SOX4单克隆抗体的制备.doc

1、 生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2009, February 25; 25(2): 257-262 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000- 2009 Institute of Microbiology, CAS Accepted: December 3, 2008Supported by: National High Technology Research and Development Program (863 Program) (No. 2006AA02A245), National Natural Science

2、Foundation of China (No. 30771981), and Natural Science Foundation of Beijing (No. 7082070).Corresponding author: Ning Guo. Tel: +86-10-68213039; E-mail: 国 家 高 技 术 研 究 与 发 展 项 目 (863 计 划 ) (No. 2006AA02A245), 国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 (No. 30771981), 北 京 市 自 然 科 学 基 金 项 目 (No. 7082070)资 助 。医 学 与 免 疫 生 物 技

3、 术 SOX4 单克隆抗体的制备及其在肿瘤细胞表达分析中的应用于 鸣 1, 穆 蕊 2, 吕 明 1, 李 爱 玲 2, 郭 宁 11 军 事 医 学 科 学 院 基 础 医 学 研 究 所 细 胞 免 疫 学 研 究 室 , 北 京 1008502 国 家 生 物 医 学 分 析 中 心 , 北 京 100850摘 要 : 应 用 分 子 生 物 学 技 术 , 构 建 了 含 SOX4 编 码 序 列 的 原 核 表 达 载 体 , 在 大 肠 杆 菌 DH5中 获 得 了 GST-SOX4 融合 蛋 白 的 可 溶 性 表 达 。应 用 谷 胱 甘 肽 -Sepharose 4B 对 重

4、 组 蛋 白 进 行 了 纯 化 , 利 用 纯 化 的 融 合 蛋 白 免 疫 小 鼠 , 制 备 了 可特 异 性 识 别 SOX4 的 单 克 隆 抗 体 。通 过 间 接 ELISA 法 鉴 定 了 抗 体 的 效 价 为 1 105, Western blotting 分 析 证 实 了 抗 体的 特 异 性 。结 果 显 示 , 该 抗 体 可 识 别 细 胞 内 外 源 性 过 表 达 及 内 源 性 的 SOX4 蛋 白 。在 培 养 细 胞 系 、小 鼠 不 同 组 织 中 , SOX4 蛋 白 的 表 达 存 在 显 著 的 差 异 。本 研 究 制 备 的 SOX4 单

5、克 隆 抗 体 具 有 良 好 的 特 异 性 , 为 进 一 步 研 究 SOX4 在 肿 瘤 发生 中 的 作 用 提 供 了 重 要 的 工 具 。关 键 词 : SOX4, 融 合 蛋 白 , 单 克 隆 抗 体 , 肿 瘤 发 生Preparation of the monoclonal antibody against SOX4protein and detection of SOX4 expression level indifferent tumor cell linesMing Yu1, Rui Mu2, Ming L1, Ailing Li2, and Ning Guo11

6、 Department of Molecular Immunology, Institute of Basic Medical Sciences, Academy of Military Medical Sciences, Beijing 100850, China2 National Center of Biomedical Analysis, Beijing 100850, ChinaAbstract: In the present study, we constructed a prokaryotic expression vector containing SOX4 protein e

7、ncoding sequences. The GST-SOX4 soluble protein was expressed in Escherichia coli DH5 and purified by glutathione sepharose-4B. The purified recombinant protein was used to immunize Balb/C mice and the monoclonal antibody against SOX4 was prepared by using hybridoma technique. The titer of the antib

8、ody was determined as 1105 by indirect ELISA. The specificity of the antibody was verified by Western blotting analysis. The monoclonal antibody specifically recognized the overexpressed exogenous SOX4 protein as well as endogenous SOX4 protein. The expression level of SOX4 protein in different cell

9、 lines and mouse tissues was detected by using the antibody. Differential expression of the protein was demonstrated by Western blotting. The data indicated that the antibody was specific. The antibody can be used as an important tool for further exploration of the role of SOX4 in tumorigenesis.眉 题

10、1JKeywords: SOX4 protein, fusion protein, monoclonal antibody, tumorigenesisSOX 是 一 类 SRY (Sex determination region of Y chomosome)相 关 基 因 构 成 的 控 制 发 育 的 基 因 家 族 , 在 不 同 进 化 地 位 物 种 中 具 有 高 度 的 同 源 性 , 编 码 一组 在 结 构 上 与 SRY 相 关 的 转 录 因 子 。 该 转 录 因 子 家族 所 有 成 员 的 共 同 特 点 是 含 有 一 个 高 度 保 守 的HMG 盒 (Hig

