1、适用班级：授课时间：指导教师：普鲁卡因 LD50的测定【目的要求】 通过实验了解测定药物 LD50 的方法、步骤和计算过程。【实验用品】仪器：注射器、针头、鼠笼、天平动物：小鼠 体重 1725g（各半，应注明性别，实验前禁食 12h，不禁水）药品：2%普鲁卡因溶液【方法】（1）探索剂量范围取小鼠 810 只，2 只为一组，分成 45 组，选择组距较大的一系列剂量，分别按组腹腔注射普鲁卡因溶液，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起 0%及 100%死亡剂量的所在范围（参考剂量 164mg/kg，最大剂量 250mg/kg） 。（2）进行正式实验在预初实验所获得的 0%和 100%致死量的范围内，
2、选用几个剂量（一般用 35个剂量，按等比级数增减，相邻剂量之间呈 1：0.8 或 1：0.7） 。尽可能使半数组的死亡率都在 50%以上，另半数组的死亡率都在 50%以下。各组的动物数应相等或相差无几，每组 10 只，动物的体重和性别要分层随机均匀分配。完成动物分组和剂量计算后按组腹腔注射给药。最好先从中剂量组开始，以便能从最初几组动物接受药物后的反应来判断两端的剂量是否合适，否则可随时进行调整。（3）统计实验结果给药后经过一定时间，清点各组的死亡小鼠数。用改良寇氏法计算普鲁卡因的LD50。（4）课堂实验将结果用改良寇氏法计算 LD50。取小鼠 50 只，随机分成 5 组，按表中剂量分组给药，
3、腹腔注射 2%盐酸普鲁卡因，观察并记录表中项目，小鼠注射 12min 出现中枢兴奋，后转为抑制，最后死亡。不死者一般在 1520min 内恢复正常，故观察 30min 内死亡即可，将结果列入实验表 1。实验表 1 普鲁卡因急性毒性实验数据表组别小鼠（只） 剂量（mg/kg）lgD（X） 死亡数（只）死亡率（P，%）1 10 250 2.39792 10 225 2.35223 10 203 2.30754 10 182 2.26015 10 164 2.2148【结果分析】 用改进寇氏法计算 LD50。【计算方法】LD50=lg-1X m-i（P-0.5） 式中 Xm 为最大剂量的对数值;i
4、为相邻两组对数剂量的差值(大剂量组减小剂量组 );P 为各组动物的死亡率(以小数表示);P 为各组动物死亡率的总和 (P1+P2+P3+ ) LD 50 的标准误;Slg LD50=i（P-P 2）/ （n-1）式中 S 为标准误；lg LD50 为 LD50 的对数值；P 2 为各组动物死亡率平方之和； n 为每组的动物数。LD50 的平均可信限= LD 504.5 Slg LD50LD50（P=0.05）或 LD50 的平均可信限= LD 505.9 Slg LD50LD50（P=0.01）【讨论题】（1）实验时为何动物要按其体重分层随机分配？（2）LD 50 的测定为何常用动物死亡作为判断药物毒性的指标？
