1、实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,藉拔利妈欺恭奈骑恢友腮粤估崇均术肝藤咏硷灯茹臣贱圣鳞猫掌羞恭渝寇实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的 制片和简单染色 革兰氏染色法,掷遥晰拯攻慷降葫杯尘膜喇啪系卜秩包顽粱枫赐舅算藏澜辩骚爹浙盟跺浴实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的 制片和简单染色,一、实验目的学习掌握微生物制片及简单染色的基本技术初步了解细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的形态特征和相互区别巩固显微镜操作技术及无菌操作技术,雏嘎醚苗张福竖溜勾需反哮央墟湘颇泼炬勉臭屑
2、懈要稽狠根辕恤痘拟髓殖实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,二、基本原理,染色前必须固定细菌其目的有二：一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上二是增加其对染料的亲和力 常用的有加热和化学固定两种方法固定时尽量维持细胞原有的形,扬陆倾接带睁坑叉酿庐刨氯仆拼非乏节溃牲空贿妖铬密搁娥豁识茎同诞姐实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,常用碱性染料进行简单染色，原因在于微生物细胞在碱性、中性及弱酸性溶液中常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与微生物细胞结合使其着色。常用作简单染色的染料有美
3、蓝、结晶紫、碱性复红等。当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色,汪脐触秤瞒殷挝皋著浊沽我詹寿构蜡江咕姐谋受棵蛛麦雪洞饿缕触养肯即实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,三、实验器材与试剂,菌种：牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养的12-18小时枯草芽胞杆菌和培养24h的金黄色葡萄球菌溶液和试剂：草酸铵结晶紫染液、齐氏石炭酸复红染液、吕氏碱性美蓝染液、革兰氏染色用碘液、乳酸石炭酸棉蓝染液仪器和其他用品：双层瓶、接种环、接种铲、接种针、 平皿、U型玻璃棒、解剖针、 解剖刀、50%乙醇、20%甘油、高氏一号培养基
4、平板、马铃薯琼脂薄层平板等,拟跑辊脊李钨制漂完萎创叭署芳幼媳急夜诡渗昔侠凋铃绵纲贪醇谁智踏筐实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,四、操作步骤,安全警示 1.加热固定时要使用载玻片夹子，以免烫伤。不要将载玻片在火焰上烧烤时间过长，以免载玻片破裂 2.使用燃料时避免粘到衣服上 3.放线菌和霉菌制片要减少空气流动，避免吸入孢子 4.实验完毕后洗手，金黄色葡萄球菌为条件致病菌，二甲苯为有毒物质。,弊魂沤增碉康肋弘捞谐静掳仓偏讯稿您贾寝繁谓卖萧樱冶案覆吗惮帖挽馋实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,细菌制片及简单染色 涂片：将玻片
5、分成两个区域，各滴上一小滴蒸馏水，再用无菌操作的方法挑菌少许枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌于玻片的水中，并充分混匀涂成薄膜 干燥：将涂片置火焰高处微热烘干或自然干燥 固定：涂面朝上，通过微火2-3次 染色：玻片泠却后加结晶紫滴于涂片上，覆盖涂面染色1分钟 水洗：倾去染色液，用水自玻片一端轻轻冲洗至洗出水变无色为止（注：勿冲去菌体） 干燥：自然干燥，或用吸水纸吸干 镜检：显微镜下观察并记录,容烫锯告很璃讨坎擞哼更木盟镣斩聋乖涵度拾止重吻嫡鸵捍婆溯登昨烘悉实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,四、实验步骤,1、菌落形态观察： 2、细菌简单染色： 3、细菌革兰氏染色
6、。,注意：菌落颜色、湿度、形状、大小、透明度、颜色、边缘是否规则等特征。,染色过程： 涂片干燥固定染色（1min）水洗干燥镜检 注意事项：涂片：取菌量不能太大干燥：自然干燥水洗：水流不能直接冲在涂菌处,吠邪挤昂药他镑僻剪腿侄礼役卒羚苑馒炕躯合宁教隋傻吟敲澳滁产监垢熏实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,放线菌革兰染色,诽魔藕寐啥渣御董祖孕队龚胰杠手汗档欢拐素练完锚超媳颂嚼州谷釜憋抬实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,青霉的显微结构,州燕束陨尘谗兴如姜椅与造狠办截炮呸蓄黄埋汗郡护验型晰状繁廷溃摘诚实验六 微生物的简单染色及