11、h mobility group box) DNA 结 合 结 构域 , 称 为 SOX (SRY-related HMG-box)。 SOX4 是 SOX 家 族 成 员 之 一 , 在 许 多 进 化 过 程 中 发 挥 重 要 的作 用 , 如 胚 胎 期 心 脏 发 育 、 神 经 系 统 发 育 和 胸 腺 发育 等 。 SOX4(-/-) 小 鼠 由 于 心 内 膜 嵴 发 育 不 完 全 , 在 胚 胎 期 14 天 可 因 循 环 衰 竭 而 死 亡 1。 此 外 , SOX4 还 参 与 早 期 B 细 胞 、 胰 腺 以 及 骨 骼 26等 系统 的 发 育 过 程 。 近

12、 年 来 , 越 来 越 多 的 研 究 发 现 , SOX4 在 许 多 肿 瘤 细 胞 中 高 表 达 , 包 括 肺 癌 、 乳 腺癌 、 肝 癌 、 结 肠 癌 、 前 列 腺 癌 、 膀 胱 癌 等 , 提 示 SOX4 可 能 也 参 与 肿 瘤 的 生 长 调 控 过 程 , 与 肿 瘤 的发 生 、 发 展 以 及 预 后 相 关 711。 然 而 , SOX4 在 肿 瘤发 生 中 发 挥 的 作 用 至 今 仍 未 完 全 阐 明 , 其 调 控 的 靶基 因 以 及 与 其 相 互 作 用 的 蛋 白 仍 有 待 进 一 步 发 现 。为 探 索 SOX4 在 肿 瘤 发

13、 生 发 展 中 的 分 子 机 制 , 本 研 究 通 过 分 子 生 物 学 技 术 , 构 建 了 GST-SOX4 融合 基 因 , 在 原 核 细 胞 中 获 得 了 融 合 蛋 白 的 可 溶 性 表达 。 应 用 谷 胱 甘 肽 -Sepharose 4B, 纯 化 了 GST-SOX4 融 合 蛋 白 。 用 纯 化 的 融 合 蛋 白 免 疫 小 鼠 , 筛选 并 获 得 可 特 异 性 识 别 SOX4 的 单 克 隆 抗 体 , 进 一步 利 用 该 抗 体 检 测 了 SOX4 在 不 同 肿 瘤 细 胞 系 、 正常 小 鼠 的 不 同 组 织 、 人 肺 癌 旁 及

14、 肿 瘤 组 织 中 的 表 达 。1 材 料 与 方 法1.1 质 粒 、 菌 株 、 细 胞 与 动 物含 人 源 SOX4(130344 aa)编 码 区 基 因 的 真 核 表达 载 体 pXJ40-Myc-SOX4(130344 aa)由 本 实 验 室克 隆 并 保 存 。 原 核 表 达 载 体 pGEX-KG-GST、 大 肠杆 菌 DH5、 小 鼠 骨 髓 瘤 细 胞 SP2/0 均 由 本 实 验 室保 存 。 雌 性 46 周 龄 SPF 级 BALB/c 小 鼠 由 军 事 医学 科 学 院 动 物 中 心 提 供 。1.2 生 化 试 剂限 制 性 内 切 酶 购 自

15、 NEB 公 司 , T4 DNA 连 接酶 购 自 Invitrogen 公 司 , PCR 回 收 试 剂 盒 、 质 粒 提取 试 剂 盒 均 购 自 Promega 公 司 , DNA 分 子 量 标 准 购自 TaKaRa 公 司 , 蛋 白 质 分 子 量 标 准 购 自 Fermentas 公 司 , 谷 胱 甘 肽 -Sepharose 4B-珠 子 购 自Amersham Pharmacia Biotech 公 司 。 完 全 弗 式 佐 剂 、不 完 全 弗 式 佐 剂 、 GSH(还 原 型 谷 胱 甘 肽 )、HAT、 HT 均 购 自 Sigma 公 司 。1.3 表

16、 达 载 体 的 构 建 及 鉴 定用 BamH I 和 Hind III 同 时 双 酶 切 质 粒 pXJ40- Myc-SOX4(130344 aa)及 原 核 表 达 载 体 pGEX-KG- GST, 经 琼 脂 糖 凝 胶 分 离 、 纯 化 目 的 片 段 , 在 T4 DNA 连 接 酶 的 作 用 下 连 接 。 用 连 接 产 物 转 化 大 肠杆 菌 DH5, 提 取 质 粒 DNA, 通 过 酶 切 鉴 定 重 组 阳性 克 隆 pGEX-KG-GST-SOX4(130344 aa)。1.4 GST-SOX4(130344 aa)融 合 蛋 白 的 诱 导 表 达将 p

