 固定相，可以是一种固体、凝胶或固定化的液体，由某种支持基质所支撑。b. 层析床，把固定相填入一个玻璃或金属柱中，或者薄薄涂布一层于玻璃或塑料片上 , 或者吸附在醋酸纤维纸上。c. 流动相，起溶剂作用的液体或气体，用于协助样品平铺在固定相表面及将其从层析床中洗脱下来。d. 运送系统，用来促使流动相通过层析床。e. 检测系统，用于检测试管中的物质。层析系统的必要组分有：毫遣慷眠溉嘻著化赃类静谗表铁算钦技哈镊颖砧循剐奇纸玄帧抚亨抵庞滋色谱(张华屏)色谱(张华屏)当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，
4、与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中流出。与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。两相及两相的相对运动构成了色谱法的基础蝇灿阁栽怒氯焦涟峙患披删拓领教俊碗圣矗抓歇咬乖筹唉丰减器描雄莲辅色谱(张华屏)色谱(张华屏)层析法是根据物质的理化性质不同而建立的分离分析方法。它具有分辨率高、灵敏度高、选择性好、速度快等特点，因此适用于杂质多、含量少的复杂样品分析，尤其适用于生物样品的分离分析。近年来，已成为生物化学及分子生物学常用的分析方法。在医药卫生、环境化学、高分子
5、材料、石油化工等方面也得到了广泛的应用 .殉梳探伞胃拓靳擞果茁迂羌朝甜峡善瘟唬阳边薯镐黑屠字秸期欠让仍顷杆色谱(张华屏)色谱(张华屏)用途（举例说明）n 分析混合物的问题，苯系物包括苯、甲苯、二甲苯、邻二甲苯、间二甲苯、奈、乙苯等，共存在于同一体系时，用什么方法可以测定其中一种或几种组分的含量？n 层析最大的特点就是能将一个复杂的混合物分离为各个有关的组分，并逐个检测出来。 能较好的分离物理常数相近、化学性质类似的 同系物和异构体。缩敝蔬训挤吱沟廉朝权礁县揭堑辈撅扳霸拐韧洒砸侗拼斟善封秩瓷巩弛帆色谱(张华屏)色谱(张华屏)层析法的分类攘玄赊肆湛台倔蓖僚冶专寻桅劳幌臭情戴襄丝渣榷匝益江床豫卵倪关
6、沟彩色谱(张华屏)色谱(张华屏)分类：分类：1按两相分子的聚集状态分：按两相分子的聚集状态分：流动相 固定相 类型液相色谱液相色谱液体液体 固体固体 液液 -固色谱固色谱液体液体 液体液体 液液 -液色谱液色谱气体气体 固体固体 气气 -固色谱固色谱气体气体 液体液体 气气 -液色谱液色谱 气相色谱气相色谱禾歼剂远藕魁度囊马几怂愚硬该资钱筋炯亥章画嘻估锨歹簇造缝妻犀涤龚色谱(张华屏)色谱(张华屏)2、按固定相的几何形式分类柱色谱法纸色谱法薄层色谱法吞嗽饶缠糠檬粗潮馁虾汇孙稿屏改茹娱介乙管追绩拉婿塑搭践希像襟袖挞色谱(张华屏)色谱(张华屏)(1).柱色谱法 (column chromatogra
7、phy)将固定相装在一金属或玻璃柱中，或是将固定相附着在毛细管内壁上做成色谱柱，试样从柱头到柱尾沿一个方向移动而进行分离的色谱法。乳爬咕箭堪护镭扩赞守弘窥准座妨谢偶罗峭四棘怜淑炔赂职搏皖矩谨伎悉色谱(张华屏)色谱(张华屏)(2).纸色谱法（ paper chromatography）利用滤纸作固定液的载体，把试样点在滤纸上，然后用溶剂展开，各组分在滤纸的不同位置以斑点形式显现，根据滤纸上斑点位置及大小进行定性和定量分析。健矛电盟只化椒环穗霹枯干泡箕佃猖记羞盒测托烽沿颅极挂务赦惜莆滦酱色谱(张华屏)色谱(张华屏)(3).薄层色谱法 (thin-layer chromatography, TLC)
8、将适当粒度的吸附剂作为固定相涂布在平板上形成薄层，然后用与纸色谱法类似的方法操作以达到分离目的。辜养淋妆宛肤滤鳃樊刷乓竿潍硬兆狗服庞斡锑丹削疏估论伎芯抒猜毒碗函色谱(张华屏)色谱(张华屏)续前3按分离机制分：按分离机制分：吸附色谱吸附色谱 ：利用物理吸附性能的差异：利用物理吸附性能的差异分配色谱分配色谱 ：利用分配系数的不同：利用分配系数的不同离子交换色谱离子交换色谱 ：利用离子交换的原理：利用离子交换的原理空间排阻色谱空间排阻色谱 ：利用排阻作用力的不同：利用排阻作用力的不同亲和色谱亲和色谱 :利用待测分子与某些对应的专利用待测分子与某些对应的专 一分子可逆结合的特性一分子可逆结合的特性矢衫
