1、开题报告- -车前草中黄酮类物质的超声萃取及其含量测定学 生： 李 华 化学与环境工程学院指导老师： 李水清 化学与环境工程学院1 题目来源指导老师指定2 研究的目的及意义车前草（Plantago asiatica L.）分布几遍全国，其主要功能：清热利尿；渗湿止泻；明目；祛痰。车前草功效作用：1.抗炎作用，2.对泌尿系统的影响，3.镇咳、平喘、祛痰，4.抗病原微生物，5.对胃、肠道作用。车前草的临床应用：1、治疗慢性气管炎，2、治疗急、慢性细菌性痢疾，3、治疗小儿单纯性消化不良，4、治疗高血压病，5、用于转正胎位，6、治疗颞下颌扰乱症。黄酮类化合物(Flavonoids)广泛存在于植物的各部
2、位，尤其是花、叶部位，其主要有黄酮糖苷和苷元两种形式。黄 酮 类 化 合 物 为 车 前 草 的 主 要 有 效 成 分之 一 ， 具有降血压、调血脂、防止血栓形成、防治心脑血管疾病、增强免疫、降低血管脆性、改善血液循环、抑制血小板聚集等功效。车前草中的黄酮类物质，其含 量 随 品 种 ， 产 地 ， 不 同 的 采 摘 时 间 而 不 同 。 在 不 同 因 素 条 件 下 ，对 车 前 草 黄 酮 的 含 量 进 行 考 察 具 有 很 大 的 研 究 意 义 。多年研究表明，车前草中的黄酮类物质具有扩血管、抗炎、镇痛、抗自由基、降血脂、抗肿瘤及抗白血病等作用。车前草的提取物中含有多种黄酮
3、类化合物, 还含有多种营养元素和微量元素，具有提高人体免疫机能、促进新陈代谢，增加智力、保持体力、消除疲劳，保护和健美皮肤等保健作用。因此，研究车前草中黄酮的提取方法有一定的医用、药用价值。黄酮类化合物的传统提取方法主要有水煎煮法、浸渍法和碱提酸沉法，缺点是费时、费工，且收率较低。其它一些提取方法还有：超临界流体萃取法，树脂法，酶法，微波法，高速逆流色谱技术提取法等。超声提取技术是由声学和中药化学相互交叉及渗透发展而来，应用于医药、化学、油脂、食品等各个领域，特别在药材成分提取中显现出了其强大的生命力。研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高加速度、强烈空化效应、热效车前草中黄酮类物质的超声萃取
4、及其含量测定- -应、搅拌作用等，都可以加速药物有效成分进入溶剂，从而提高提取效率、缩短提取时间、节约溶剂，并且免去了高温对提取成分的破坏，能大大降低能耗，提高经济效益；此外，超声波还具有一定的杀菌作用，能保证萃取液不易变质。因此，超声提取技术是一种成熟且广泛应用的技术。车前草提取物在医药、食品、保健品及化妆品等领域的应用越来越多。黄酮类成分的含量作为衡量车前草提取物及其制剂质量的首要指标，其测定研究日益深入。为充分利用车前草植物资源，避免资源的浪费，探讨车前草总黄酮的提取及含量测定很有必要。本文采用超声提取法提取车前草中的黄酮，并用分光光度法测定其含量。3 阅读的主要参考文献及资料名称1 邬
5、方宁超声提取技术在现代中药中的应用J 中草药，2007，38（2）：3153162 万水昌，王志祥，乐龙，李菊超声提取技术在中药及天然产物提取中的应用 J西北药学杂志，2008，23 （1）：60623 钟玲，尹蓉莉，张仲林超声提取技术在中药提取中的研究进展J西南军医，2007，9（6）84874 秦梅颂超声提取技术在中药中的研究进展J 安徽农学通报，2010，16（13）：54565 王延峰，李延清，郝永红，等超声波提取银杏叶黄酮的研究J食品科学,2002，23(8)1661676 李松青，陆王行，许宁超声波提取分光光度法测定保健食品中总黄酮J中国卫生检验杂志，2007，17(2)：363.