17、GEX-KG-GST-SOX4(130344 aa) 表 达 载体 转 化 菌 接 种 于 5 mL LB 培 养 基 , 在 37oC 下 用 1 mol/L IPTG 诱 导 。 分 别 收 集 IPTG 诱 导 表 达 前后 的 菌 液 , 裂 解 后 用 SDS-PAGE 分 离 , 考 马 斯 亮 蓝染 色 , 分 析 融 合 蛋 白 的 诱 导 表 达 。 同 时 用 IPTG 诱导 pGEX-KG-GST 空 载 体 转 化 的 大 肠 杆 菌 DH5作 对 照 。1.5 GST-SOX4(130344 aa)融 合 蛋 白 的 纯 化将 pGEX-KG-GST-SOX4(130

18、344 aa)表 达 载 体转 化 的 DH5接 种 于 400 mL LB 培 养 基 中 , 用 0.1 mol/L IPTG 在 20oC 下 低 温 诱 导 表 达 。 收 集 菌 液超 声 后 , 用 谷 胱 甘 肽 -Sepharose 4B 进 行 重 组 蛋 白 的纯 化 。 纯 化 后 的 谷 胱 甘 肽 -Sepharose 4B-珠 子 经 过 GSH 洗 脱 , 获 得 GST-SOX4(130344 aa) 融 合 蛋 白 。将 融 合 蛋 白 真 空 冻 干 , 采 用 Bredford 法 进 行 蛋 白 定量 。1.6 SOX4 单 克 隆 抗 体 的 制 备将

19、 100 g GST-SOX4(130344 aa) 融 合 蛋 白 与弗 氏 完 全 佐 剂 充 分 乳 化 , 皮 下 注 射 46 周 龄 BALB/c 雌 性 小 鼠 。 首 次 免 疫 4 周 后 , 将 100 g GST-SOX4(130344 aa) 融 合 蛋 白 与 弗 氏 不 完 全 佐剂 充 分 乳 化 , 对 BALB/c 小 鼠 进 行 第 2 次 皮 下 注 射 。4 周 后 , 进 行 第 3 次 皮 下 注 射 。 于 第 3 次 免 疫 后 的第 15 天 , 经 尾 静 脉 采 血 , 用 ELISA 法 测 定 血 清 抗体 的 效 价 。 于 第 3

20、次 免 疫 4 周 后 , 实 施 加 强 免 疫 。加 强 免 疫 3 d 后 , 取 脾 细 胞 与 小 鼠 骨 髓 瘤 细 胞 株 SP2/0 细 胞 按 常 规 方 法 融 合 。 用 间 接 ELISA 法 筛选 , 有 限 稀 释 法 克 隆 化 , 并 按 常 规 方 法 制 备 鼠 单 抗 。1.7 SOX4 单 克 隆 抗 体 的 鉴 定采 用 间 接 ELISA 法 测 定 单 克 隆 抗 体 的 效 价 ; 通 过 Western blotting 鉴 定 抗 体 的 特 异 性 。 用pXJ40- Myc 空 载 体 和 pXJ40-Myc-SOX4 分 别 转 染 2

21、93T 细 胞 , 转 染 48 h 后 裂 解 细 胞 。 应 用 SDS-2 ISSN1000-3061 CN11-1998/Q Chin J Biotech February 25, 2009 Vol.25 No.2JPAGE 分 离 细 胞 裂 解 液 , 转 印 至 硝 酸 纤 维 素 膜 , Western blotting 分 析 抗 体 对 SOX4 蛋 白 的 识 别 。 一抗 分 别 采 用 抗 Myc 单 克 隆 抗 体 及 SOX4 单 克 隆 抗体 , 二 抗 为 辣 根 过 氧 化 物 酶 标 记 的 羊 抗 鼠 IgG, ECL显 色 。1.8 SOX4 蛋 白

