1、医学微生物学实验五教案课程名称：医学微生物学实验实验内容：1. 其他微生物的形态观察 (阅片)自阅片：钩 体示教片：支原体菌落、梅毒螺旋体、沙眼衣原体包涵体、恙虫病立克次体2. 钩体显微凝集试验 (示教)3. 变形杆菌动力观察 (自做)授课对象：本科临床、口腔、麻醉、影像、急诊、五官、肿瘤；船本临床、麻醉等实验方式：讲授自做实验教材：一、实验目的与要求：1、熟悉钩端螺旋体、支原体菌落、梅毒螺旋体、沙眼衣原体包涵体、恙虫病立克次体形态与染色性；2、熟悉钩体的显微镜凝集实验原理及观察方法。二、实验内容及时间分配（分钟）：1讲 授 30 min2其他微生物的形态观察（阅片） 40 min自阅片：钩体
2、示教片：支原体菌落、梅毒螺旋体、沙眼衣原体包涵体、恙虫病立克次体3钩体显微镜凝集试验（示教） 20 min4变形杆菌动力观察 30 min5小结 10 min三、重点：钩体显微镜凝集实验原理四、思考题1、支原体与细菌 L 型的鉴别要点有哪些？2、原体与始体的区别。五、作业： 绘示教图1医学微生物学实验五讲稿一 、支原体：支原体(Mycoplasma)是一类没有细胞壁，呈高度多形态性，能通过 0.45um 滤菌器,胞膜富含固醇，含 DNA 与 RNA，呈二分裂繁殖的原核细胞型微生物；支原体是目前所知能在无生命培养基中繁殖的最小的原核细胞型微生物。支原体对营养物质的要求高于一般细菌，除 基 础 营
3、 养 物 质 外 还 需加入 10%20%人或动物血清以提供胆固醇与其它长链脂肪酸。大部分支原体繁殖速度比细菌慢，在合适环境中孵育，约 34h 繁殖一代，在琼脂含量较少的固体培养基上，27d 长出直径约 10600m 的典型的“ 荷包蛋样”菌落。低倍镜下观察菌落呈圆形，中心致密隆起，深入琼脂，外周由一 层 薄 的 透 明 颗粒包绕。支原体菌落，Diense 染色，100支原体有许多特性与细菌 L 型相似，如无细胞壁、呈多形性、能通过滤菌器、对低渗敏感、“油煎蛋”样菌落，但细菌 L 型在无抗生素等诱导因素作用下易返祖为原菌，支原体则在遗传上与细菌无关。二、衣原体衣原体：严格真核细胞内寄生(与螺旋
4、体区分开来)，具有独特发育周期(与立克次体区分开来)，并能通过细菌滤器(与细菌区分开来)。根据衣原体的抗原结构和 DNA 同源性的特点，衣原体科(Chlamydiae) 分为两个属：衣原体属和嗜衣原体属。衣原体属又分为 3 个种，即沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis) ，鼠衣原体和猪衣原体；嗜衣原体属又分为肺炎嗜衣原体(Chlamydophila pneumoniae)、鹦鹉热嗜衣原体(Chlamydophila psittaci)等多个种。2衣原体种类虽多，仅少数能致病，引起人类疾病的衣原体主要为：沙眼衣原体 (C. trachomatis, Ct)，肺炎嗜衣原体(C.
5、pneumoniae, Cpn)，鹦鹉热嗜衣原体 (C. psittaci, Cps)。衣原体的独特的发育周期在包涵体内完成。沙眼衣原体包涵体发育示意图沙眼衣原体包涵体 (眼结膜刮片，Giemsa 染色，1000)(眼结膜上皮细胞轮廓不清楚，眼结膜上皮细胞核边呈帽状的为衣原体包涵体)三、立克次体立克次体(rickettsia)是一类大小介于病毒和细菌之间、以节肢动物为传播媒介、严格细胞内寄生的原核细胞型微生物。立克次体是引起斑疹伤寒、恙虫病等传染病的病原体。对人类致病的立克次体主要包括 3 个属，即立克次体科的立克次体属（Rickettsia）和东方体属 (Orientia)以及无形体科的埃立
6、克体属(Ehrlichia)。大多数立克次体为专性细胞内寄生，以二分裂方式繁殖，生长速度缓慢。培养立克次体常用的方法有动物接种、鸡胚接种和细胞培养。鸡胚卵黄囊常用于立克次体的传代。恙虫病东方体(O.tsutsugamushi)是恙虫病的病原体。该病主要流行于东南亚、西南太平洋岛屿、日本和我国的东南与西南地区。姬姆萨染色：在胞质内近核旁成堆排列。3恙虫病立克次体 (感染小鼠腹腔液，Giemsa 染色，1000)四、螺旋体是一群细长、柔软、弯曲的呈螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物，介于细菌和原虫之间。与细菌相似，有细胞壁，二分裂繁殖。对人致病的有三个属：疏螺旋体属、密螺旋体属、钩端螺旋体属。（1
7、）梅毒螺旋体：为密螺旋体，菌体呈棕褐色，有 814 个致密而规则的螺旋，形似细密的弹簧。梅毒螺旋体 (肝组织切片，镀银染色，1000)（2）钩体：一端或两端弯曲呈钩状。菌体呈 C、 S 或 8 字等形状。镀银染色法菌体呈棕黄色。钩体 (纯培养物，镀银染色，1000)五、钩体显微镜凝集实验暗视野显微镜：暗视野显微镜是在普通显微镜上安装一个暗视野聚光器，此聚光器中央有一个黑色挡光板，光线不能直接进入镜筒，从而使光线改变途径，倾斜地照射在观察的标本上，标本遇光发生反射或散射，散射的光线投入物镜内，因而整个视4野是黑暗的。在暗视野中所观察到的是被检物体的衍射光图像，并非物体的本身，所以只能看到物体的存
8、在和运动，不能辨清物体的细微结构。【原 理】 用已知钩体抗原检测病人血清中的相应抗体，具有型特异性。抗原：包括当地流行的主要菌型，或我国标准的钩体菌株（活菌体）。实验方法：是将病人的血清倍比稀释，然后加入等量的钩体抗原，37 温育 2 小时，然后制成压滴，在暗视野显微镜下观察，若血清中有适量抗体，则钩体凝集成团如蜘蛛状，如果抗体浓度过高，则凝集又会被溶解（其具体机制尚不明确）。【意 义】1、临床诊断2、确定钩体的型别。钩体有 200 多个血清型且各型间无交叉反应人工自动免疫要含当地流行型别的多价死疫苗。3、流行病学调查。六、细菌的动力观察细菌动力的检查方法： 悬滴法 压滴法 半固体培养基穿刺接种法 暗视野显微镜法
