1、轮虫的培养,必需小型：作为鱼类的开口饵料； 形状简单，容易被破碎； 富有营养，容易消化； 不使水质恶化； 容易制备（培养）； 能适应养殖幼体的摄食生态条件。,一、动物性生物饵料必须具备的条件,轮虫的培养,第一节 生物饵料的应用概述,常见种类牡蛎担轮幼虫：受精卵 担轮幼虫:大约饵用13-14小时；藤壶无节幼虫、期：大约饵用3-4小时；轮虫：S、L、M型，有鳍鱼类开口饵料；卤虫：幼体和成体，商品化；枝角类：大部分淡水种；桡足类：海水种；糠虾、颤蚓、黄粉虫、沙蚕。个体大小：颤蚓、沙蚕、糠虾黄粉虫卤虫成体桡足类枝角类卤虫幼体轮虫牡蛎担轮幼虫和藤壶无节幼虫、期。,四、轮虫的概况,（一）轮虫特点生命力强，
2、繁殖快，营养丰富，大小适宜，易培养。（二）简史 1960年日本伊藤发现褶皱臂尾轮虫作为仔鱼饵料的价值，并进行大量培养技术的探索；1964年日本开始大量培养褶皱臂尾轮虫； 1965年Hirata and Mori发现面包酵母是轮虫的合适饵料；70年代广泛使用面包酵母；随后发现酵母轮虫缺乏鱼类必需的高度不饱和脂肪酸，造成仔鱼大量死亡。因此研究轮虫的营养强化技术；,我国60年代初，傅素宝等（1962）研究壶状臂尾轮虫；70-80年代，解承林、郑严、王育、何进金、何连金、张道南、陈世杰等研究褶皱臂尾轮虫； 90年代，研究轮虫品系的选育，如大轮虫品系、小轮虫品系（中国科学院海洋研究所）和低温轮虫品系（1
3、5，张学武）；至今，褶皱臂尾轮虫已经成为一种极为重要的生物饵料，在世界范围内广泛培养和应用。,（三）应用情况在60种海洋有鳍鱼类和18种甲壳动物幼体的培育中应用。 （四）存在问题探明轮虫两性繁殖的机制；开发轮虫高密度培养系统；选育、引进优良的轮虫品系；如：100um小轮虫和500-1000um大轮虫；探讨室外土池稳定生产轮虫的技术措施；进一步探讨轮虫培养过程中增殖率突然下降的原因和机制。,第二节 轮虫生物学一、分类欧美国家：袋形动物门，轮虫纲、真轮毛虫亚纲、 单生殖巢上目、臂尾 轮虫 目、臂尾轮虫科，臂尾轮虫属。我国分为：轮虫门，单生殖巢纲，游泳目，臂尾 轮虫科，臂尾轮虫属。,培养种类：,褶皱
4、臂尾轮虫（Brachionus plicatilis)L型 圆型臂尾轮虫（Brachionus rotundiformis）-S型 壶状臂尾轮虫（B. bennini） 萼花臂尾轮虫（B. calyciflorus） 钩状狭甲轮虫（ Colurella uncinata）：小型。,二、形态特点轮虫的三大特征轮 盘：摄食、运动；咀嚼器：磨碎食物；原肾管：肾的雏形，内有焰细胞。雌雄异体、异形 雌性：常见，大小196-250150-202um，结构完整；雄性：少见，个体小：80-130um，结构简单，只有轮盘、精巢和阴茎，不摄食；只在不良环境下看见出现，游泳快，只为了交配。,1、外部结构 被甲：透明
5、、前缘有片状棘（背面6个、腹面4个）； 轮盘部：由棒状突、纤毛环（打动水流）和触毛（感觉作用）组成； 足部：足趾、足腺；与头部均能缩进。2、内部结构 消化系统：口（漏斗状） 口腔 咀嚼器 食道（短）胃（大，消化腺1对） 肠 泄殖腔 肛门 排泄系统：原肾管（焰细胞） 膀胱 泄殖腔,呼吸：靠纤毛打动的水流通过体壁进行气体交换。神经：脑（咽上N节）和咽下N节 各器官。另外：眼点（红色）、背触手和侧触手（刺毛为 应激反应）。生殖系统： 雌体：卵巢（卵黄腺） 输卵管 泄殖腔 肛门。 雄体：发达的精巢和阴茎，遇到雌性就交配。,三种臂尾轮虫的区别, 被甲前端 被甲后端 被甲后 被甲形状 被甲长（ ）棘刺 （
