1、白细胞直方图解析第二军医大学长海医院实验诊断科凌 励随着基础医学的迅速发展，特别是计算机技术的广泛应用，血液分析仪的研制水平不断提高，检测原理不断完善。血液分析仪不但检测速度快，精确度高，操作简便，而且还能提供白细胞、红细胞、血小板的体积分析直方图，以直观反映细胞的大小分布情况，为检验师监控仪器工作状态，判断检验结果提供了强有力的工具。SYSMEX 三分类的血液分析仪一般都以电阻抗原理进行白细胞分类，仪器依据大多数正常形态的白细胞细胞在溶血素作用后的大小排列，人为设置了 4 个辨别线，将白细胞直方图划分三个区域，来辨别小白细胞、中白细胞和大白细胞。一白细胞直方图的基本概念1.电阻抗原理 根据血
2、细胞是非导电的性质，悬浮在电解质溶液中的血细胞颗粒，在通过检测小孔时可引起电阻的变化为基础，对血细胞进行计数和体积测量。2.直方图定义 以血细胞体积大小为横座标，不同体积的细胞出现的相对频率为纵座标，来描绘细胞群体分布情况的曲线图形称作血细胞直方图。3.白细胞直方图 在计数白细胞时，要加入溶血素使红细胞破坏，此时白细胞膜受到破坏，细胞浆流失，使白细胞体积大小发现变化，因此需要强调的是在白细胞直方图上细胞排列的顺序不是细胞的原始大小，而是经溶血液修饰的细胞大小。图 1，加入溶血素前的细胞大小GRANMOEOBASOLYMRBCPLT图 2.为加入溶血素后的细胞大小（在直方图上所示）二白细胞分类原
3、理（一）辨别线的设置1.低辨别线（LD）： 在 30 至 60fL 之间自动寻找最适位置。2.高辨别线（UD）：固定在 300fL ,用作粒度分布的异常监视。3.辨别线 1（T1）： 自动寻找从 LD 至 UD 之间白细胞分布曲线的波谷，第一波谷值设为“TROUGH”辨别线 1（T1） ，4. 辨别线 2（T2）： 自动寻找从 LD 至 UD 之间白细胞分布曲线的波谷，第二波谷值设为“TROUGH”辨别线 2（T2） 。（二）辨别线的作用1.对正常形态的白细胞进行粒度分类 从以下两图可以直观地看到白细胞分类情况。WL 与 T1 之间为 W-SCR，相当于 LYM%；T1 与 T2 之间为 W-
4、MCR%，相当于 MEX%（单核细胞、嗜酸细胞和嗜碱细胞之和， ） 。T2 与 WU 之间为 W-LCR%，相当于 NEUT%） 。2.监视白细胞粒度分布的情况，提供异常分布信息白细胞粒度分布正常时，白细胞直方图显示三峰性分布，在低辨别线（LD）与高辨别线（UD ）之间有两个谷值（T1）和（T2） 。当谷值辨别线不能设定，或在设定的辨别线位置的度数比规定值高时，将标有白细胞粒度分布异常警号。下面将白细胞分布异常的警号按优先顺序来介绍，当有两个以上的警号符合时，将标上优先顺序最高的警号。（1）WL ：低辨别线（ LD）的相对度数超过规定值。可能存在血小板聚集或较多的巨大血小板。（2）T1：当第一
5、谷值不能决定时。（3）T2：当第二谷值不能决定时。（4）F1：小白细胞分布异常。T1 的相对度数超过规定值。（5）F2：中白细胞分布异常。T1 或 T2 的相对度数超过规定值。（6）F3：大白细胞分布异常。T2 的相对度数超过规定值。（7）WU：高辨别线（UD）的相对度数超过规定值。可能为溶血不充分或存在较多的异常细胞所致。（8）AG：为小于 LD 的粒子数超过规定值。可能为血小板聚集所致。对血小板有异常警号。三白细胞粒度分布异常实例分析LD 度数高： （1）当 LD 度数高，存在 T1 和 T2 谷值的粒度分布时，WBC 的所有参数将标上警号 WL。常见于存在红细胞溶血不全，出现有核红细胞，
6、大血小板增多，血小板聚集，纤维蛋白析出等现象时。（2）当 LD 高，有 T1，没 T2 的粒度分布分布时，在 WBC、LYM%、LYM#结果上标有 WL，余分类结果不出现结果，但也有 WL 警号。T2 警号表示不能设定中间细胞与中性粒细胞之间的波谷鉴别线，常见于出现幼稚粒细胞、红细胞溶血不全，标本放置时间过长等情况。（3）当 LD 高，没有 T1、T2 的粒度分布时，仅出现 WBC 结果，并标有警号 WL，其他分类参数均不输出结果。（4）黄疸病人的特征性改变：由于黄疸病人红细胞膜上脂质含量增多，蛋白质含量减少，对溶血素的拮抗作用增加，因而使红细胞难于破碎。2. 没有 T1：不输出白细胞分类结果
