1、卵巢上皮性癌中酪氨酸激酶受体 B 的表达及意义作者：粟连秀,黎勇明,陈红秋单位：广西贵港市人民医院,广西医科大学第八附属医院,广西?贵港【摘要】目的:研究酪氨酸激酶受体 B(TrkB)在卵巢上皮性癌中的表达及其与临床病理特征的关系。方法 采用免疫组织化学方法对 10 例正常卵巢组织、17 例卵巢良性上皮性肿瘤组织、21例卵巢交界性上皮性肿瘤组织、60 例卵巢上皮性癌进行 TrkB检测。结果 TrkB 在卵巢上皮性癌中的阳性率与正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤及交界性卵巢肿瘤相比差异均有显著性(P0.05)。在卵巢上皮性癌中，TrkB 的表达与肿瘤的临床分期、组织的分化程度及有无淋巴结转移有关，临床分
2、期越晚、组织分化越差，TrkB 表达越高，有淋巴结转移组的表达率高于无淋巴结转移组(P0.05)。结论 TrkB 在卵巢上皮性癌的发生发展中起着重要作用。【关键词】 卵巢肿瘤;癌，原位;TrkB;免疫组织化学卵巢癌是女性生殖器官的三大恶性肿瘤之一，其发病率仅次于宫颈癌和子宫内膜癌，其病死率居各类妇科肿瘤的首位1。卵巢上皮性癌发生、发展的机制尚不完全清楚。研究表明2，3，酪氨酸激酶受体 B(tyrosine kinase receptors B，TrkB)可促进细胞增殖，并可促进肿瘤细胞的浸润和转移。我们采用免疫组织化学的方法检测 TrkB 在卵巢上皮性癌中的表达，探讨其表达与卵巢上皮性癌的发生
3、及其与各临床病理因素间的关系。1 资料和方法1.1 一般资料 收集我院病理科 2000 年 3 月2008 年 11月手术切除的存档蜡块，其中正常卵巢组织 10 例，卵巢良性上皮性肿瘤 17 例(其中浆液性囊腺瘤 10 例，黏液性囊腺瘤 7 例)，交界性卵巢上皮性肿瘤 21 例(其中交界性浆液性囊腺瘤 14 例，交界性黏液性囊腺瘤 7 例)，卵巢上皮性癌 60 例。卵巢上皮性癌患者年龄 3574 岁，平均 47 岁。按 FIGO2000 年标准分期：期 16 例，期 6 例，期 30 例，期 8 例;组织学分级：高分化 15 例，中分化 13 例，低分化 32 例;组织学类型：浆液性癌 33
4、例，黏液性癌 15 例，透明细胞癌 7 例，子宫内膜样癌 5例。所有患者术前均未接受任何放、化疗。所有标本均经病理证实。1.2 主要试剂 兔抗人 TrkB 多克隆抗体购自上海太阳生物技术公司。即用型快捷免疫组化 MaxVisionTM 试剂盒及 DAB 显色剂均为福州迈新生物技术公司产品。1.3 方法 采用快捷免疫组织化学 MaxVisionTM 法。严格按照产品的操作说明操作。具体染色步骤：石蜡切片脱蜡和水化后，用 PBS(pH7.4)冲洗 3 次，每次 3min。高温高压抗原修复。3%H2O2 室温下孵育 10min，以阻断内源性过氧化物酶的活性。PBS 冲洗 3 次，每次 3min，除去
5、 PBS 液。分别滴加TrkB 一抗工作液，室温下孵育 60min。PBS 冲洗 3 次，每次5min，除去 PBS 液，每张切片加 1 滴即用型 MaxVisionTM 试剂，室温下孵育 15min。PBS 冲洗 3 次，每次 3min。除去 PBS 液，每张切片加 2 滴新鲜配制的 DAB 溶液，显微镜下观察 5min。自来水冲洗，苏木素复染，自来水冲洗返蓝，梯度酒精脱水干燥，中性树胶封固。用试剂公司提供的 TrkB 阳性的组织切片做阳性对照，以 PBS 代替-抗做阴性对照。1.4 结果判断 TrkB 免疫染色阳性物质呈黄-棕黄色颗粒，TrkB 在胞浆与胞膜均着色，结果评分采用双盲法(两名
6、病理医生独立阅片)，在 1040 倍光镜下随机选取 5 个视野，每个视野计数 100 个细胞，以阳性细胞的百分数及染色强度来判定4：无阳性细胞染色为 0 分;1 分(阳性细胞占 1%10%);2分(阳性细胞10%50%);3 分(阳性细胞50%75%);4 分(阳性细胞75%100%)。以阳性细胞染色强弱：细胞染色强度分为 0 分(阴性)，1 分(弱，淡黄色)，2 分(中，棕黄色)，3 分(强，棕褐色)。两项的乘积2 分定为阳性，01 分为阴性。1.5 统计学分析 用 SPSS 13.0 统计软件包进行分析，各组之间率的比较采用2 检验及四格表确切概率法检验，P0.05 表示差异有显著性。2