6、对） 棘刺 （对） 端开口 萼花臂 2 1 园钝形 椭圆形 300-350 尾轮虫壶状臂 3 0 园钝形 宽钝形 190-240 尾轮虫褶皱臂 3 0 腹面三角形 椭圆形 S： 80-180 尾轮虫 背面正方形 L：196-250,褶皱臂尾轮虫 Brachionus plicatilis,萼花臂尾轮虫 B. calyciflorus,壶状臂尾轮虫 Brachionus urceus,龟甲轮虫 Keratella,矩形龟甲轮虫,螺形龟甲轮虫,水轮虫Epiphanes,疣毛轮虫 Synchaeta,旋轮虫 Philodina,晶囊轮虫 Asplanchna,三、轮虫的变异水温变化、饵料质量和培养密
7、度等是引起轮虫形态和大小变化的主要原因。,S型轮虫（ B. rotundiformis ）：100-190um，适合较高水温下培养；有两个亚种，SS型（高盐）、 SM型（低盐）。 L型轮虫（ B. plicatilis ）：140-290um，适合较低水温下培养的，广盐性种类。,四、生殖习性单性生殖 即孤雌生殖，某些水生动物在适宜的环境条件下， 雌性个体产生的卵无需受精直接发育成雌性小个 体，如轮虫、枝角类，卤虫等。 在良好环境下：冬卵 （非混交）雌性夏卵（无需受精，挂在足 基部）雌性小个体。褶皱臂尾轮虫大约4h产卵1次，21个卵/雌，持续时间6.7d。,有性生殖 即混交生殖，不混交雌体产生混
8、交雌体，混交雌 体经过减数分裂产生单倍体混交卵（需精卵）。 若混交雌体在年轻时不与雄体交配，不论以后有 无交配混交卵均不受精，发育为单倍体的雄体； 若混交雌体交配了，混交卵受精，精和卵结合为 双倍体的受精卵，再形成壳厚的休眠卵。 在不良环境下，如饥饿、缺氧、密度过高、种 群本身产生化学物质累积和生态环境（水温、盐 度、PH等)突变等，非需精卵混交雌体混交卵 休眠卵（冬卵）。,夏卵 非需精卵，壳薄而 光滑，卵形，个体小；长 56-130，宽48-96 ，挂在 母体上，2-14个。 冬卵（休眠卵） 需精卵 受精 冬卵。 壳厚，个体大，弓形，卵 一端有较大空隙，卵黄呈 橘红色长约130，宽88， 不
9、挂卵。,生活史,诱发两性生殖的因子（1）外源性因素生育酚：维生素E直接作用于胚胎发育后期而诱发混交雌 体的形成；种群密度：种群密度的控制；食物：食物的组成、丰度和成分对混交雌体的形成具有诱发作用；,温度：温度高（30）或低（25）混交雌体的比例增大；盐度：在褶皱臂尾轮虫培养中，盐度35，无产生混交生殖，盐度为2和30，有低水平的混交生殖，盐度4-20，有高的混交 生殖；pH：较高的pH（8.5）产生的混交生殖越多。,（2）外源性因素遗传因子：与不同的品系有关；母体的年龄：年龄与混交雌体的比例成负相关；孤雌生殖的累积时代数：时代数的积累对混交雌体的产生具有诱导作用。影响休眠卵形成效率的因素遗传因
