1、系 部：医学系专 业：护理学班 级：10 护理 C 班姓名学号：朱淑连10061153姓名学号：张文静10061146模拟药物敏感性试验 中山大学新华学院XINHUA COLLEGE OF SUN YAT-SEN UNIVERSITY医学微生物论文指导教师：龙北国、刘琼2019 年 5 月 6 日模拟药物敏感性试验张文静 10061146 护理 C 班朱淑连 10061153 护理 C 班【摘要】目前临床治疗当中大量滥用抗生素造成了耐药菌的产生，影响了临床治疗的效果。如何判断细菌的药敏试验，选用抗生素来治疗感染及预防耐药菌株的产生和扩散变得十分关键。 【引言】实验室中，进行细菌耐药性的实验要求
2、方法简单效果明显并且成本较低，滤纸片扩散法通过对分离纯化后的细菌在培养的的过程中加入抗生素滤纸片，观察抑菌圈的大小的直观方法来判断细菌的耐药性，不 同 的 抑 菌 药 物 的 抑 菌 圈 直 径 因 受 药 物 在 琼 脂 中 扩 散 速度 的 影 响 而 可 能 不 同 ， 抑 菌 圈 的 大 小 可 以 反 映 测 试 菌 对 药 物 的 敏感 程 度 。纸 片 扩 散 法 符合实验要，求故采取此类方法进行试验。【正文】1、材料与方法【材料】白色葡萄球菌菌液标本、金黄色葡萄球菌菌液标本、大肠杆菌菌液标本、痢疾杆菌菌液标本、MH 琼脂平板，青霉素、链霉素、庆大霉素的生理盐水滤纸片、酒精灯、火
3、机、记号笔、眼科镊子、碘酒棉球、酒精棉球、废物盘。1【方法】1.1 培养基制备 MH 琼脂（由南方医科大学医学微生物教研室赠）培养基制备 MH 琼脂（P H 7.27.4）倾注入直径为 9cm 的平皿中，厚度约为 4mm。临用时，半开盖平板，倒置于 35培养箱 1020 分钟是表面干燥。链球菌或其他较难生长的细菌可在上述培养基中加入 5%无菌脱纤维羊血。1.2 被检细菌菌液的制备（由中山大学新华学院医学微生物教研室提供）挑取单菌落 45 个，接种于 45ml 肉汤培养基内，置 35孵育 46 小时，使菌液达到或超过 1.5x108/ml 麦氏比浊管浓度。加入灭菌盐水，使其浓度与标准管一致。1.
4、3 被检细菌的接种 用无菌棉拭沾取新鲜菌液，涂布接种于 MH 琼脂平板表面，重复三次，每次将平板旋转 60 度，保证菌液均匀分布。盖好平皿，放置 5 分钟，待平板表面水分被琼脂完全吸收。1.4 贴抗菌纸片 用灭菌的眼科镊子夹取抗生素滤纸片（直径为6.35mm，每片吸水量约为 20l） ，分别贴在平板上。用镊尖压一下使其贴平。三张滤纸片成正三角形分布，纸片中心距平皿边缘约15mm。在平板上做好标记。将平板置 37培养 2448h。1.5 结果判断 如果细菌对药物敏感，则含该药物的滤纸片周围无细菌生长。无菌生长的区域称抑菌环。如细菌对该药物具有耐药2性，则无抑菌环或者抑菌环直径较小。记录并比较抑菌
5、环直径大小，判断细菌的敏感性。表一：常用药敏试验制片判断标准抑菌圈直径(mm)抗菌药物 纸片含药量耐药 中度敏感 敏感青霉素 G（葡萄球菌）10 单位 28 - 29链霉素 10 微克 11 1214 15庆大霉素 10 微克 12 1314 15注：表一：常用药敏试验制片判断标准表摘自医学微生物实验指导 刘琼 主编 中山大学新华学院 2011 年青霉素 G 批号 1105251 北京天坛药物生物技术开发公司庆大霉素 批号 1104151 北京天坛药物生物技术开发公司链霉素 批号 1105201 北京天坛药物生物技术开发公司32、结果2.1 菌落的特征1、 实验记录（图片）：（1）白色葡萄球菌
6、菌落：（2）金黄色葡萄球菌菌落：（3）大肠杆菌菌落：（4）痢疾杆菌菌落：注：上图培养皿上的“青”字附近的白色药片为青霉素 G， “庆”字附近的白色药片为庆大霉素， “链”字附近的白色药片为链霉素。12.2 测量、分析比较：表二：药敏试验结果记录（抑菌圈直径/mm）青霉素 链霉素 庆大霉素金黄色葡萄球菌 21 16 15白色葡萄球菌 29 26 30大肠杆菌 - 19 25痢疾杆菌 - 17 19表三：药敏试验结果分析青霉素 链霉素 庆大霉素金黄色葡萄球菌 +- + +白色葡萄球菌 + + +大肠杆菌 - + +痢疾杆菌 - + +注：耐药，中度敏感，敏感。2.3 结合整个实验内容，可以得到以下
7、结果：表四：菌落 形态 青霉素 链霉素 庆大霉素 结果金黄色葡糖球菌 革兰阳性球菌 + + + 对青霉素中度敏感或敏感白色葡萄球菌 革兰阳性球菌 + + + 对青霉素中度敏感或敏感大肠埃希菌 革兰阴性杆菌 - + + 对青霉素不敏感痢疾杆菌 革兰阴性杆菌 - + + 对青霉素不敏感2注：耐药，中度敏感，敏感。3、讨论3.1 四种细菌对链霉素、庆大霉素均敏感：本次的药敏试验中，链霉素和庆大霉素都属于氨基糖苷类药，都能够与细菌核糖体的 30S 亚基结合，干扰细菌蛋白质的合成，导致细菌死亡而形成抑菌圈。核糖体存在于细菌细胞质中，是细菌的基本结构，所以四种细菌均对链霉素、庆大霉素敏感。3.2 金黄色葡
8、萄球菌和白色葡萄球菌对青霉素中度敏感或敏感，大肠杆菌和痢疾杆菌对青霉素不敏感：青霉素属于 -内酰胺类抗生素，药理作用是干扰细菌细胞壁的合成。青霉素能竞争革兰阳性菌合成胞壁过程所需的转肽酶，从而抑制 5 肽桥与 4 肽侧链上 D-丙氨酸残基之间的联结，是细菌难以合成完整的细胞壁，导致细菌死亡，由此形成抑菌圈；但由于兰革阴性菌的外膜蛋白有屏障作用，能够抵抗许多化学药物的作用，阻止多种物质透过，所以对青霉素有较强的抵抗力。由此仅可以初步认为，金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌对青霉素中度敏感或敏感，大肠杆菌和痢疾杆菌对青霉素不敏感。实验注意事项：1 抗生素滤纸片的含药量可能不同，所以在判断结果时应该注意参照标准。2 结果的读取首先测量抑菌圈的直径，如果在允许的范围内，被检3菌结果才可信。3 挑选菌液菌落时注意不要挑错，否则造成实验错误。4 实验过程中要注意严格无菌操作，否则污染杂菌将对实验造成较大的干扰。5 菌落浓度也不同，影响抗生素的作用效果，故实验结果不能作最终的诊断依据。
