1、1动物细胞工程综合设计实验 一、 实验目的 1 了解动物细胞培养基本设备、器材、实验室设计及实验规则。 2 掌握动物细胞培养常用液体配制方法。 3 掌握细胞传代技术。 4 学习动物细胞形态观察及活性测得方法。 二、 实验内容 （见下具体实验） 三 实验报告：1 完成细胞培养常用培养液配制2 完成细胞传代操作，并写出细胞传代步骤和注意事项。3 用柱状图表示 MTT 法测定黄花蒿植物浸出液对细胞的 IC50 。4 计数活细胞百分率。实验 1 动物细胞培养液的配制（参考细胞工程试验教程 P 100）需要配制的动物细胞培养液包括：一、无血清培养基的配制 二、D-hanks 细胞平衡液的配制 三、细胞消
2、化液的配制 四、双抗溶液的配制 无血清培养基的配制 （各组配制 100ml）无血清培养基(RPMI-1640): 是不需要添加血清就可以维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。2大量组分：按照以上配方，称取所需量加入 1000ml 去离子水即可。20 种氨基酸混合溶液：已配备用，取量为 1ml 加入 1000 培养液即可。维生素溶液：已配制成母液，各种微生物母液取量 1ml 加入 1000 培养液即可。D-Hanks 细胞平衡液的配制 （每组配制 100ml）D-Hanks 溶液是生物医学实验中最常用的无机盐溶液和平衡盐溶液。主要用于配制配制培养液，稀释剂和细胞清洗液，而不能单独作为细胞，
3、组织培养液。NaCl 160gMgSO47H2O 2gKCl 8gMg Cl26H2O 2gCaCl2 2.8g溶于 1000ml 双蒸水 细胞消化液的配制 （各组配制 10ml）0.25%胰蛋白酶细胞消化液：称量胰蛋白酶 0.25g 和 EDTA-Na 0.02g 溶于 100ml 的 D-Hanks溶液，磁力搅拌溶解后，0.22um 细菌过滤器过滤除菌。-20保存备用。双抗溶液配制 （已配，备用）（1）氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解 1g 氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至 10ml。分装成小份于-20贮存。常以25ug/ml50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。（2）链霉素（streptomycin）（50mg/ml）溶解 0.5g 链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至 10ml。分装成小份于-20贮存。常以 10ug/ml50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。实验要求：所有的细胞培养液配制完成后，分装少量于培养瓶中，置于 37培养箱中培养1-2 天，检查培养液是否污染。