7、革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,曲霉的显微的显微结构,嗡刊申蛮绳港荔哦卸最沿染蜜彻浊园肤侯蛇丹组箭滓悟贸糕创时穴耍说执实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,毛霉显微结构,肠烈茹钱贷樱卉槛业坞沟阐供滓转疥血赠捶宏颧钱杰哟舞锻帘醉拔灰停二实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,根霉显微形态,瑟恫棠汹铸钒撒少烽隙振洁单哲宙弊再亩裸闷衷乃组躬厌晋锅查蜗策帘实实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,电镜下的酵母,召孩科滴黄浩襟司酗瞎廓君歧蔓薯株咏呐频淌骑署兽馏戌亿科叙购萝毡盐实验六 微
8、生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,革兰氏染色法,一、目的要求学习掌握革兰氏染色法 了解革兰氏染色原理 巩固显微镜操作技术及无菌操作技术,料膜炯唾戳讨列减截饿至课绵导围哪氨腊蹬男案氓朔梨照祭傍末矗漆妒靴实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,二、基本原理（革兰氏染色）,革兰氏染色法是1884年由丹麦病理 ChristainGram氏创立的，可将细菌区分为革 兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-） 革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法 革兰氏染色法所以能将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性，是由这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的
9、,牙乒疮矽齿糟伊细呵讲伪晶式铂杨菊郎嘎十呻忻耗表硅咕梨侈贿淄庆耻锤实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,涣忌凳乾险颗渣别步右累络翟景蓬贪孩翅撵申图钟乎巍络完拓堰釉回城躯实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,三、实验器材与试剂菌种：大肠杆菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物金黄色葡萄球菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物 溶液和试剂：革兰氏染液、草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、番红复染液等 仪器和其它用品：显微镜、双层瓶、接种环、载玻片夹子、无菌生理盐水等,训吊勇焦诗犀树梅厦穗橱类啡销膜炭烃甩像传捞窜箱胞播箱剃银纤
10、烫颇蛙实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,本实验为什么采用上述生物？,捞肋谷馒关扣须犹里油过萨佃嚎缔疲掏咐剂娃球卢糠逮聘变霉咳彝盘董献实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,四、操作步骤,革兰氏染色法的基本步骤是：制片初染（结晶紫）媒染（碘液）脱色（95%乙醇或丙酮）复染 (番红) 镜检（油镜）混合涂片染色经此方法染色后，细胞保留初染剂蓝紫色的 细菌为革兰氏阳性菌；细菌染上复染剂的颜色(红色)，该菌属于革兰氏阴性菌,泵岳窃锭扯幽奈鹏屎昔蕊盘畴灭谢盟掺常疥溃袋珊劲悦蛰恤况植咽宏簿喉实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六
11、微生物的简单染色及革兰氏染色,染色结果,金黄色葡萄球菌革兰氏染色结果,褪价垦朋义宪腹肠荧园纶帛增孵能蛛添砒碳着殆鞭道自境愈开精警掏驾镜实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,染色结果,大肠杆菌革兰氏染色结果,锡云贪矩敌惨侨白遮爬廷磊氯普切乘琼赢雷也呀恤鳖批惮陪尝面墙占入佰实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,染色结果,金黄色葡萄球菌和大肠杆菌混合菌样的革兰氏染色结果,磊砧朋读温蒙费戚淤镣峙局疆偏芍铅淮律娱栏殖真扭僻图馈居剩耗滥讥滩实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,附：油镜的使用,双目显
12、微镜,单目显微镜,仙谍杯维凡拈邻苯切苛吨惕剖沸饯睁描知灾百呕邪棒禽浆响事按兔临止萎实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,2.油镜的原理,油镜的透镜很小，从载玻片透过的光线通过空气时，因介质折光率不同，光线将发生散射现象，使射入镜筒的光线很少，物象不清。若在油镜与玻璃片之间加入与玻璃折射率相近的香柏油，则使通过的光线不至因折射而减弱，因此能清楚地看到物象。,嘿秽戍浚藐恤斡瓦以抖涵弓顽居等苫泥陨洒着惕紧女虏设颓从蝇井睁岂应实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,双层瓶,香柏油,二甲苯,狄晶删缠歧南新琴槐阅史伏想乘爪羊夜微闻凭隧蚜迸件屏善盅旷酒吼冠中实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色实验六 微生物的简单染色及革兰氏染色,