22、在 不 同 肿 瘤 细 胞 系 中 的 表 达 分 析检 测 的 细 胞 包 括 ： 肝 癌 细 胞 HepG2、 乳 腺 癌细 胞 ZR-75-1、 MDA-231 和 MCF-7、 肺 癌 细 胞 H460、 结 肠 癌 细 胞 HCT116、 骨 肉 瘤 细 胞 U2OS、人 胚 肾 细 胞 HEK293 及 293T 细 胞 。 通 过 Western blotting 分 析 , 检 测 SOX4 蛋 白 在 不 同 细 胞 系 中 的 表达 。1.9 SOX4 蛋 白 在 不 同 小 鼠 组 织 和 人 肿 瘤 组 织 中的 表 达 分 析分 别 取 46 周 龄 BALB/c 小

23、 鼠 的 生 殖 腺 、 胸 腺 、脑 等 组 织 , 制 备 组 织 匀 浆 , 通 过 Western blotting 分析 , 检 测 SOX4 蛋 白 在 小 鼠 不 同 组 织 中 的 表 达 。 同时 采 集 3 对 人 肺 癌 及 癌 旁 组 织 样 品 , 通 过 Western blotting 分 析 , 检 测 人 癌 旁 及 肿 瘤 组 织 中 SOX4 蛋 白的 表 达 。2 结 果2.1 pGEX-KG-GST-SOX4(130344 aa)原 核 表 达载 体 的 构 建 及 鉴 定将 构 建 的 pGEX-KG-GST-SOX4(130344 aa) 原 核

24、表 达 载 体 用 BamH I 和 Hind III 双 酶 切 , 经 琼 脂糖 凝 胶 电 泳 分 析 , 可 见 酶 切 反 应 产 物 中 出 现 大 小 约为 640 bp 的 片 段 , 表 明 目 的 片 段 已 成 功 地 插 入 表 达载 体 (图 1)。 经 核 酸 序 列 测 定 , 证 实 插 入 片 段 为SOX4 编 码 序 列 , 且 序 列 完 全 正 确 。 用 该 表 达 载 体 转化 大 肠 杆 菌 DH5, 经 IPTG 诱 导 重 组 蛋 白 表 达 , 超声 裂 解 全 菌 后 , 通 过 SDS-PAGE 鉴 定 , 在 约 49 kD处 可 见

25、 预 期 分 子 量 大 小 的 条 带 , 证 实 GST-SOX4 (130344 aa) 融 合 蛋 白 在 转 化 菌 中 表 达 成 功 , 而 用IPTG 诱 导 pGEX-KG-GST 空 载 体 转 化 菌 则 未 见 此条 带 (图 2)。 进 一 步 通 过 对 转 化 菌 超 声 后 的 上 清 及 沉淀 进 行 分 析 , 发 现 表 达 产 物 存 在 于 转 化 菌 超 声 上 清中 , 表 明 重 组 蛋 白 以 可 溶 性 形 式 表 达 。2.2 重 组 蛋 白 的 纯 化在 小 量 诱 导 表 达 的 基 础 上 , 将 pGEX-KG-GST- SOX4(

26、130344 aa) 表 达 载 体 转 化 的 DH5接 种 于400 mL 培 养 基 , IPTG 诱 导 后 收 集 转 化 菌 超 声 上 清 , 用 谷 胱 甘 肽 -Sepharose 4B-珠 子 纯 化 GST-SOX4 (130344 aa) 融 合 蛋 白 , SDS-PAGE 分 析 结 果 见 图3。 通 过 洗 脱 、 冻 干 后 获 得 了 纯 化 的 GST-SOX4 (130344 aa) 重 组 蛋 白 。图 1 质 粒 pGEX-KG-SOX4(130344 aa)的 酶 切 鉴 定Fig. 1 Identification of the recombin

27、ant vector. pGEX-KG- SOX4(130344 aa) by restriction enzyme digestion. 1: before digestion; 2: after digestion; M: marker.图 2 融 合 蛋 白 的 小 量 诱 导 表 达Fig. 2 Expression of the fusion protein at a small scale by induction. 1: before induction for pGEX-KG; 2: after induction for pGEX-KG; 3: before inductio

28、n for pGEX-KG-SOX4 (130344 aa); 4: after induction for pGEX-KG-SOX4 (130344 aa); M: marker.图 3 重 组 蛋 白 的 大 量 诱 导 表 达 及 纯 化Fig. 3 Expression of the recombinant protein at a large scale by induction. 1: before induction for pGEX-KG-SOX4 (133344 aa); 于 鸣 等 : SOX4 单 克 隆 抗 体 的 制 备 及 其 在 肿 瘤 细 胞 表 达 分 析 中

