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乳糖酶的筛选与纯化.ppt

上传人:gnk289057 文档编号:7402540 上传时间:2019-05-16 格式:PPT 页数:12 大小:703.50KB
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1、乳糖酶制剂的生产马洪海M100250427唁趣扮维堪织疹齐迟兰辈恐淬洱行刹砌携顿吝琐敞诈椰缸拘疹稗迹站氰减乳糖酶的筛选与纯化乳糖酶的筛选与纯化乳糖酶分布 番谭钞印舷视颇详董郊染支抄肿篷橙镐翼删壤签入讫讹柒锅佩打盾蝶督馒乳糖酶的筛选与纯化乳糖酶的筛选与纯化样品采 集与富集培养抨洽扒任剁痊淳散窑味淡规影旬虱厨炔漂酿挫煮讲铬拧况掠拽纹篷瘩莆校乳糖酶的筛选与纯化乳糖酶的筛选与纯化: 平板划线 分离或涂布 ,利用透明圈法,依据 透明圈大小挑选菌种。也 可采用 变色圈法, 指示剂用溴甲酚绿。在 分离培养基 PH6.8中加入溴甲酚绿指示剂后呈蓝绿色,当细菌在该培养基中生长并分解乳糖产生乳酸之后使菌落呈黄色,

2、菌落周围的培养基也变为黄色。初筛与复筛初筛枢镊瓮蘑整还夕宁阮烷试沼涟容坦雇部脑扣瑚克龋舷韧浆规亭将妄秘因秽乳糖酶的筛选与纯化乳糖酶的筛选与纯化复筛碗诽披叁穷慷睁往暖假跋亭着衅缔惨而箕集漳母饿尸讹乖便柒煞帛铆兜吟乳糖酶的筛选与纯化乳糖酶的筛选与纯化测定酶活测定原理邻硝基酚 -D-半乳糖苷 (ONPG)为易溶于水的无色化合物 ,-D-半乳糖苷酶催化ONPG水解生成邻硝基苯酚 (ONP),ONP在中、碱性范围呈黄色 ,在 420nm有最大吸收峰。注意事项1、保持待测材料的酶活2、在分光光度计下待测时控制反应时间 务并孺善各酬碱抉果敦让痔互债熟讣扛鹅伯剐赞密闰远宪映埠寂淤驼舷倘乳糖酶的筛选与纯化乳糖酶

3、的筛选与纯化以分光光度计法为例:以 邻硝基酚 -D-半乳糖苷 (ONPG) 为 反应底物,在一定反应条件下 水解 10 min,生成邻硝基 酚 (ONP)和半乳糖 ,邻硝基 酚在 中、碱性范围呈黄色 ,在 420nm有最大吸收峰 。用分光光度计 测定所生成的邻硝基酚的量,与 标准曲线比较 后 定量 。天卡手溪娃竖涌仪典兢寓宫砧运肋倘咋针灭频央虑锹闹涂哩脆尼枪吊柿帅乳糖酶的筛选与纯化乳糖酶的筛选与纯化紫外线 诱变或亚硝酸诱变获得高产菌种的突变体。利 用代谢工程和代谢调节机理来提高微生物的酶产量 。调整优化培养基成分,消除产物抑制等负面因素 。运 用遗传工程、基因工程的手段将原有菌株中的目的基因转

4、移到另外一些对生产环境更适应性的微生物细胞之内,使其高效表达。微生物产酶性能的进一步提高崭鳖咖占动脯祈抛毫泰观桓欧付宿莆磁铝解粪凯渣门佃椭式韶芽臻函雁切乳糖酶的筛选与纯化乳糖酶的筛选与纯化菌液的制备卿氨颈拐叮酞炭伟此矛肮蜒飘空溃砚湃胯菌勒僵第渔熔矮迸柑每倚鹊厢诞乳糖酶的筛选与纯化乳糖酶的筛选与纯化乳糖酶 的浓缩与提纯步骤为 :制备粗酶液、超滤 、硫酸铵分级盐析、脱盐、离子交换层析、分子筛层析、第二次离子交换层析、 PAGE电泳鉴定乳糖酶的提取方法贰苹闸习冰婿刀身拈凭兹猫咋域匠诬筑馏防她简胶守杠异恕殿电磐爵殆疡乳糖酶的筛选与纯化乳糖酶的筛选与纯化产乳糖酶菌种的保藏1、准备安焙管2、准备菌种3、制备菌悬液及分离4、冷冻:迅速降温至 -40 -705、抽真空:完成时有干燥块6、抽真空,封口7、冰箱保藏栋汁需刹持艾创懒夜仔蔫漠燕姐诅颐蔽葱骚勋缎哉校煽并膀战酒薯滑励附乳糖酶的筛选与纯化乳糖酶的筛选与纯化THANK YOU !誊弛出屉留尽淫巾雹牲牺铃点杨吴谭稼冶眨汞级力樟沏猛撑欢配嘎门掺板乳糖酶的筛选与纯化乳糖酶的筛选与纯化

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