1、-淀粉酶活力检测操作规程1 酶活定义1g 固体酶粉（或 1mL 液体酶） ，于 60、pH=6.0 条件下，1h 液化 1g 可溶性淀粉，即为 1 个酶活力单位，以 u/g(u/mL)表示。2 原理在一定温度和 PH 值条件下，-淀粉酶将淀粉分子链中的 -1，4 葡萄糖苷键随机切断成长短不一的短链糊精、少量麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对碘呈篮色的特异性反应逐渐消失，呈红棕色，其颜色消失的速度与酶活力有关，故可通过固定反应后的吸光度计算其酶活力。3 仪器和设备3.1 分析天平：感量 0.0001g3.2 精密 pH 计：精确至 0.013.3 分光光度计：应符合 GB9721 有关规定3.4 电热恒
2、温水浴锅：30100，0.23.5 计时器：每小时误差不超过 5 秒4 试剂与溶液4.1 原碘液：称取碘（I 2）11g、碘化钾（KI）22g，用少量水使碘完全溶解，然后定容至500mL，贮于棕色瓶中。4.2 稀碘液：吸取原碘液 2.00ml，加碘化钾 20g，用水溶解并定容至 500mL，贮于棕色瓶中。4.3 20g/L 可溶性淀粉溶液： 称取可溶性淀粉 2.000g，精确至 0.001g，用水调成浆状物，在搅动下缓缓倾入 70mL 沸水中，然后，以 30ml 水分几次冲洗装淀粉的烧杯，洗液并入其中，加热至完全透明，冷却，定容至 100mL。此溶液需要当天配置。4.4 磷酸缓冲液（pH=6.
3、0） 称取磷酸氢二钠（Na 2PO412H2O）45.03g、柠檬酸（C 6H8O7H2O）8.07g，使水溶解并定容至 1000mL。配好后用 pH 计校正。5 分析步骤5.1 待测酶液的制备：称取酶粉 1 g，精确至 0.0002g（或吸取液体酶 1.00mlL） ，先用少量的磷酸缓冲液溶解，并用玻璃棒捣研，将上请液小心倾入容量瓶，沉渣部分在加入少量缓冲液，如此捣研 34 次，最后全部移入 100mL 容量瓶中，用缓冲液定容到刻度（将估计酶活力除以 4，即酶活理应在 3.75.6u/mL 范围内） ，摇匀，通过 4 层纱布过滤，滤液供测定用。5.2 测定：5.2.1 吸取可溶性淀粉溶液 2
4、0.0mL 于试管中，加入缓冲液 5.00mL，摇匀后，于（600.2）的恒温水浴中预热 5min。5.2.2 加入稀释好的待测酶液 1.00mL，立刻记时，摇匀，准确反应 5min。5.2.3 立即吸取反应液 1.00mL 于稀碘液 5.00ml 中，摇匀，并以稀碘液做空白，于 660nm波长下，用 10mm 比色皿，迅速测定其吸光度。根据吸光度查附表 1，求得测试酶液的浓度。6 计算样品酶活力（u/g 或 u/mL）= cn式中： c 表示测试酶液的浓度（u/mL）n 表示样品的稀释倍数 7 结果的允许差平行实验相对误差不得超过 2%。附表 1 吸光度与测试 -淀粉酶酶浓度对照表吸光值 酶
5、浓度(u/ml) 吸光值 酶浓度(u/ml) 吸光值 酶浓度(u/ml) 吸光值 酶浓度(u/ml)0.100 4.694 0.140 4.492 0.180 4.301 0.220 4.1320.101 4.689 0.141 4.487 0.181 4.297 0.221 4.1280.102 4.684 0.142 4.482 0.182 4.292 0.222 4.1240.103 4.679 0.143 4.477 0.183 4.288 0.223 4.1200.104 4.674 0.144 4.472 0.184 4.283 0.224 4.1160.105 4.669 0.1
6、45 4.467 0.185 4.279 0.225 4.1120.106 4.664 0.146 4.462 0.186 4.275 0.226 4.1080.107 4.659 0.147 4.457 0.187 4.270 0.227 4.1050.108 4.654 0.148 4.452 0.188 4.266 0.228 4.1010.109 4.649 0.149 4.447 0.189 4.261 0.229 4.0970.110 4.644 0.150 4.442 0.190 4.257 0.230 4.0930.111 4.639 0.151 4.438 0.191 4.2
7、53 0.231 4.0890.112 4.634 0.152 4.433 0.192 4.248 0.232 4.0850.113 4.629 0.153 4.428 0.193 4.244 0.233 4.0820.114 4.624 0.154 4.423 0.194 4.240 0.234 4.0780.115 4.619 0.155 4.418 0.195 4.235 0.235 4.0740.116 4.614 0.156 4.413 0.196 4.231 0.236 4.0700.117 4.609 0.157 4.408 0.197 4.227 0.237 4.0670.11
8、8 4.604 0.158 4.404 0.198 4.222 0.238 4.0630.119 4.599 0.159 4.399 0.199 4.218 0.239 4.0590.120 4.594 0.160 4.394 0.200 4.214 0.240 4.0560.121 4.589 0.161 4.389 0.201 4.210 0.241 4.0520.122 4.584 0.162 4.385 0.202 4.205 0.242 4.0480.123 4.579 0.163 4.38 0.203 4.201 0.243 4.0450.124 4.574 0.164 4.375