29、 的 应 用 3J2: total protein after induction for pGEX-KG-SOX4 (133344 aa); 3: the supernatant after sonication; 4: the pellet after sonication; 5: the supernatant through glutathione- Sepharose 4B beads; 6: the glutathione-Sepharose 4B beads; M: marker.2.3 SOX4 单 克 隆 抗 体 特 性 的 鉴 定用 纯 化 的 重 组 蛋 白 免 疫 动

30、物 , 3 次 免 疫 后 分 离 脾细 胞 , 经 过 细 胞 融 合 、 筛 选 及 克 隆 化 , 获 得 2 株 能稳 定 分 泌 SOX4 单 抗 的 杂 交 瘤 细 胞 株 (20#、 21#)。应 用 间 接 ELISA 法 检 测 , 证 实 抗 体 的 效 价 均 为1105。进 一 步 用 含 SOX4 编 码 序 列 的 真 核 表 达 载 体 pXJ40-Myc-SOX4 转 染 293T 细 胞 , 应 用 抗 Myc 抗体 及 抗 SOX4 抗 体 检 测 外 源 转 染 的 SOX4 蛋 白 在转 染 细 胞 中 的 表 达 , 以 鉴 定 抗 体 的 特 异 性

31、 。 结 果 如图 4 所 示 , 用 抗 Myc 抗 体 可 在 转 染 的 293T 细 胞 中检 测 到 带 Myc 标 签 的 外 源 性 SOX4 蛋 白 ; 用 抗SOX4 单 抗 检 测 亦 可 见 相 应 分 子 量 大 小 的 蛋 白 条 带 , 而 在 转 染 pXJ40-Myc 空 载 体 的 细 胞 中 未 检 测 到 任 何条 带 (图 4)。 结 果 表 明 , 本 实 验 制 备 的 SOX4 单 克 隆抗 体 能 特 异 性 地 识 别 SOX4 蛋 白 。图 4 应 用 抗 SOX4 单 克 隆 抗 体 及 Western blotting 鉴 定外 源 性

32、SOX4 蛋 白 的 表 达Fig. 4 Expression of exogenous SOX4 protein identified by using anti-SOX4 monoclonal antibody and Western blotting.2.4 SOX4 蛋 白 在 不 同 培 养 细 胞 系 中 的 表 达应 用 抗 SOX4 抗 体 通 过 Western blotting 检 测 了不 同 培 养 细 胞 系 中 内 源 性 SOX4 蛋 白 的 表 达 , 选 择了 人 的 肿 瘤 细 胞 系 和 正 常 细 胞 株 , 包 括 肝 癌 细 胞HepG2、 乳 腺

33、癌 细 胞 ZR-75-1、 MDA-231、 MCF-7、 肺 癌 细 胞 H460、 结 肠 癌 细 胞 HCT116、 骨 肉 瘤细 胞 U2OS、 人 胚 肾 细 胞 HEK293 和 293T 细 胞 。结 果 显 示 , SOX4 在 MCF-7、 HCT116 和 293T 细 胞中 表 达 水 平 较 高 , 在 其 他 细 胞 系 中 未 检 测 到 SOX4 的 表 达 , 表 明 在 不 同 的 细 胞 系 中 SOX4 蛋 白 的 表 达存 在 显 著 的 差 异 (图 5)。2.5 SOX4 蛋 白 在 不 同 小 鼠 组 织 和 人 肿 瘤 组 织 中的 表 达进

34、一 步 应 用 抗 SOX4 蛋 白 的 单 克 隆 抗 体 及Western blotting, 检 测 分 析 了 小 鼠 不 同 组 织 中 (包 括脑 、 生 殖 腺 、 肺 、 肝 、 肾 等 组 织 ) SOX4 蛋 白 的 表达 谱 。 结 果 显 示 , SOX4 蛋 白 在 小 鼠 的 生 殖 腺 、 胸腺 、 脑 等 组 织 表 达 水 平 较 高 。 此 结 果 与 文 献 报 道 的 SOX4 组 织 特 异 性 表 达 部 位 基 本 一 致 26 (图 6)。 又采 集 了 3 对 人 肺 癌 及 癌 旁 组 织 样 品 , 应 用 已 制 备 的抗 SOX4 抗

35、体 检 测 了 SOX4 蛋 白 在 人 肿 瘤 及 癌 旁 组织 中 的 表 达 。 结 果 显 示 , 此 抗 体 既 可 识 别 人 源 组 织中 的 SOX4 蛋 白 , 又 可 识 别 鼠 源 SOX4 蛋 白 (图 7)。图 5 不 同 细 胞 系 中 SOX4 蛋 白 的 表 达Fig. 5 Expression of SOX4 protein in various cell lines.4 ISSN1000-3061 CN11-1998/Q Chin J Biotech February 25, 2009 Vol.25 No.2J图 6 SOX4 蛋 白 在 不 同 组 织 中