6、7 宋岳,葛茂奎,沈洪宽,刘艳新.车前草饮片的鉴别及总黄酮的含量测定J.黑龙江医药科学.2008,31(2).8 刘艳辉,赵映. 车前草中黄酮类化合物的提取及其含量的测定J .湖南理工学院学报（自然科学版）,2009,22(2).9 高中松,彭密军,黄智敏,陈雪叶.车前草中总黄酮的提取研究J.现代农业科技,2006(9).10 林莺,张晓晖,于晓钧.3 种车前草穗中总黄酮含量的测定J.长春中医药大学学报, 2010(3).11 鲁建江,王莉,刘志勇.车前草中总黄酮的微波提取及含量测定J.中医药学报,2002,30(1).开题报告- -12 谭萍,李煜.3种车前草叶片总黄酮的含量测定J .江西中
7、医学院学报,2005,17(1).13 李丽,王晶,刘春明.车前草中一种黄酮化合物的电喷雾多级串联质谱研究J.长春师范学院学报（自然科学版）,2009,28(2).14 任贻军,周海,杨远荣,邓雪华.车前草的研究概况J .安徽农业科学, 2009(18).15 邓桂春,王鑫，赵丽艳，高虹，张娜，马进，臧树良分光光度法测定银杏叶中黄酮的含量J辽宁大学学报，2005，32（2）：10110416 王玮,王琳. 黄酮类化合物的研究进展J .沈阳医学院学报,2002, 4( 2) : 115.17 黄河胜, 马传庚, 陈志武 . 黄酮类化合物药理作用研究进展 J. 中国中药杂志,2000, 25( 1
8、0 ): 499.18 解海.车前草的理化性质和红外光谱特征J . 雁北师范学院学报,2006, 22(2) : 55- 57.19 宋岳, 葛茂奎, 沈洪宽, 等. 车前草饮片的鉴别及总黄酮的含量测定 J. 黑龙江医药科学, 2008, 31( 2): 81- 82.20 马海乐, 王超，葛根.总黄酮微波辅助萃取技术J .江苏大学学报,2005, 26( 2) :98101.21 薄南南，傅桦玉米须中总黄酮的提取及含量测定J首都师范大学学报,2009，30（4）：444722 黄锁义, 张婧萱, 程辉, 等. 超声波提取车前草总黄酮及鉴别J. 时珍国医国药, 2006, 17( 4): 55
9、7- 558.23 姚晓惠. 车前草药用功效与有效成分测定方法的研究进展J.安徽农业科学, 2007, 35(4): 1053- 1054, 1062.24 袁珂,简秀梅,孟江.车前草不同提取方法的比较研究J.中国现代应用药学, 1999(04).25 杜娜娜，盛良全，蒋雪月超声波法提取苦丁茶总黄酮含量的工艺J.光谱实验室，2011，28（3）：144714504 国内外现状、发展趋势与研究的主攻方向4.1 车前草的开发与应用车前草在全国分布十分广泛，蕴藏量巨大。它不仅是全国中药材市场中用量极大的一种中草药，还是染料工业的重要原料，居家饮食的滋补食品，还可以作为饮料进行研发和开发。车前草历年出
10、口东南亚和日本等国家和地区，在国内也是极畅销产品。人工种植大叶车前草，在目前技术前提下，亩收入在 1000 元以上，所需农车前草中黄酮类物质的超声萃取及其含量测定- -药、肥料、工程比种小麦、油菜少，经济效益却是种小麦的 3-4 倍。另外，茎叶也可晒干入药，还是牲畜的上好饲料，且一次种植，多年受益，是当前农业产业结构调整和替代小麦、油菜种植的又一较好项目，极具推广价值和市场前景。2000 年，由于车前子的短缺，车前子曾一度高达近百元每公斤。如今伴随着车前草人工规范化种植研究的深入进行，车前子亩产可高达 125-175 公斤，种植一次可收获两年。由于车前草具有很强的适应性，所以经济价值极高，市场
11、前景十分广阔。4.2 车前草中黄酮类物质的提取方法4.4 研究情况及研究方向车前草黄酮具有显著的药理活性，目前对车前草中黄酮的药理活性进行了广泛的研究。车前草中黄酮具有较强的清除活性氧自由基，抗脂质氧化的作用，能够调节超氧化物歧化酶，过氧化氢化酶，可预防和治疗与活性氧自由基有关的疾病，如心脑血管病，老年性痴呆，衰老，神经性疾病，帕金森病等；类黄酮是癌促进剂的拮抗物质，能消灭发癌因子，阻止癌细胞增生；车前草中黄酮并可镇痛，治疗糖尿病等疾病，对肝组织损伤具有保护作用。车前草中黄酮还具有扩血管、抗炎、镇痛、抗自由基、降血脂、抗肿瘤及抗白血病等作用。车前草的提取物中含有多种黄酮类化合物，还含有多种营养