10、素、温度、食物种类和浓度、培养液的盐度、 pH值等。,五、培养环境 温度：适宜2535，低于5不能存活，高于40死亡， 繁殖临界点10和40。S型：高温下（ 30）繁殖快，个体小； L型：低温下（20-25 ）繁殖快，个体大。 盐度：广盐性，250，适宜1030，最适15-25（海水稀 释培养）； S型：在盐度15-25下，含n-3HUFA最高； L型：在盐度30下，含n-3HUFA最高。 轮虫对盐度突变适应能力差。低盐培养的轮虫投喂时要进行24小时驯化（20 40）,光照：间接影响。对藻类和光合细菌有利，且抑制原生动物生长。研究认为：适宜440010000lx。pH： 6-9范围内无不良影响
11、，适宜7.58.1。溶解氧：保持1.5mg/l以上，耐低氧能力强。L型轮虫缺 氧状态下，经6h有半数存活。0.9mg/L时，生殖率开始下降。 直接影响：轮虫增殖、活力。 间接影响：共存微生物的生物相；投喂酵母时，溶氧保2mg/l时，细菌生长良好，产生足够VB12供轮虫 增殖用；高溶氧则影响细菌生长。,非离子氨（游离氨）：不超过1mg/L， （一般鱼类的安全值为0.025mg/L）可容纳6-10mg/LNH3+ NH4+ 。氨氮 NH3+H2O NH4+ + OH-蛋白质分解 尸体、残铒、粪便 种群密度：（1）密度大：怀卵量少，繁殖慢；（2）密度小：怀卵量多，繁殖快。 间疏采收：轮虫达到一定密度
12、时（200个/ml），繁 殖力下降，必需稀疏密度，才能正常生长。,悬浊物：主要由细菌、粪便、残饵构成；量多时 影响收获作业，并可能把病源性细菌带入饲育池； 可用过滤网垂放于培养槽去除悬浊物。 细菌 细菌相：弧菌属（ Vibrio ）、不动杆菌属 （ Acinetobacter）、假单胞菌属（Pseudomonas） 占 优势时，增殖快。色素生产菌，如黄杆菌属 （Flavobacterium）和解藻朊酸弧菌（Vibrio alginolyticus ）占优势时，增殖受阻碍。可添加有益 菌保持轮虫培养的稳定性。 维生素V12生产菌：对轮虫增殖有明显的促进作用。,原生动物及其他大型生物 原生动物 鞭
13、毛虫（滴虫 Monas和波豆虫Bodo） 纤毛虫（游仆虫Euplotes 和尾丝虫Uronema） 原生动物的增加，一方面消耗有益轮虫增殖的细菌， 另方面又与轮虫竞争生存空间，对轮虫的增殖非常 不利。 太阳虫（Oxnerella maritima）：分泌毒物刺杀轮虫。 其他大型生物 桡足类、卤虫：捕食轮虫，粪便堵塞收获网目并带入培育池粘附在仔鱼身上。,轮虫培养槽中食物链关系图,六、轮虫培养的饵料,食性：滤食性，靠轮盘部的纤毛打动水流。 饵料大小：5-25 m，15 m以下较适合。上限由食道直径决定，下限由咀嚼器 大小决定。 饵料种类：细菌、酵母、微藻、小型原生动物、有机碎屑、微生物团絮、微颗粒
14、饲料等。,七、生长与繁殖生长重1-3 ug/只。 夏卵（挂在雌性足基部） 小轮虫 成虫（生物学最小型 ）产卵期 死亡。个体发育（席贻龙、黄祥飞） 胚胎发育期：卵产出-幼体孵出。 生殖前期：幼体孵出-产出第一个卵。 生殖期：产卵期间（第一个-最后一个）。 生殖后期：最后一个卵产出-死亡。,0.52d,3d,4-5d,生殖量几-10多个/次，一般为2-4个/次，周期4-5天，雌性一生平均产卵21个。寿命7-10天。与水温成反比；环境好时，寿命长。,第三节 轮虫的分离和培养,一、种源 分离：水温15时出现，用250-300目的浮游生物网捞取，用眼或在解剖镜下吸出。 休眠卵孵化 产品：600美元/克；