36、 的 表 达Fig. 6 Expression of SOX4 protein in various tissues.图 7 肺 癌 组 织 中 SOX4 蛋 白 的 表 达Fig. 7 Expression of SOX4 protein in lung cancer tissues.3 讨 论SOX4 的 复 杂 功 能 已 越 来 越 受 关 注 , 它 在 肿 瘤发 生 中 的 作 用 远 未 被 人 们 所 认 知 。 SOX4 的 特 异 性单 克 隆 抗 体 对 于 深 入 研 究 SOX4 的 功 能 、 它 的 相 互作 用 蛋 白 以 及 解 析 其 在 肿 瘤 调 控 中

37、 的 作 用 是 不 可 或缺 的 , 而 目 前 尚 无 商 品 化 的 SOX4 单 克 隆 抗 体 。 本研 究 应 用 分 子 克 隆 技 术 构 建 了 含 SOX4 编 码 序 列的 原 核 表 达 载 体 , 在 大 肠 杆 菌 DH5中 成 功 地 获 得了 GST-SOX4 重 组 蛋 白 的 可 溶 性 表 达 。 利 用 纯 化 的融 合 蛋 白 免 疫 小 鼠 , 通 过 细 胞 融 合 技 术 制 备 了 可 特异 性 识 别 SOX4 的 单 克 隆 抗 体 。 通 过 间 接 ELISA法 鉴 定 了 抗 体 的 效 价 , 应 用 Western blottin

38、g 分 析 了抗 体 的 特 异 性 , 证 实 本 实 验 制 备 的 抗 SOX4 单 抗 可识 别 外 源 性 SOX4 蛋 白 。 应 用 SOX4 单 抗 对 多 种不 同 的 培 养 细 胞 系 及 小 鼠 不 同 组 织 进 行 Western blotting 分 析 证 实 , 该 抗 体 亦 可 识 别 内 源 性 表 达 的 SOX4 蛋 白 。 检 测 结 果 亦 显 示 , 在 不 同 的 培 养 细 胞系 以 及 小 鼠 不 同 组 织 中 , SOX4 蛋 白 的 表 达 存 在 显著 的 差 异 。 对 不 同 肺 癌 及 癌 旁 组 织 样 品 的 Weste

39、rn blotting 分 析 结 果 显 示 , 此 抗 体 亦 可 识 别 人 组 织 中的 SOX4 蛋 白 。 据 文 献 报 道 711, SOX4 在 多 种 肿瘤 细 胞 中 高 表 达 。 Liao 等 12通 过 RT-PCR 的 方 法 , 检 测 了 6 种 肝 癌 细 胞 中 SOX4 的 mRNA 含 量 , 发 现各 种 不 同 的 肝 癌 细 胞 中 SOX4 mRNA 表 达 水 平 亦 不相 同 , 但 均 高 于 正 常 成 人 肝 组 织 。 应 用 抗 SOX4 抗体 初 步 检 测 了 人 肺 癌 及 癌 旁 组 织 中 SOX4 蛋 白 的 表达 ,

40、 在 3 例 人 肺 癌 样 品 中 有 2 例 呈 阳 性 反 应 。 为 进一 步 验 证 SOX4 在 癌 组 织 中 的 表 达 特 征 , 尚 需 收 集大 量 癌 组 织 、 癌 旁 组 织 及 正 常 组 织 进 行 分 析 。 总 之 , SOX4 特 异 性 单 克 隆 抗 体 的 制 备 为 在 蛋 白 水 平 上 研究 SOX4 在 肿 瘤 组 织 中 的 表 达 特 征 以 及 在 细 胞 分 化 、肿 瘤 发 生 等 生 命 过 程 中 的 作 用 提 供 了 重 要 的 工 具 。REFERENCES1 Schilham MW, Oosterwegel MA, Mo

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43、于 鸣 等 : SOX4 单 克 隆 抗 体 的 制 备 及 其 在 肿 瘤 细 胞 表 达 分 析 中 的 应 用 5J5 Wilson ME, Yang KY, Kalousova A, et al. The HMG box transcription factor SoX4 contributes to the development of the endocrine pancreas. Diabetes, 2005, 54(12): 34023409.6 Nissen-Meyer LS, Jemtland R, Gautvik VT, et al. Osteopenia decreas

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