1、白僵菌侵染黄粉虫试验,李 益,1、目的要求 2、白僵菌的基本特征 3、侵染过程 4、实验用具和材料 5、实验步骤 6、作业,1、目的要求基本了解白僵菌的基本特征和侵染过程，并学习掌握白僵菌的毒力测定方法，比较不同白僵菌的不同浓度毒力大小。,2、白僵菌的基本特征 白僵菌进行形态学比较研究，白僵菌在25恒温箱中培养 10 d 的菌落直径达到 2.029 cm，绒状至粉状；初为白色，稍后或变成微黄色、微红色；背面微黄色。,分生孢子梗单生或轮生，后形成产孢细胞后者多为球形，有时呈瓶状的圆柱形，弯曲或正直，其顶端延伸变细且弯曲而呈“之”字形的纤维状。在弯曲处长出很短的小梗其上产生分生孢子。,3、侵染过程
2、,a、分生孢子附着在寄主的表皮上（7h）；b、大量分生孢子萌发产生芽管和附着胞(22h)；c、菌体穿透到寄主表皮层中（28h），伴随着组织溶解（酶的机制），在穿透菌丝的附近，寄主表皮层的片层结构发生变形（机械性）；d、菌丝在表皮层内常平行于片层结构延伸，形成穿透菌丝；e、菌体从表皮层进入到皮细胞层中，随后进入血腔，并在血腔内大量增殖，寄主组织逐渐解体；f、在寄主死体内产生有活力的孢子，并可再侵染,分生孢子附着 在寄主表皮上（7h）,大量分生孢子萌发 产生芽管和附着胞(22h),菌体穿透到 寄主表皮层中（28h），,菌体从表皮层进入到 皮细胞层中，随后进入血腔,并在血腔内大量增殖， 寄主组织逐渐
3、解体,在寄主死体内产生有活力 的孢子，并可再侵染,3、侵染过程,4、实验用具和材料,实验用具：灭菌培养皿、灭菌滤纸、无菌水、灭菌试管、灭菌镊子、微量移液枪、显微镜、恒温培养箱。实验材料：白僵菌 （Beauveria bassiana ）Bb-10-12 、成品白僵菌、0.1%吐温80湿润剂的0.003 mol/L KH2PO4缓冲液。,5、试验步骤,1、将-4保存的白僵菌251、相对湿度80%10%下用PDA培养基扩繁培养7天左右。 2、带完全产孢后，用含0.1%吐温80湿润剂的0.003 mol/L KH2PO4缓冲液将分生孢子粉湿润、洗脱，磁力搅拌器搅拌混匀，并过滤除去菌丝和杂质。 3、用
4、血球计数板在显微镜下计数孢子数，测出其浓度，再用无菌水分别稀释成孢子浓度梯度为109、108个/mL的悬浮液备用。,4、采用浸渍法将黄粉虫虫体浸入孢子悬浮液中1秒，对照组浸渍无菌水处理。 5、浸渍后放于灭菌滤纸上爬行尽快吸干其身上多余的悬浮液，吸干后把试虫放入培养皿中，（251）、相对湿度80%10%饲养。 6、每个处理浓度3个重复，每个重复5头（2个浓度用虫）。 7、施药后每3d记录一次死虫数，连续调查5次。将死虫挑出保湿培养，记录僵虫数。,8、结果统计：,毒力结果记录表,将算出各处理（浓度）的校正死亡率换算成机率值，并与时间算出致死中时间（LD50）。,6、 作业,1、将实验结果整理写在实验报告上。 2、白僵菌有什么特点，侵染机理是什么？被白僵菌侵染后试虫有什么症状？ 3、用浸渍法进行白僵菌毒力测定实验，毒力大小是以什么方法进行评定？ 4、并结合自己所学知识说说真菌药剂和化学药剂有什么不同？,
