1、葡萄籽中原花青素的提取分离和检测,朱鑫皓 赵桑霞,材料选取,？,葡萄籽在很多情况下被当做废弃物丢掉，但是葡萄籽中却有许多天然有效成分。,我们会用什么材料来提取其中的有效成份呢？,实验背景,葡萄籽是葡萄酒厂的下脚料，经晒干后分离葡萄皮、葡萄梗后所得产物。葡萄籽因其含有丰富各种氨基酸、维生素及矿物质等。原花青素，是一种有着特殊分子结构的生物类黄酮，是目前国际上公认的清除人体内自由基最有效的天然抗氧化剂。一般为红棕色粉末，气微、味涩，溶于水和大多有机溶剂。 原花青素（葡萄籽提取物）是一种新型高效抗氧化剂，是目前为止所发现的最强效的自由基清除剂，具有非常强的体内活性。实验证明，OPC的抗自由基氧化能力
2、是维生素E的50倍，维生素C的20倍，并吸收迅速完全，口服20分钟即可达到最高血液浓度，代谢半衰期达7小时之久。,黄酮类化合物的介绍,本项目中的原花青素就属于黄酮类化合物中的一种。黄酮类化合物具有抗氧化、抗癌、抗心血管疾病、抗病毒、免疫调节等多种生理功能及药理作用，其提取物已用于食品、药品、化妆品等产品中。,原花青素的介绍,原花青素，简称OPC，是一种有着特殊分子结构的生物类黄酮，是目前国际上公认的清除人体内自由基最有效的天然抗氧化剂。一般为红棕色粉末，气微、味涩，溶于水和大多有机溶剂。,原花青素的用途,由于原花青素属于黄酮类化合物，具有多种生理功能及药理作用。 随着研究人员对原花青素的研究一
3、步一步深入，发现原花青素的功效甚好，用途及其广泛。 原花青素的主要作用:抗氧化剂由于opc分子结构中有多个酚羟基B环上具有相邻二酚羟基，且分子中有几个与氧原子相邻的二羟酚基，有利于分子与金属离子及蛋白结合，阻止了催化自由基反应金的属离子的活性。所以是一种很强的抗氧化剂。,抗氧化剂工作示意图,其它主要作用,血液循环 视力保护 消除水肿 滋润皮肤 胆固醇 心脏保护剂 过敏发炎,静脉曲张 大脑功能 改善缺氧 经前综合症 保健功能 安全性能 化妆应用,原花青素的的应用现状,基于原花青素的生理功能和药理作用且属于天然产物安全性高，原花青素已被广泛应用于化妆品，保健品食品及药类等领域，日益受到人们的欢迎。
4、opc具有抗皱，防晒美白、收敛保湿、抗辐射等作用。法国利用低聚opc开发出脂质体微囊的晚霜、发乳和漱口水；美国开发出含低opc Dermaopc的产品，可预防皮肤衰老，使表皮细胞和血管得以修复，保护皮肤健康循环的功效。,原花青素的应用现状,opc亦可制作保健食品及添加剂，例如以其为主要成分制成的胶囊已成为美国畅销保健食品之一。国内对opc在食品上的应用也非常重视，如某酒业有限公司，发明了添加opc的保健酒等。,原花青素的经济价值,原花青素的经济价值体现在其具有如此之多生理功效和药理作用上。 根据部分保健食品的价格看 1瓶保健胶囊有60粒 250mg/粒 含有原花青素50mg/粒 价格是130元
5、左右 即130/（50*60）=43元/g 左右 所以原花青素带来的经济价值是很高的。 原花青素作为食品添加剂，医疗药物等也有很大的经济价值。 例如用于抗癌药物中，其经济价值就番了好几倍,实验目的和要求,掌握葡萄籽中原花青素的提取分离检测过程,进一步学习工艺设计,了解 原花青素的结构和主要理化性质,实验原理,原花青素又称缩合单宁，是自然界中广泛存在的聚多酚类化合物。葡萄籽原花青素一般采用有机溶剂提取，其产品含有少量溶剂残留，对人体有一定毒副作用，因此一般常选择乙醇为提取剂。乙醇提取的葡萄籽原花青素含有蛋白质、多糖、黄酮类化合物等杂质，可用大孔树脂进行纯化，提高葡萄籽原花青素的含量和纯度。,实验
6、试剂和仪器,试剂,仪器,粉碎机 电子天平 回流提取装置 离心机 旋转蒸发仪 喷雾干燥机 色谱柱 紫外分光光度计 烧杯 试管 移液管,葡萄籽 乙醇 大孔树脂 香草醛 甲醇 硫酸 盐酸 镁粉 原花青素标准品,实验方案,正交试验表 以确定最佳实验路线,实验方案,由各因素对原花青素提取效果的影响大小顺序为:提取温度(B)料液比(C)提取时间(D)乙醇体积分数(A),并由正交实验得出乙醇回流浸提法提取葡萄籽原花青素的优方案为:A2B2C3D2。综合单因素实验和正交实验结果,可以得出最佳工 艺条件为:乙醇体积分数为70% ,提取温50,料 液比为17 (g/mL),提取时间为30min,提取次数 为3次,
7、粉碎葡萄籽,工艺流程,称量,浓缩,合并上清液,浸提,喷雾干燥,过滤并离心,上柱洗脱,浓缩含量较高的洗脱液,实验步骤,提取,取粉碎后的葡萄籽20g 按料液比1:7加入 70%乙醇，在50下回流提取30min，浸提3次，分别过滤，冷却后在4 000 r/min转速离心10min，合并上清液，蒸发浓缩回收乙醇。,将浓缩好的样液进行喷雾干燥。,实验步骤,分离,干燥,大孔树脂柱层析:将浓缩液上样已经处理好的大孔树脂层析柱上,分别用水和20%、40%、60%、80%的2BV的乙醇洗脱，分别收集洗脱液，检测含量，合并含量较高的洗脱液，蒸发浓缩。,定性分析,将样品溶于1ml乙醇,加入少许镁粉振摇,滴加几滴浓盐
8、酸,1-2min内，观察颜色变化,盐酸镁粉反应,定量分析,2,标准曲线,配制0.050.5mg/mL的原花青素对照品水溶液，于试管中依次加入0.5mL不同浓度对照水溶液，加入2.5mL30g/L香草醛的甲醇溶液及2.5mL30%硫酸的甲醇溶液，混匀后于30水浴保温20min后在波长为500mn下测定绘制标准曲线。 线性方程为：Y=2.0669X-0.0196， R =0.9994,定量分析,取0.5mL样品水溶液，加入2.5mL加入2.5mL30g/L香草醛的甲醇溶液和2.5mL30%硫酸的甲醇溶液，30避光反应20min后测定A500,空白体系,样品体系,0.5mL水+2.5mL30g/L香草醛+2.5mL30%硫酸样品体系,小结,通过本次试验考试，我们进一步练习了查阅文献的能力，综合设计试验步骤的能力，团结协作能力。,thank you !,