7、，T1 警号表示不能设定淋巴细胞与中间细胞之间的波谷鉴别线，常见于出现幼稚粒细胞、红细胞溶血不全等情况。（1）没有 T1 的粒度分布时，除 WBC 结果输出并无警号外，其他分类参数均标有警号 T1，并不输出结果。（2）没有 T1，UD 超过规定值 WBC 结果输出并标有警号 WU，其他分类参数均标有警号 T1，并不输出结果。警号 WU 表示高鉴别线与白细胞直方图曲线交点高，提示存在红细胞溶血不全，出现幼稚粒细胞，白细胞聚集，血小板卫星现象等情况。3. 没有 T2（1）T1 高，T2 没有的粒度分布：WBC 结果无警号，LYM、LYM#结果标有警号 F1，余参数不输出结果，但标有警号 T2。警号
8、 F1 表示 T1 鉴别线位置上相对度数超过预定值。常见于存在幼稚粒细胞，单核细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞增高，红细胞溶血不全，标本放置时间过长等情况。（2）T1 高，T2 没有的粒度分布，UD 高：WBC 结果标有警号 WU，LYM、LYM#结果标有警号 F1，余参数不输出结果，但标有警号 T2。（3）T1 正常，没有 T2 的粒度分布：WBC、LYM、LYM#结果无警号，余参数不输出结果，但标有警号 T2。（4）T1 正常，没有 T2 的粒度分布，UD 高：WBC 结果标有警号 WU，LYM、LYM#结果无警号，余参数不输出结果，但标有警号 T2。4. T1 高（1）仅 T1 高的粒度分布
9、时：WBC、GRAN、GRAN#结果无警号，LYM%、LYM#结果标有警号F1，MXD 、 MXD结果标有警号 F2。警号 F2 表示 T1 或 T2 鉴别线位置上相对度数超过预定值。常见于存在原始细胞、幼稚粒细胞，单核细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞增高，红细胞溶血不全，标本放置时间过长等情况。（2）当 T1 高，UD 高时：WBC 结果标有警号 WU， LYM%、LYM#结果标有警号F1，MXD 、 MXD结果标有警号 F2，GRAN、GRAN#结果标有警号 F3。（3）T1 高，T2 高时：WBC 结果没有警号， LYM%、 LYM#结果标有警号 F1，MXD、MXD 结果标有警号 F2，G
10、RAN 、GRAN#结果标有警号 F3。（4）T1 高，T2 高，UD 高：WBC 结果标有警号 WU， LYM%、LYM#结果标有警号F1，MXD 、 MXD结果标有警号 F2，GRAN、GRAN#结果标有警号 F3。警号 F3 表示 T2 鉴别线位置上相对度数超过预定值。常见于存在幼稚粒细胞，单核细胞、嗜酸性细胞、嗜碱性细胞增高，红细胞溶血不全，标本放置时间过长等情况。5. T2 高（1）仅 T2 高的粒度分布时：WBC、 LYM%、LYM#结果没有警号，MXD、MXD 结果标有警号F2，GRAN 、 GRAN#结果标有警号 F3。（2）当 T2 高，UD 高时：WBC 结果标有警号 WU
11、， LYM%、LYM#结果无警号，MXD、MXD 结果标有警号 F2，GRAN 、GRAN#结果标有警号 F3。6. UD 高：WBC 结果标有警号 WU，余参数的结果都没有警号。（7）LD 以下的粒子数增多：PLT 结果标有警号 AG。四小结1. 结果不输出： T1 负责监视淋巴细胞区域和中间细胞区域，T2 负责中间细胞区域和中性粒细胞区域，当白细胞粒度分布的曲线异常，仪器在该分布曲线上找不到谷低 T1 或 T2，或 T1、T2 同时找不到时，T1和 T2 辨别线负责监视的细胞群结果就不输出。2. 引起白细胞直方图异常原因分析（1）病理因素：白细胞直方图的变化，可反映血液中白细胞群体的改变，
12、但这种变化没有特异性，引起血液学变化的病因不同，但其白细胞直方图的变化相近，因此出现的提示警号就是给检验师的命令，要求我们进行显微镜复查血涂片。（2）非病理因素：（a）仪器因素：凡影响细胞脉冲信号的因素，都可以使白细胞直方图发生变化，除血细胞自身体积大小外，其他如仪器的阈值、孔电压和脉冲的增益都与脉冲大小有关。（b）试剂因素：试剂的性能好坏可直接影响细胞直方图的变化，如稀释液的电导率、渗透压、离子强度；溶血剂的种类、浓度、用量和溶血时间，都会产生干扰，使细胞直方图发生改变，因此应强调使用原装配套的稀释液和溶血剂。另外抗凝剂的种类和浓度也会影响细胞直方图，通常应选用 EDTA-K ，1.5-2.0mg 抗凝剂抗凝 1.0ml 全血。（c）样本放置时间：一般认为样本应在采集后 20 分钟至二个小时内检测。若放置时间过短，可能存在血小板没有完全解离、抗凝剂未完全溶解等情况。若放置时间过长，则易引起细胞的变形，尤其是一些免疫功能亢进的病人，其淋巴细胞容易变成异型淋巴细胞，从而使白细胞直方图变形。