9、 0.204 4.197 0.244 4.0410.125 4.569 0.165 4.370 0.205 4.193 0.245 4.0370.126 4.564 0.166 4.366 0.206 4.189 0.246 4.0340.127 4.559 0.167 4.361 0.207 4.185 0.247 4.0300.128 4.554 0.168 4.356 0.208 4.181 0.248 4.0260.129 4.549 0.169 4.352 0.209 4.176 0.249 4.0230.130 4.544 0.170 4.347 0.210 4.172 0.250
10、 4.0190.131 4.539 0.171 4.342 0.211 4.168 0.251 4.0160.132 4.534 0.172 4.338 0.212 4.146 0.252 4.0120.133 4.529 0.173 4.333 0.213 4.160 0.253 4.0090.134 4.524 0.174 4.329 0.214 4.156 0.254 4.0050.135 4.518 0.175 4.324 0.215 4.152 0.255 4.0020.136 4.513 0.176 4.319 0.216 4.148 0.256 3.9980.137 4.507
11、0.177 4.315 0.217 4.144 0.257 3.9950.138 4.502 0.178 4.310 0.218 4.140 0.258 3.9910.139 4.497 0.179 4.306 0.219 4.136 0.259 3.988吸光值 酶浓度 u/ml 吸光值 酶浓度 u/ml 吸光值 酶浓度 u/ml 吸光值 酶浓度 u/ml0.260 3.984 0.300 3.869 0.34 3.750 0.38 3.6390.261 3.981 0.301 3.866 0.341 3.747 0.381 3.6340.262 3.978 0.302 3.863 0.34
12、2 3.744 0.382 3.6320.263 3.974 0.303 3.860 0.343 3.741 0.383 3.6290.264 3.971 0.304 3.857 0.344 3.739 0.384 3.6260.265 3.968 0.305 3.854 0.345 3.736 0.385 3.6230.266 3.964 0.306 3.851 0.346 3.733 0.386 3.6210.267 3.961 0.307 3.848 0.347 3.730 0.387 3.6180.268 3.958 0.308 3.845 0.348 3.727 0.388 3.61
13、50.269 3.954 0.309 3.842 0.349 3724 0.389 3.6120.270 3.951 0.310 3.839 0.350 3.721 0.390 3.610.271 3.948 0.311 3.836 0.351 3.718 0.391 3.6070.272 3.944 0.312 3.833 0.352 3.716 0.392 3.6040.273 3.941 0.313 3.830 0.353 3.713 0.393 3.6020.274 3.938 0.314 3.827 0.354 3.710 0.394 3.5990.275 3.935 0.315 3
14、.824 0.355 3.707 0.395 3.5960.276 3.932 0.316 3.821 0.356 3.704 0.396 3.5940.277 3.928 0.317 3.818 0.357 3.701 0.397 3.5910.278 3.925 0.318 3.815 0.358 3.699 0.398 3.5880.279 3.922 0.319 3.812 0.359 3.696 0.399 3.5850.280 3.919 0.320 3.809 0.360 3.693 0.40 3.5830.281 3.915 0.321 3.806 0.361 3.690 0.
15、401 3.580.282 3.913 0.322 3.803 0.362 3.687 0.402 3.5770.283 3.922 0.323 3.800 0.363 3.684 0.403 3.5750.284 3.919 0.324 3.797 0.364 3.682 0.404 3.5720.285 3.915 0.325 3.794 0.365 3.679 0.405 3.5690.286 3.912 0.326 3.791 0.366 3.676 0.406 3.5670.287 3.909 0.327 3.788 0.367 3.673 0.407 3.5640.288 3.90
16、6 0.328 3.785 0.368 3.670 0.408 3.5590.289 3.903 0.329 3.782 0.369 3.668 0.409 3.5560.290 3.900 0.330 3.779 0.370 3.665 0.410 3.5540.291 3.897 0.331 3.776 0.371 3.662 0.411 3.5510.292 3.894 0.332 3.774 0.372 3.659 0.412 3.5480.293 3.891 0.333 3.771 0.373 3.656 0.413 3.5460.294 3.888 0.334 3.768 0.374 3.654 0.414 3.5430.295 3.885 0.335 3.765 0.375 3.651 0.415 3.5410.296 3.881 0.336 3.762 0.376 3.648 0.416 3.5380.297 3.878 0.337 3.759 0.377 3.645 0.417 3.5350.298 3.875 0.338 3.756 0.378 3.643 0.418 3.5330.299 3.872 0.339 3.753 0.379 3.640 0.419 3.530