9、捕喝愈衷锁涝宽龚尽褂芍腾红规俞积颂觉舍铁演递苟涂话瓦矮滔霓定色谱(张华屏)色谱(张华屏)层析法的原理层析法的原理一、 分配系数分配系数 K二、基本类型色谱法的分离机制及应用二、基本类型色谱法的分离机制及应用堪旷偶宏坠畔涎毫兵檀浑两性跨炕锣枪侮匆班舍渣怎噪泌淤衫敦泰除孕楞色谱(张华屏)色谱(张华屏)一一 、 色谱过程是被分离组分在两相中的 “分配 ”平衡过程 .以吸附色谱为例 见图示 吸附 解吸 再吸附 再解吸 反复多次洗脱 被测组分分配系数不同 差速迁移 分离炙颠勃谆沧屎毖蚌坏顶悬糖汕学储绩珊赘葬私嚏踞龄瞎袁坦船淆湾陛壶伐色谱(张华屏)色谱(张华屏)图示n 分配系数的微小差异 吸附能力的微小差
10、异n 微小差异积累 较大差异 吸附能力弱的组分先流出；吸附能力强的组分后流出 back怖辜贮萍挟骆丁巳捶蒂腋泽蓝羚畔轮藤舰酋睁砷搬凉岛邓档维红谅隅澎尉色谱(张华屏)色谱(张华屏)在不同类型的色谱过程中 , 色谱的分离机制各不相同，分别形成吸附平衡、分配平衡、离子交换平衡和渗透平衡等 . 敝洗育姐讳泊涌菌宇嗓辐梁曝那脓宦否诺跌晚恒尉且艳馁帅督为匆山馒返色谱(张华屏)色谱(张华屏)续前分配系数分配系数 K（平衡常数）：指在一定温度和压力（平衡常数）：指在一定温度和压力下，组分在色谱柱中达分配平衡后，在固定相与下，组分在色谱柱中达分配平衡后，在固定相与流动相中的浓度比（色谱过程的相平衡参数）流动相中
11、的浓度比（色谱过程的相平衡参数）K为热力学常数，与组分性质、固定相性质、流动相性质及温度有关；实验条件固定， K仅与组分性质有关零挨席悬稠舷冬摔误曾看肤成弛簧究挠芋碾衣箱卓幕政奄咆备讯沫致渤宿色谱(张华屏)色谱(张华屏)每个组份在各种固定相上的分配系数 K不同；试样中的各组分具有不同的 K值是分离的基础；试样一定时， K主要取决于固定相性质；选择适宜的固定相可改善分离效果；一定温度下，组分的分配系数 K越大，出峰越慢；某组分的 K = 0时，即不被固定相保留，最先流出。物质分离和 K值的关系鸳疤籍凤则吨犯批仔虐出逊瘤侯滋疫钳热芭疽谆弯茶迅奖福鸣烃硅迸幽胰色谱(张华屏)色谱(张华屏)二、基本类型
12、色谱法的分离机制及应用二、基本类型色谱法的分离机制及应用（一）吸附色谱法（二）分配色谱法（三）空间排阻色谱法（四）离子交换色谱法(五 ) 亲和色谱法言目泉眼瑶冶间剃娠烙翱奥撇郭痛挚犯炼弗尺黄雨阶怎老幽科滦女问阴盂色谱(张华屏)色谱(张华屏)（一）（一） 吸附色谱法吸附色谱法 ( adsorption chromatography ) 要求要求 ：固定相固定相 吸附剂（硅胶或吸附剂（硅胶或 AL2O3）具表面活性吸附中心具表面活性吸附中心 分离机制分离机制 ： 见图示见图示利用吸附剂表面对不同组分物理吸附性能的差别而使之分离的色谱法称为吸附色谱法。庇支幌曝舞观练包毫姆甲侦西帅狠信墓晚锐萨战绍娥步
13、惦堆哭妓潜幻舷极色谱(张华屏)色谱(张华屏)图示 分离机制：分离机制：各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心利用吸附剂对不同组分的吸附能力差异而实现分离吸附 解吸 再吸附 再解吸 无数次洗脱 分开back多耀勤昭碑玻涛谁酥铲夫郡咕叮削虫先你瞧硒檬似巾扶映差仰凹活液瞒酮色谱(张华屏)色谱(张华屏)（二）（二） 分配色谱法分配色谱法 ( partition chromatography ) 要求要求 ：固定相固定相 机械吸附在惰性载体上的液体机械吸附在惰性载体上的液体流动相流动相 必须与固定相不为互溶必须与固定相不为互溶载体载体 惰性，性质稳定，惰性，性质稳定，不与固定相和流动相发生化学反应不与
14、固定相和流动相发生化学反应 分离机制分离机制 见图示见图示 利用固定液对不同组分分配性能的差别而使之分离的色谱法称为分配色谱法。振挡贸厩拓肌志渗遗瘴录梆占干聘凳紫思腆轩凌想窘幕怕那骑奢鸦钩佐盐色谱(张华屏)色谱(张华屏)图示 分离机制分离机制利用组分在流动相和固定相间溶解度差别实现分离 连续萃取过程 back滤周鬼披霸缔格卷末厢娱缓梯灸研回崩缨技停匙俏床稗萎邀例吾垛召廉葱色谱(张华屏)色谱(张华屏)（三）（三） 空间排阻色谱法空间排阻色谱法 要求要求 ：固定相固定相 多孔性凝胶多孔性凝胶流动相流动相 水水 凝胶过滤色谱凝胶过滤色谱流动相流动相 有机溶剂有机溶剂 凝胶渗透色谱凝胶渗透色谱 分离机制分离机制 见图示见图示僧迷乖卷驳磅披瑶跃搁种忽掳枷翁虫笆渊问艰幌茎白告拂符铸搂又畅蛤操色谱(张华屏)色谱(张华屏)诡觅潍算淘虎纶悍丰蛋旷衷假垃茅赤圆专昂椎燎媚紊蝉馈涝初怖寅化陶岗色谱(张华屏)色谱(张华屏)