15、 原培养轮虫池排掉旧水（留10-20cm），纳入新水和微藻，池底休眠卵即可孵化。 索取或购买科研、教学、生产单位的轮虫种。,二、培养方式 一次性培养（batch culture）：水体在10m3以内，先培养藻类接种投喂达到一定密度一次性收集，需4-7天。S型轮虫（高水温、高密度、高给饵率）半连续培养（semi- continuous culture ）间收培养，水体10-40m3，藻类培养接种投喂间疏采收（虹吸法）注入藻液。每天采收，15-30天移池。L型轮虫（低水温、低密度、低给饵率）,连续培养（continuous culture）：室内封闭性高密度培养系统；主要进行残饵、粪便、尸体等有机
16、物的处理 。,连续培养装置的特点 持续注水、持续收获、持续给饵。注水量=收获量 防止有害生物的侵入，防止水质恶化。 生产量（日本）S型轮虫：30-40亿/m3/日。,轮虫一级培养,轮虫二级培养,轮虫三级培养,三、大量培养 1、培养容器 一次性培养：10m3，玻璃钢槽、小型水泥池等。半连续培养：40-50m3，大型水泥池。2、培养用水 砂滤加300目网过滤水，刚接种用水一定要消毒（漂 白粉浓度要低：20-30ppm，曝气时间要长：2天）。,3、接种 一次性培养：先培养微藻，接种密度为0.1-0.5 个/ml；7-10天采收；如投喂酵母， 接种密度为14-70个/ml； 半连续培养：接种密度为30
17、-50个/ml。如种不足， 接种水位可低些，要保证 接种密度。 接种密度过低（数个/ ml），残饵过多，易引起原生动物大量增殖，轮虫培养失败。,4、投饵 微藻类： 优点：营养好，水质好；以绿藻为最优，金藻次之 ； 缺点：需要培养池，培养密度低 （40-60个/ml）。培养设施不足时，国外采用补充浓缩小球藻 （自浓缩或商品）。 投喂量：小球藻100-500万细胞/ ml；扁藻2.5-5细胞/ ml 酵母类：主要是面包酵母 优点：供应稳定，投喂简便，生长快，培养密度可达400-600个/ml； 缺点：水质易污染，单独投喂，刚接种时培养较难；酵母轮虫缺少高度不饱和脂肪酸 。,投喂量： 5-8次/日为
18、好A、水温在20以下，投喂量是50g/亿.日；B、水温在25以上，投喂量是100g/亿.日。 投喂方法称重后放150-200目筛绢袋中，浸泡几分钟后利用手搓滤，或采用搅拌机匀浆后，均匀泼洒池中，由于面包酵母不耐盐，应采取多次投喂。可用定时水泵进行投喂。,混合投喂用微藻（30%-50%）和面包酵母（50%-70%）混合投喂是一种规范化的投喂技术。 A、微藻类：在轮虫收集后，以加水形式加入一部分微藻,作为一次投喂；B、面包酵母：50-70g/亿.日，分4-7次投喂。,5、轮虫计数吸管法：校正一支1毫升吸管(利用移液管移1毫升水于一小烧杯中,用吸管全吸取,利用玻璃刀或胶布作液面记号)；先数1毫升有几