7、结果2.1 TrkB 表达情况 在正常卵巢组织、卵巢良性上皮性肿瘤组织、卵巢交界性上皮性肿瘤组织和卵巢上皮性癌中，TrkB阳性率分别为 0%、0%、19.05%(4/21)和 71.67%(43/60)。TrkB在卵巢癌组中的阳性率与交界性肿瘤组、正常卵巢组和良性肿瘤组相比，差异均有高度显著性(2 分别为17.68、15.68、27.59，P0.01);交界性肿瘤组与正常卵巢组和良性肿瘤组相比差异无显著性(2 分别为0.28、0.11，P0.05);而正常卵巢组与良性肿瘤组织未见TrkB 的表达(P0.05)。2.2 TrkB 的表达与卵巢癌临床病理特征的关系 卵巢癌组织中 TrkB 表达与患
8、者年龄、肿瘤部位、组织学类型无明显关系(P0.05)。而与肿瘤细胞的分化程度、临床分期及有无淋巴结转移有关，随着肿瘤细胞分化程度下降，TrkB 表达增加;临床、期病例中 TrkB 阳性率明显高于临床、期病例;有淋巴结转移病例 TrkB 阳性率明显高于无淋巴结转移病例(P0.05 或 P0.01)，见表 1。表 1 TrkB 表达与卵巢癌临床病理特征的关系3 讨论TrkB 是由 821 个氨基酸残基组成的高度糖基化分子，胞外区包括一个由 32 个氨基酸组成的信号肽，它是由酪氨酸激酶原癌基因编码的一种神经营养因子高亲和力受体，与其配体 BDNF具有特异性的亲和力。TrkB 通过全长蛋白的过度表达发
9、生受体自动磷酸化而发生基础性激活，可通过激活 P13K/AKT 信号通路抑制上皮细胞失巢凋亡和诱导其转移3。研究发现，TrkB 在多种恶性肿瘤(如神经母细胞瘤、胆管癌4、鼻咽癌5、乳腺癌等)中存在过度表达。本研究对正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤组织、卵巢交界性肿瘤组织及卵巢上皮性癌组织进行 TrkB 检测，结果显示，在正常卵巢组织和卵巢良性肿瘤组织中未见 TrkB 蛋白的表达，在卵巢交界性肿瘤组织和卵巢上皮性癌组织中存在 TrkB 蛋白的表达，并且上皮性卵巢癌组织中 TrkB 的阳性表达率明显高于卵巢交界性肿瘤组织(P0.05)，提示 TrkB 蛋白的过度表达可能与卵巢癌的发生有关。研究结果还显示
10、，上皮性卵巢癌中 TrkB 蛋白的表达与患者年龄、肿瘤部位、组织学类型无关，而与肿瘤细胞的分化程度、临床分期及有无淋巴结转移有关，随着肿瘤细胞分化程度下降，TrkB 表达增加;临床、期病例中 TrkB 阳性率明显高于临床、期病例;有淋巴结转移病例 TrkB 阳性率明显高于无淋巴结转移病例(P0.05)。从而提示 TrkB 可以作为卵巢上皮性癌患者预后的参考指标。【参考文献】1 Parkin DM, Bray F, Ferlay J, et al. Global cancer statistics J. CA Cancer J Clin,2005,55(2):74-108.2 Mcarty JH
11、, Feinstein SC. The TrkB receptor tyrosine kinase regulates cellular proliferation via signal transduction pathways involving SHC,PLC gamma and CBL J. Recept Signal Transduct Res,1999,19:953-974.3 Douma S, Van LT, Zevenhoven J, et al. Suppression of anoikis and induction of metastasis by the neurotrophic receptor TrkB J. Nature,2004,430:1034-1039.4 魏伟，汤恢焕，霍胜军，等.TrkB 在胆管癌中的表达及其临床意义J. 现代生物医学进展，2008，8(9)：1687-1689.5 赵卫民，温文胜，张哲，等.酪氨酸激酶受体 B 在鼻咽癌中的表达及临床意义J.临床耳鼻喉头颈外科杂志，2007，21(11)：497-500.申明：本论文版权归原刊发杂志社所有，我们转载的目的是用于学术交流与讨论，仅供参考不构成任何学术建议。