12、元素和微量元素，具有提高人体免疫机能、促进新陈代谢，增加智力、保持体力、消除疲劳，保护和健美皮肤等保健作用。目前，车前草中黄酮的提取方法有溶剂提取法，超临界流体（SFE）萃取法，超声波辅助提取法，微波法，树脂法，酶法等。检测车前草中黄酮含量的方法主要有络合分光光度法，HPLCUV 法，气相色谱法，双波长吸收光度法，原子吸收光谱法，近红外光谱法，纸色谱法，库仑滴定法，毛细管电泳法等。车前草中黄酮的提取方法和含量检测方法还在不断完善和改进当中。车前草中总黄酮（FG）的研究正在不断深入拓展，其发展前景相当可观，必将会极大地改善人类生活，造福人类。5 主要研究内容、需重点研究的关键问题及解决思路（1）
13、 了解车前草黄酮的作用及用途；了解超声提取方法的工艺流程，优点及缺点，了解检测车前草黄酮含量的方法，及各自的优点和缺点。（2） 绘制出车前草黄酮的标准曲线，该曲线应具有很显著的相关性，并且车开题报告- -前草黄酮的吸光度和其浓度符合其线性范围。（3） 用加标回收试验对方法进行评价。（4） 研究的关键问题是提高车前草黄酮的提取率，和选择合适的检测方法。解决思路是：按照上述车前草中的黄酮类物质的提取方法和车前草黄酮含量检测技术对车前草进行研究分析。6 完成论文必须具备的工作条件及解决方法。6.1 仪器722S 型分光光度计，电子天平，容量瓶，移液管，KQ-300DE 型数控超声波清洗器，烘箱，研钵
14、，表面皿，玻璃棒，烧杯，普通漏斗。6.2 药品芦丁标准品，无水乙醇，硝酸铝，亚硝酸钠，氢氧化钠等试剂均为分析纯；蒸馏水。6.3 实验方案设计（1） 溶液的制备精密称取 2.000 g 车前草，置于 250 mL 具塞锥形瓶中，按料液比1:50（g/mL ）加入浓度为 60%的乙醇溶液，放入数控超声波清洗器中，在 100%功率下，超声提取 20 min。平行进行 4 组试验。（2） 提取液处理将提取液过滤，浓缩，用浓度 60%的乙醇定容到 50 mL 容量瓶中。（3） 对照品溶液的制备精密称取 12.30 mg 芦丁标准品，置 50 mL 容量瓶中，用浓度 60%的乙醇溶解并定容，4 储存。（4
15、） 绘制标准曲线精密吸取对照品溶液 1.0，2.0 ，3.0，4.0 ，5.0 和 6.0 mL，分别置于 50 mL容量瓶内，分别加入 1.4 mL NaNO2（5%） ，1.4 mL Al(NO3)3（10%）和 5 mL NaOH（1 mol/L）溶液，用 60%的乙醇定容，摇匀。以不加对照品溶液为空白对照，测定上述对照品溶液的吸光度。以进样量芦丁浓度（X）为横坐标，吸光度（Y ）为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。（5） 含量的测定由文献知，510nm 为测定波长。精密吸取提取液 2 mL，置于 50 mL 容量瓶车前草中黄酮类物质的超声萃取及其含量测定- -中，加入 1.4 mL
16、NaNO2（5%） ，1.4 mL Al(NO3)3（10%）和 5 mL NaOH（1 mol/L）溶液，用 60%的乙醇定容，摇匀。以不加提取液为空白对照，测出提取液的吸光度，在标准曲线上得出其浓度，算出黄酮含量。（6）计算黄酮提取率根据：黄酮提取率 = 提取黄酮量 / 样品质量 100% ，算出提取率。（7）加标回收加入与所算黄酮含量相等的芦丁，重复步骤（1） （不用平行 4 组） ， （2） ，（5 ） 。加入所算黄酮含量一半的芦丁，重复步骤（1） （不用平行 4 组） ， （2） ，（5 ） 。（8）计算回收率根据：回收率 =（加标试样值 - 试样值）/ 加标值，算出回收率。7 工作的主要阶段，进行及时间安排第一阶段:2013.122014.01：查找文献，初步拟定实验方案，撰写开题报告。第二阶段:2014.042014.05：进入实验室做实验，处理实验数据。第三阶段:2014.052014.06：补充实验数据，撰写论文。第四阶段:2014.06：修改论文，准备答辩。8 指导教师审查意见开题报告- -指导老师签名： 签 名 日 期： 年 月 日