19、滴；利用小烧杯在充气周围取样，在单凹玻片上利用肉眼数5-10滴或全数。几滴/毫升n个/滴（平均）；浮游生物计数框法：利用0.1ml、0.5ml、1ml浮游生物计数框，在解剖镜或显微镜下观察。,6、日常管理观察轮虫的摄食状况、活力，维持准确的投喂量；观察轮虫生长情况：数量变化、肥壮、怀卵量；注意水质变化：吸底检查，尸体、残饵、有机物厚度和原生动物数量，判断水质好坏，是否换水或移池。培养小球藻中加VB12 （0.5mg/L）等，使轮虫增殖稳定。,7、收获一次性培养：100-200个/ml，高时达400-600 个/ml；半连续培养：200-300个/ml, 每次采收10-20%。收集方法：虹吸：自
20、吸或水泵抽，250-300目网收集 ； 光诱；网捞。,轮虫的人工收集,8、轮虫的营养强化技术用海水微绿藻（小球藻、微绿球藻、球等鞭金藻）进行二次强化培养2-6小时以上；用生鸡蛋黄和水乳化鱼肝油，强化6-12小时上；投喂含n-3HUFA的油脂酵母；使用各种商品强化剂进行营养强化。,四、土池大面积培养1、建池：面积1-2亩（池太大不好管理），水深1-1.2米，泥或泥沙底；靠近淡水源，可调节比重。 2、清池：彻底消除淤泥：抽掉污泥或晒干后利用推土机推掉。消毒A、漂白粉：60ppm，氯0.15-0.2ppm，药效3-5天；B、石灰：200ppm，药效7-10天；C、氨水：15-17%，250ppm，杀
21、死动物，培养藻类。药效2-3天；D、茶饼：50kg/亩。泡1天后用，杀死动物，培养藻类。药效1个月。,3、纳水：30-50cm轮虫养殖：滤网250-300目；鱼虾养殖：滤网60-80目，使动物及卵进不来。 4、施肥：培养水色。选择好天气，上午8-10点施肥。有机肥：鸡粪（100-150kg/亩）或猪粪（200-300kg /亩）；发酵：100kg（湿）+5kg石灰混合后盖上塑料薄 膜发酵7-10天。无机肥：尿素（2kg/亩）+过磷酸钙（0.5kg/亩），或复合肥（2kg/亩）+尿素（0.5-1kg/亩）。 5、接种：待有一定水色后，接种0.5-1个/ml，带水抽入。,6、日常管理维持水色：是否
22、要追肥；调节比重：加淡水调节盐度18；防止水质恶化：换水。 7、收获超过20个/ml，维持5-20个/ml。拖网收集：250目大网；置一小网箱于池中，利用抽水泵不断抽入小网箱 中收集；趋光收集。,五、轮虫的运输,轮虫的选择 要求活力好，病弱的轮虫不宜采用。 高溶氧低温海水的准备 70%海水+30%海水冰（WT：0-5；DO：200%以上） 轮虫的收获 收获好的轮虫暂放于塑料桶内（10亿个体/10升，冲气）。 轮虫的冲洗 用40-60目筛绢过滤去除杂物，尽量冲洗干净，可使用8-20 的海水。 轮虫的冷却 用海水再冲洗数回，然后移入装有高溶氧低温海水的塑料 桶内（10亿个体/6-8升） 装袋：用塑料袋打包，并添加适量（20ml）的微藻，然后 用泡沫箱装运。,六、休眠卵的采收与保藏1、刺激产生休眠卵的方法高密度+饥饿；突然改变盐度和温度。 2、休眠卵的分离糖盐高渗液：饱和食盐水+20%的蔗糖。 3、保藏置5冰箱，可保存1-2年，最长8年。,作业：,1、轮虫产生休眠卵所需条件。 2、用半连续培养方式叙述轮虫获得高产、稳产的措施。 3、轮虫大面积培养的技术。,2、用半连续培养方式叙述轮虫获得高产、稳产的措施。 答： 一、种源 二、小型培养 三、大量培养 1、池子与消毒 2、接种与投饵 3、日常管理与采收 4、提供适宜的生态条件 5、酵母轮虫的营养强化 6、病害防治,
